文/吳心華 張 鑫 郭啟勇 柳國鎖 錢 軍 孫亞瓊

（寧夏大學農(nóng)學院）

布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種慢性、人畜共患的傳染病，主要侵害生殖系統(tǒng)。奶牛感染后，以母牛發(fā)生流產(chǎn)和公牛發(fā)生睪丸炎為主要臨床癥狀。

1 病原特征

布魯氏菌為革蘭氏陰性短小桿菌，是細胞內(nèi)寄生細菌，主要寄生在巨噬細胞內(nèi)，為需氧菌，呈散在分布，無芽孢及鞭毛，有時能形成莢膜。布魯氏菌屬有6個菌種，即馬耳他布魯氏菌、流產(chǎn)布魯氏菌、豬布魯氏菌、沙林鼠布魯氏菌、綿羊布魯氏菌和犬布魯氏菌，前3 者分別有3 個、9個、5 個生物型。這6 個菌種生物型特征各有差別，習慣上稱馬耳他布魯氏菌為羊布魯氏菌，流產(chǎn)布魯氏菌為牛布魯氏菌。

布魯氏菌不產(chǎn)生外毒素，但可釋放毒性較強的內(nèi)毒素，其中羊布魯氏菌毒素毒力最強，豬布魯氏菌次之，牛布魯氏菌較弱；主要有A、M型抗原，其中牛布魯氏菌以A型抗原為主；各型存在宿主的轉移。

布魯氏菌對外界環(huán)境的抵抗力較強，可在水和土壤中存活72～114 天，在糞便、尿液中存活45 天，在乳汁中存活60天，在陰冷處可存活6 個月；對高溫敏感，在60 ℃、30 min或70 ℃、5～10 min條件下可殺死該菌；對消毒劑抵抗力不強，2.0%燒堿溶液1 h滅活，0.1%新潔爾滅溶液5 min內(nèi)可將其殺死。敏感藥物有利福平、卡那霉素、慶大霉素、磺胺類等，但這些藥物很難進入到巨噬細胞內(nèi)，所以奶牛一旦感染該菌，一般不能徹底將其從體內(nèi)清除，多成為終生帶菌者。

2 發(fā)病機理

布魯氏菌侵入牛體后，在幾日內(nèi)即可侵入淋巴結，被其中的吞噬細胞吞噬。細菌在細胞內(nèi)生長繁殖，形成原發(fā)性病灶，但不表現(xiàn)臨床癥狀。隨著細菌的大量繁殖，破壞了吞噬細胞后進入血液散播全身，引起菌血癥，繼而使牛出現(xiàn)體溫升高、出汗等臨床癥狀。同時，細菌又被吞噬細胞吞噬，隨后可再發(fā)生菌血癥。

侵入血液中的布魯氏菌可散至各個組織器官內(nèi)。首先是進入胎盤和羊水，導致胎盤炎、子宮內(nèi)膜炎。在絨毛膜上皮細胞內(nèi)增殖時，使絨毛膜漸進性壞死，同時產(chǎn)生一層纖維素性膿性分泌物，逐漸使胎兒胎盤與母體胎盤脫離，引起胎兒營養(yǎng)障礙和胎兒病理變化，使孕牛流產(chǎn)。流產(chǎn)后，布魯氏菌會在數(shù)日內(nèi)從子宮內(nèi)消失。其次是進入乳腺、淋巴結、骨骼、關節(jié)、腱鞘、睪丸、附睪中，形成多發(fā)性病灶。

3 流行特征

該病一年四季均可發(fā)生，潛伏期為2 周～6 月，呈地方流行性。后備牛多數(shù)在8～10 月齡開始易感，隨著年齡的增加，易感性增強，達到性成熟時最易感。故此，在犢牛期注射疫苗是實現(xiàn)全群無病的最佳方法。初次感染牛群的流產(chǎn)率超過50.0%以上，傳播速度極快，通常在3～5 月內(nèi)使牛群中80.0%的牛只感染。

4 癥狀

新感染的母牛主要表現(xiàn)為在懷孕5～8 月齡發(fā)生流產(chǎn)，尤其是頭胎母牛最容易發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)率高達60.0%以上，少數(shù)在懷孕期滿正常分娩，但犢牛多表現(xiàn)為弱胎、死胎、病胎。母牛流產(chǎn)后再次懷孕也會發(fā)生流產(chǎn)，一般比第一次流產(chǎn)時間要遲。母牛流產(chǎn)后體溫、飲食欲正常，常發(fā)生胎衣不下、子宮內(nèi)膜炎。老疫區(qū)經(jīng)產(chǎn)母牛也會發(fā)生流產(chǎn)，隨胎次的增加，流產(chǎn)率下降，但會成為終生帶菌者，對牧場后備牛造成極大危害。感染的公牛常發(fā)生睪丸炎或關節(jié)炎、滑膜囊炎，有時可見陰莖紅腫，睪丸和附睪腫大，慢性病例可見腱鞘炎、關節(jié)炎、跛行。患病公牛的凍精可以傳播此病。

