馮茜，曹勤，于俊才

南京中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院·江蘇省第二中醫(yī)院，南京210017

肝細(xì)胞癌(HCC)是消化系統(tǒng)常見的高發(fā)惡性腫瘤，發(fā)病機制復(fù)雜且不明確，治療難度大，病死率居惡性腫瘤第2位[1]。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是改善肝癌患者生存及提高療效的關(guān)鍵。分泌性蛋白Dikkopf-1(DKK1)是Wnt信號傳導(dǎo)通路的抑制因子，在多種腫瘤患者的血清中水平升高，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[2]。本研究探討HCC患者血清DKK1水平變化及意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2013年1～12月收治的HCC患者53例(HCC組)，均符合HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診；②病歷資料完整；③術(shù)前未接受其他抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性肝癌；②伴嚴(yán)重營養(yǎng)不良、精神障礙。其中，男39例，女14例；年齡36～81(53.7±3.9)歲；TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期25例，Ⅲ期3例，Ⅳ期2例。同期選擇肝硬化患者49例(LC組)，均符合肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①有慢性乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染史；②有門靜脈高壓的臨床表現(xiàn)，或有肝功能衰退的臨床表現(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝癌；②有精神障礙。其中，男32例，女17例；年齡21～79(50.7±3.6)歲。選擇慢性肝炎患者63例(HC組)，均符合病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①急性肝炎病程超過半年，或有乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、乙肝表面抗原攜帶史，此次又因同一病原出現(xiàn)肝炎癥狀體征，或?qū)е赂喂δ墚惓?；②發(fā)病日期不明，發(fā)病前無肝炎病史，但肝組織病理學(xué)檢查符合慢性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝癌、肝硬化；②有精神障礙。其中，男40例，女23例；年齡15～83(36.8±3.7)歲。選擇體檢健康志愿者60例(健康對照組)，男35例，女25例，年齡19～74(31.3±4.8)。以上各組性別、年齡具有可比性。本研究經(jīng)江蘇省第二中醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者及家屬簽署知情同意書。

1.2 血清DKK1、甲胎蛋白(AFP)檢測 各組均采集空腹靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，以4 000 r/min離心10 min，分離血清，置-80 ℃保存?zhèn)溆?。采用羅氏Cobas e411化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)檢測血清AFP，試劑盒由羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司提供；采用雙抗體夾心法檢測血清DKK1，試劑盒由上海撫生實業(yè)有限公司提供。以上均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。參考范圍：AFP>20.0 μg/L、DKK1>2.0 ng/mL為陽性。

1.3 隨訪 采用電話或入戶方式隨訪，HCC患者生存期從手術(shù)之日開始計算，終止日期為死亡或2019年7月1日，終點事件為患者因HCC復(fù)發(fā)或肝衰竭而死亡或行肝移植。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。各組數(shù)據(jù)正態(tài)性采用Kolmogorov-Smirnov檢驗，非正態(tài)分布計量資料采用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25～P75)]表示，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗，兩組間多重比較采用Mann-Whitney檢驗；Spearman等級相關(guān)分析DKK1與AFP的相關(guān)性；用Kaplan-Meier法計算生存率并繪制生存曲線，采用Log-rank檢驗進(jìn)行組間生存時間差異檢驗；單因素分析采用Kaplan-Meier，多因素分析采用Cox比例風(fēng)險回歸模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清DKK1、AFP水平比較 各組血清DKK1、AFP水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；組間兩兩比較，血清DKK1、AFP水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，HCC組血清DKK1、AFP水平最高(P均<0.05)。見表1。Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，HCC組血清DKK1水平與AFP水平呈正相關(guān)(r=0.602，P<0.05)。

表1 各組血清DKK1、AFP水平比較[M(P25～P75)]

2.2 血清DKK1水平與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系 血清DKK1水平與腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期有關(guān)(P均<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤直徑及血管侵犯無關(guān)(P均>0.05)，見表2。

