劉彥哲，李 萍，吉尚志，晏 虹，金桂月，劉天堯，姜雨杉，王慧媛，鄭 璐

1.黑龍江省哈爾濱市血液中心，黑龍江哈爾濱 150056；2.新疆維吾爾自治區(qū)阿勒泰地區(qū)中心血站，新疆阿勒泰 836500；3.北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，北京 102206

近年來，隨著檢測技術日益革新和國家對血液安全篩查的日益重視[1]，核酸擴增技術(NAT) 以其高靈敏度，能顯著縮短病毒感染檢測窗口期，降低輸血傳播病毒風險[2]的優(yōu)勢，成為目前血液篩查的主要手段之一[3-4]。多重核酸[5]血液篩查試劑能在一支反應管中，同時檢測并區(qū)分乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人類免疫缺陷病毒(HIV)，憑借靈敏度高、特異性好、節(jié)約檢測成本、方便快捷等優(yōu)勢[6]，成為市場應用的主流類型試劑。

哈爾濱市血液中心有兩套多重核酸血液篩查檢測系統(tǒng)，一套為北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司的Wantag2.0系統(tǒng)，一套為羅氏診斷公司的Cobas S201全自動血液核酸篩查系統(tǒng)，通過比較這兩套系統(tǒng)在2018年1-10月的標本檢測數據，分析二者的差異及原因，現(xiàn)報道如下。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇2018 年1-10月哈爾濱市血液中心經ELISA 檢測結果HBV表面抗原(HBsAg)、HCV抗體(抗-HCV)和HIV抗原/抗體(HIV Ag /Ab)均為陰性的無償獻血者的血漿標本，共計123 116份。

1.2主要試劑與儀器 羅氏診斷Cobas S201 全自動血液核酸篩查平臺:Hamilton Microlab Star全自動混樣儀(瑞士Hamilton)，Cobas S201 AmpliPrep 核酸提取儀，Cobas S201 TaqMan核酸擴增檢測儀，Cobas TaqScreen MPX Test,version2.0 核酸檢測試劑盒(批號:215559、232401、257278、283813)。北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司血液核酸篩查平臺:核酸混樣系統(tǒng)(Tecan自動混樣平臺)，核酸提取儀器(Thermo kingfisher96)伯樂CFX-96 擴增系統(tǒng)(美國伯樂公司)，北京萬泰HBV、HCV、HIV 1型核酸檢測試劑盒(PCR-熒光法)(批號:BCI 20170902、BCI 20171203、BCI 20180301、BCI 20180903)，久保田低溫離心機(型號:8730)；BIOBASE生物安全柜(型號:11240 BBC 86；11230 BBC 86)；陽普真空采血管脫蓋機(型號:DC-1)；ELISA所用試劑:檢測HBV使用的是上海科華公司的HBsAg診斷試劑盒(批號:201706221、201709311、201712461、201802061)和法國伯樂公司的HBsAg診斷試劑盒(批號:7A0226、7G0232、7M0239、8C0244)；檢測HCV使用的是北京萬泰公司的抗-HCV診斷試劑盒(批號:CS20170706、CS20171009、CS20180202、CS20180405)和上海科華公司的抗-HCV診斷試劑盒(批號:201707181、201709251、201803061)；檢測HIV使用的是法國伯樂公司的HIV Ag/Ab診斷試劑盒(批號:7C0393、7J0409、8A0420、8C0428、8F0436)和珠海麗珠公司生產的HIV診斷試劑盒(批號:2017062008、2017093008、2018010208)。