如果流產(chǎn)后胎衣排出，則病牛迅速康復，又能懷孕，但可能再度流產(chǎn)；若胎衣未能及時排出，則可能發(fā)生慢性子宮內(nèi)膜炎，引起不育。在新感染牛群里，多數(shù)母牛流產(chǎn)1 次。如果不增加新牛進入，疫情可以停止，病?？赡苡邪霐?shù)痊愈；一旦新進入母牛，還可以引發(fā)大批流產(chǎn)，所以要盡可能不進牛，做到牧場封閉、穩(wěn)定，通過性控繁殖、胚胎移植擴繁牛群。

5 實驗室診斷方法

5.1 樣品采集

無菌采取流產(chǎn)胎兒內(nèi)臟器官、關節(jié)液、胎衣及流產(chǎn)母牛血液、羊水，送實驗室進行病原學診斷。若質疑飼料問題，均勻取樣后送實驗室進行化驗分析。

5.2 病原學診斷方法

細菌學分離、培養(yǎng)，再用聚合酶鏈式反應法（PCR）進行鑒定。

5.3 免疫學診斷方法

凝集試驗[試管凝集試驗（SAT）、緩沖凝集試驗）、補體結合試驗（CFT）、酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）、熒光偏振試驗（FPA）、乳環(huán)試驗。

5.4 對病牛判定的規(guī)定

根據(jù)《布魯氏菌病防治技術規(guī)范》，對牛只進行判斷：（1）細菌學診斷陽性（染色鏡檢、分離鑒定、PCR），判為病牛；（2）血清學初篩試驗陽性反應，并有流行病學史和臨床癥狀或分離出布魯氏菌，判為病牛；（3）血清學正式試驗（SAT、CFT、cELISA）陽性，判為陽性牛。

6 鑒別診斷

表1為布魯氏菌病、衣原體病、牛病毒性腹瀉（BVD）/黏膜?。∕D）、牛傳染性鼻氣管炎（IBR）、生殖道彎曲桿菌病、牛沙門氏菌病、李氏桿菌病、毛滴蟲病、新孢子蟲病、鉤端螺旋體病等導致的牛流產(chǎn)癥狀的鑒別、診斷。

7 防控技術

奶牛傳染性流產(chǎn)指由傳染性疾病導致的流產(chǎn)。防控方法有牛群凈化法、免疫法、環(huán)境消毒法、營養(yǎng)保健法和藥物治療法。

7.1 流產(chǎn)的防控理念

奶牛傳染性流產(chǎn)主要是生物性因素引起的，控制流產(chǎn)必須堅持以“養(yǎng)殖生態(tài)、健康循環(huán)”為基本準則，以“養(yǎng)殖區(qū)域自治”為原則，堅決執(zhí)行牛群凈化或免疫無病。

養(yǎng)殖生態(tài)健康循環(huán)主要包括自然生態(tài)循環(huán)、養(yǎng)殖區(qū)域生態(tài)循環(huán)、牛群生態(tài)循環(huán)、瘤胃生態(tài)循環(huán)和腸道生態(tài)循環(huán)。

養(yǎng)殖區(qū)域疫病自治自控是控制傳染性流產(chǎn)的有效手段。該方法是指在養(yǎng)殖區(qū)域內(nèi)、以牧場為單元，所有牧場在執(zhí)行疫病防控時的標準一致、執(zhí)行一致、行動同步、牧場全覆蓋，堅決執(zhí)行自繁自養(yǎng)，定期檢疫，同步免疫，對病死牛尸體徹底無害化處理。

7.2 奶牛傳染性流產(chǎn)的防控技術

奶牛傳染性流產(chǎn)的防控方法一是牛群凈化；二是同步免疫；三是健康后備牛培育。奶牛流產(chǎn)防控技術路線見圖1。

表1 牛流產(chǎn)癥狀的鑒別、診斷

牛群凈化技術是指地區(qū)奶牛布魯氏菌病感染率低于5.0%，對所有陽性牛進行徹底無害化撲殺、焚燒、深埋技術。

同步免疫是指地區(qū)奶牛布魯氏菌病感染率大于5.0%，對所有牛進行強制免疫1 次后，不再免疫，以后只給所有自繁犢牛在3～6 月齡進行1 次免疫，連續(xù)10 年，直到可疑成年牛全部淘汰為止。