2.3 血清DKK1水平與HCC患者預(yù)后的關(guān)系 對48例有完整隨訪記錄的術(shù)后HCC患者生存資料分析，血清DKK1≤2.0 ng/mL患者5年生存率為68.8%(33/48)，平均生存時間為42個月，中位生存時間為35個月；DKK1>2.0 ng/mL患者5年生存率為35.4%(17/48)，平均生存時間為23個月，中位生存時間為14個月。二者生存率、平均生存時間、中位生存時間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。

表2 血清DKK1水平與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系[ng/mL，M(P25～P75)]

2.4 HCC患者預(yù)后的影響因素 單因素分析結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、TNM分期、DKK1為HCC患者預(yù)后的影響因素(P均<0.05)；COX模型多因素分析結(jié)果顯示，DKK1水平升高為HCC患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05)，見表3。

3 討論

HCC易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，雖然其治療方法不斷發(fā)展，但尚未達(dá)到滿意效果，患者總體預(yù)后較差[5，6]。目前，多根據(jù)患者臨床病理特征，如腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)、TNM分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等對HCC預(yù)后進(jìn)行判斷，并制定相應(yīng)的后續(xù)治療方案。AFP、AFP異質(zhì)體、細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1、血清異常凝血酶原復(fù)合物等腫瘤標(biāo)志物可對HCC進(jìn)行早期診斷，但仍存在一定的局限性[7]。因此，迫切需要尋找新的血清學(xué)指標(biāo)以準(zhǔn)確預(yù)測HCC轉(zhuǎn)移及預(yù)后。

DKK1是一種分泌性蛋白，作為Wnt信號通路的拮抗劑，廣泛存在于腫瘤組織中，與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)[8,9]。然而，其生物學(xué)功能尚未完全明確，在腫瘤組織中的表達(dá)也多樣化。研究表明，DKK1在宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌組織中表達(dá)下調(diào)，作為一種抑癌因素抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，DKK1在胰腺癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)，作為一種促癌因素促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11]。

表3 HCC患者預(yù)后影響因素的單因素及多因素分析

本研究結(jié)果顯示,HCC組血清DKK1水平高于HC組、LC組及健康對照組，提示HCC的發(fā)生與DKK1密切相關(guān)。Shen等[12]通過蛋白組化法檢測HCC組織中DKK1表達(dá)，發(fā)現(xiàn)HCC組織中DKK1表達(dá)升高，與血清水平具有一致性，進(jìn)一步提示DKK1在HCC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了促癌基因的作用。此外，本研究通過Spearman等級相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，HCC患者血清DKK1水平與AFP水平呈正相關(guān)。提示HCC患者血清DKK1與AFP變化趨勢相似，說明血清DKK1在HCC的診斷中有重要價值。

本研究還分析了血清DKK1水平與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示HCC患者血清DKK1水平與腫瘤多發(fā)性結(jié)節(jié)、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，提示DKK1參與了HCC的發(fā)生發(fā)展過程，與國外文獻(xiàn)[13]報道一致。生存分析顯示，HCC患者術(shù)后血清DKK1≤2.0 ng/mL的患者5年生存率、平均生存時間、中位生存時間均大于DKK1>2.0 ng/mL的患者。說明血清DKK1水平在HCC病情進(jìn)展及預(yù)后判斷上也有一定意義。另外，本研究單因素及多因素分析結(jié)果顯示，血清DKK1是HCC患者預(yù)后的獨立影響因素，與相關(guān)研究[14]觀點相似。

綜上所述，血清DKK1水平對HCC的早期診斷、腫瘤進(jìn)展、療效監(jiān)測及預(yù)后判斷等均有一定的價值，有望成為治療和預(yù)防HCC的新型血清學(xué)標(biāo)志物。但本研究樣本偏少，隨訪時間較短，且主要從血清學(xué)方面對指標(biāo)進(jìn)行評價，過于單一。