1.3方法 標本采集后送檢驗科，當日分別采用兩種不同廠家的ELISA試劑進行檢測，次日從核酸標本管中挑除ELISA檢測結果中HBsAg、抗-HCV和HIV Ag/Ab陽性的標本，剩余陰性標本采用兩種核酸篩查系統(tǒng)進行核酸檢測。羅氏系統(tǒng)是將6份標本匯集到一個標本池(Pool)后，再檢測該Pool，每批次試驗帶有1 個陰性對照NC(-)和3個陽性對照(MPC、HIV-1 O組、HIV-2)和一個康徹斯坦外質控品；萬泰系統(tǒng)與羅氏系統(tǒng)相同，也是將6 份標本匯集到一個Pool后，再檢測該Pool，每批次試驗帶有1個陰性對照、1個陽性對照和一個康徹斯坦外質控品，每天兩個系統(tǒng)各做一部分標本。羅氏系統(tǒng)通過軟件自動判讀結果，萬泰系統(tǒng)根據其說明書標準判讀結果。如果Pool檢測為陰性，則該Pool內6份標本均直接出具陰性合格報告；如果Pool檢測為陽性，對該Pool所有標本進行單檢，并以單檢結果為最終結果，單檢陽性標本的血液制品淘汰，屏蔽該獻血者。并對部分NAT 拆分反應為陽性的獻血者做3個月的跟蹤隨訪，采集其血樣做常規(guī)ELISA檢測及2 種系統(tǒng)的NAT 檢測。

1.4結果分析 采用統(tǒng)計學軟件SPSS 17.0對兩種系統(tǒng)的陽性率、假陽性率和無效率進行統(tǒng)計分析。

2 結 果

萬泰和羅氏系統(tǒng)分別檢測86 475份和36 641份標本。兩個檢測系統(tǒng)的檢測結果見表1。

對其中23份HBV 和1份HCV的核酸檢測陽性的獻血者進行跟蹤檢測，匯總其跟蹤檢測的HBsAg、抗-HCV和NAT結果，見表2。

表1 兩個核酸檢測系統(tǒng)檢測結果統(tǒng)計

表2 兩種NAT 平臺檢出有反應性獻血者的追蹤信息

續(xù)表2 兩種NAT 平臺檢出有反應性獻血者的追蹤信息

注：1～24為獻血者編號；其中A～Q標識為萬泰系統(tǒng)初檢陽性標本，a～g標識為羅氏系統(tǒng)初檢陽性標本。-表示無反應性，+表示有HBV反應性；+Δ表示有HCV反應性。

3 討 論

本研究通過用哈爾濱市血液中心的兩套多重核酸檢測系統(tǒng)檢測2018年1-10月ELISA結果陰性的獻血人群標本，并對兩個檢測系統(tǒng)部分核酸陽性標本追蹤檢測，最后匯總分析數據，分別從陽性率、假陽性率及無效率等方面對兩個系統(tǒng)的性能差異進行比較及分析。

兩種多重核酸檢測試劑均能從ELISA陰性標本中檢測出一定比例的HBV核酸陽性標本，其中萬泰系統(tǒng)檢測HBV核酸陽性率和假陽性率分別為0.486‰、0.038%，羅氏系統(tǒng)檢測HBV核酸陽性率和假陽性率分別為0.464‰、0.071%，這與哈爾濱地區(qū)2016年報道羅氏系統(tǒng)的HBV陽性率0.469‰相符合[7]。在本研究中，萬泰系統(tǒng)的HBV陽性率略高于羅氏系統(tǒng)的陽性率，趨于一致，但萬泰系統(tǒng)HBV的假陽性率要明顯低于羅氏。對兩個系統(tǒng)的部分核酸陽性標本回訪追蹤發(fā)現(xiàn)，23份HBV核酸陽性標本(萬泰16份，羅氏7份)中有14份ELISA復檢為HBsAg陽性，初步判定這些標本為窗口期標本，表明這兩種核酸檢測試劑對于防止ELISA試劑窗口期標本[8-11]的漏檢具有重要意義。這14份ELISA陽性標本中共有2份為兩個核酸檢測系統(tǒng)各有一陰一陽的情況，這種差異可能與這兩個系統(tǒng)HBV引物探針設計的位點差異不同有關[12]，也表明這兩種系統(tǒng)具有一定的互補性。同時，值得注意的是，這14份追蹤ELISA陽性標本中有1份標本在兩個核酸檢測系統(tǒng)檢測均為陰性，該情況可能與病毒感染階段、患者用藥或者病毒區(qū)段缺失或變異有關[13]，也進一步表明核酸方法也存在一定程度的漏檢風險，故ELISA和核酸兩種檢測方法具有一定的互補性；另外，有9份追蹤標本ELISA復檢仍為HBsAg陰性，但核酸陽性，初步分析這9份標本可能與隱匿性HBV感染(OBI)有關[14-16]。