健康后備牛培育技術：犢牛出生后倒立，排出犢牛呼吸道、消化道羊水；初乳巴殺滅菌后灌服；常乳巴殺滅菌后飼喂；建立后備牛隔離區(qū)；定期檢疫，淘汰陽性?；蜃⑸銩19疫苗。

7.3 布魯氏菌病凈化技術

7.3.1 凈化標準

同時滿足以下要求，視為達到非免疫凈化標準（控制標準）：（1）牛群抽檢，布魯氏菌抗體檢測陰性；（2）連續(xù)2 年以上無臨床病例；（3）現(xiàn)場綜合審查通過。

7.3.2 凈化評估實驗室檢測方法

凈化評估實驗室檢測方法見表2。

7.4 布魯氏菌病免疫無病技術

7.4.1 疫苗種類

布魯氏菌病活疫苗（A19），在2～8 ℃儲存，有效期12 個月。必須在接種疫苗的當天取出，稀釋后的疫苗于當天使用。

7.4.2 疫苗使用方法

詳細閱讀說明書，按照要求用生理鹽水稀釋疫苗干粉，使用時搖勻。

7.4.3 疫苗使用注意事項

（1）加強個人防護

雖然疫苗是弱毒，但大量接觸疫苗仍可以引起人的感染。人感染后呈現(xiàn)無癥狀到有感冒樣癥狀，出現(xiàn)癥狀不超過3 個月，病癥比較輕，不會產(chǎn)生長期性致病癥狀。頻繁感染者在第一次康復后再接觸疫苗可出現(xiàn)變態(tài)反應。因此，對工作人員的防護及對其他人員和環(huán)境的生物安全應引起足夠的重視，做好相應的防護措施，如注射疫苗時需要穿防護服，佩戴口罩和眼鏡。

圖1 奶牛流產(chǎn)防控技術路線

表2 凈化評估實驗室檢測方法

（2）免疫密度

確保100.0%免疫密度對保證預防效果非常重要。對任何布魯氏菌疫苗而言，免疫密度的高低在很大程度上會影響預防效果，對牛群中母牛具有特異性抗布魯氏菌感染的能力非常重要。一旦牛群中出現(xiàn)沒有免疫保護能力的易感母牛，則會降低病原的清除和防止擴散效果。

A19疫苗在體內(nèi)存活的時間多數(shù)母牛為60 天左右，少數(shù)可達90 天。

（3）疫苗體外排菌

A19疫苗注射后，部分奶牛可以從乳汁中排菌，但經(jīng)正常消毒后的牛奶不會引起人的感染。

（4）免疫抗體

目前，免疫抗體不能與感染抗體完全區(qū)別。采用A19疫苗注射免疫后1 個月，80.0%以上牛的免疫抗體達到檢測水平；3～8 月齡犢牛免疫后，6 個月抗體基本低于檢測水平；成年牛免疫后，抗體可持續(xù)一年半。

（5）免疫保護與保護期

免疫期一般是指抗體緩慢下降的時間。一般注射疫苗后，在6 個月抗體低于檢測水平。在實驗條件下，A19疫苗的保護率達80.0%以上，免疫期為5 年。A19疫苗的注射免疫保護率略高于口服，但要注意懷孕母牛不能注射；免疫抗體反應明顯高于口服，部分母?？沙掷m(xù)1 年。

免疫保護率隨著時間的延長而下降，表現(xiàn)為先緩慢下降，至一定時間后呈現(xiàn)快速下降。

免疫程序影響保護率，在奶牛性成熟前免疫效果最好，一旦奶牛進入性成熟后，注射弱毒疫苗會造成環(huán)境污染，增加人畜被感染的風險。

（6）重復免疫可提高保護率

為獲得高度免疫保護力，建議在重流行區(qū)內(nèi)加強免疫，但必須做好人的防護，以免人被感染。在使用A19疫苗上，除3～8 月齡犢牛采用常規(guī)劑量（≥600 億菌/頭）免疫外，其余牛只采用10 億菌/頭的劑量加強免疫。

（7）疫苗質量

在性狀上，布魯氏菌疫苗為黃、白色真空凍干品，易溶于水。在安全性上，布魯氏菌疫苗具有非常寬的安全范圍，加大劑量不會出現(xiàn)安全問題。若出現(xiàn)安全問題，多是由于疫苗被污染造成的。在效力上，活菌數(shù)及細菌活力是其主要指標，影響疫苗成活率的因素包括疫苗生產(chǎn)日期，是否低溫保存、及時使用，免疫時是否避免接觸抗生素等。