萬泰系統(tǒng)檢測出1例HCV核酸陽性(羅氏未檢測該份標本)，羅氏系統(tǒng)未檢到HCV核酸陽性，后續(xù)兩個核酸系統(tǒng)跟蹤檢測該標本均為HCV陽性，該份標本為HCV窗口期標本，這種差異和兩種系統(tǒng)的檢測標本量不同(萬泰系統(tǒng)檢測86 475份，羅氏系統(tǒng)檢測36 641份)及HCV經ELISA篩選過的標本核酸陽性率較低有關。但羅氏系統(tǒng)的HCV和HIV假陽性率要低于萬泰系統(tǒng)，這可能與兩個系統(tǒng)的自動化封閉水平有關。羅氏系統(tǒng)是集核酸提取、擴增和檢測于一體的全自動檢測系統(tǒng)，干擾因素少；萬泰系統(tǒng)的提取與擴增檢測是2個獨立的系統(tǒng)，人工操作環(huán)節(jié)相對偏多，會增加污染的概率，但隨著人員操作的日益熟練及實驗室的逐步規(guī)范，假陽性率會有進一步提高。

由于兩種系統(tǒng)檢測的并非相同標本，且萬泰系統(tǒng)檢測的標本量要明顯多于羅氏系統(tǒng)，所以數據可能存在一定的偏差，但由于所檢測的標本是分布于同一地區(qū)同一時間段的人群中，從采血到檢測均嚴格按照標準操作規(guī)程進行，故其影響較小，因此，該數據具有一定的現(xiàn)實意義和參考價值[17]。

兩個系統(tǒng)在無效率方面，羅氏系統(tǒng)的無效率較高，達到3.43%，多與儀器故障有關，而萬泰系統(tǒng)的無效率較低，為0.41%，多與試劑檢測異常有關。

兩個多重核酸檢測系統(tǒng)相對于各自的三聯(lián)檢測系統(tǒng)都具有明顯的優(yōu)勢，在成本上，萬泰檢測系統(tǒng)在擴增檢測環(huán)節(jié)可節(jié)省近2/3的儀器和耗材，羅氏系統(tǒng)的多重和原三聯(lián)檢測的成本變化不大，因為原羅氏三聯(lián)系統(tǒng)也是一管多檢，只是不能區(qū)分具體檢測項。在檢測時間上，多重檢測系統(tǒng)或節(jié)省30～60 min的檢測時間或去除了鑒定環(huán)節(jié)時間，且能減少更多的人為操作，方便快捷。

綜上所述，從比較兩種多重核酸血液篩查系統(tǒng)的綜合性看，兩個系統(tǒng)均能降低“窗口期”標本漏檢的風險；萬泰系統(tǒng)的HBV陽性率、假陽性率及整體無效率優(yōu)于羅氏系統(tǒng)；在HCV和HIV核酸的檢測能力上兩種系統(tǒng)基本一致，但羅氏系統(tǒng)假陽性率低于萬泰系統(tǒng)。由于ELISA陰性標本的HCV和HIV核酸陽性率較低，后續(xù)研究需繼續(xù)統(tǒng)計、比較；羅氏系統(tǒng)檢測自動化水平優(yōu)于萬泰系統(tǒng)，但無效率偏高，萬泰試劑的檢測設備盡管無效率較低，但在自動化水平方面需要進一步整合、提高。