（8）帶菌免疫

如果牛群已經(jīng)被布魯氏桿菌感染，再進行注射布魯氏桿菌弱毒疫苗的結果是不能完全清除體內(nèi)已有的細菌，但可有效抑制細菌的擴散；感染母牛免疫后，可激發(fā)抗體水平上升，其流產(chǎn)率和病原傳播能力大大減少。

7.4.4 免疫程序

（1）A19疫苗的免疫程序

在疫病流行區(qū)域，要同步對成年牛進行一次性免疫，以后不再免疫。以后只能給3～4 月齡犢牛首次免疫，5～6 月齡2 次免疫，以后不再免疫。

（2）疫區(qū)牛群的免疫技術

建議全部進行封閉擴繁，自繁自育，對病牛加大力度撲殺+加速可疑病牛的自然淘汰速度+免疫。

在生產(chǎn)中，對空懷牛采用A19疫苗進行注射免疫，終身不免疫，下一步只能加速淘汰。但重點工作是將6 月齡前犢牛變成不易感染母牛，分別在第3、5月齡注射A19疫苗，這樣的免疫要持續(xù)10 年以上，直至帶菌牛全部淘汰為止。進口育成牛A19疫苗注射1 次。

（3）新進種母牛免疫技術

新進本地的種母牛容易被當?shù)貛Ь８腥?，為預防感染，可以進行疫苗注射。免疫前，在飲水里添加益康電解質多維，在第5天對所有新進牛注射疫苗。

（4）效果評價

免疫1 個月后檢測全部牛的血清，呈現(xiàn)陽性的需要在每個月進行檢測，直至呈現(xiàn)陰性，主要監(jiān)測免疫抗體反應以及抗體轉陰率的變化情況。

（5）免疫風險控制

注射布魯氏桿菌弱毒疫苗，存在人員被感染的可能，最好是由疫苗銷售方組織專業(yè)人員注射疫病；注射疫苗后，每天要消毒4 次，徹底消滅空氣中可能的布魯氏桿菌；泌乳牛不能注射疫苗，防止排菌造成擠奶員被感染。

7.4.5 疫苗注射應激反應的預防措施

（1）免疫副作用

在對奶牛進行疫苗注射時，常出現(xiàn)免疫副作用，表現(xiàn)為急性過敏、慢性過敏和內(nèi)毒素中毒反應。

急性過敏反應是由于免疫球蛋白E（IgE）和堿性粒細胞與肥大細胞釋放的微粒引起的，常于注射后數(shù)分鐘內(nèi)發(fā)生，表現(xiàn)為全身肌肉震顫，出大汗，心率增快，呼吸困難，眼睛周圍皮膚、會陰部皮膚腫脹等，注射腎上腺素即可緩解。

慢性過敏反應是由抗原抗體復合物附著于補體而激活補體反應所致。該反應可能發(fā)生于局部或者全身，與疾病臨床癥狀相同，但是反應遲緩，注射腎上腺素即可緩解。

內(nèi)毒素中毒反應是由于疫苗內(nèi)含有內(nèi)毒素引起。一般臨床表現(xiàn)為注射疫苗后采食量減少，產(chǎn)奶量下降，胚胎早期死亡，流產(chǎn)；偶爾嚴重者，在注射疫苗數(shù)小時內(nèi)就出現(xiàn)休克，甚至急性死亡。在臨床上，為了減少內(nèi)毒素反應，嚴禁在同一日內(nèi)注射2 種以上的革蘭氏陰性細菌疫苗。一旦發(fā)現(xiàn)內(nèi)毒素中毒，立即注射腎上腺素，或者地塞米松、氟尼辛葡甲胺、美達佳，靜脈注射高糖、葡萄糖酸鈣、維生素C、復方氯化鈉，配合強心利尿藥物。

（2）防止免疫應激措施

為了防止免疫應激的發(fā)生，注射疫苗前3 天，日糧減少1/3，同時增加瘤胃調(diào)控劑、電解質和多種維生素；進行潛在性免疫反應牛的預防。在注射疫苗前2 h，對精神不佳、食欲不好的懷孕母牛，先肌內(nèi)注射腎上腺素4.0 mL，黃體酮10.0 mL，30 min后開始注射疫苗，在1 h內(nèi)完成。

（3）免疫反應的急救措施

一般反應：個別牛在接種后出現(xiàn)輕度精神萎靡或不安，食欲減少和體溫稍高等情況。針對該情況無需治療，將其置于適宜環(huán)境下1～2天，癥狀即可自行減輕或消失，不必采取治療措施。

急性反應：極少數(shù)牛在免疫后可能出現(xiàn)急性過敏反應，氣喘，呼吸加快，眼結膜充血，發(fā)抖，皮膚發(fā)紫，口吐白沫，頻繁排糞，后肢不穩(wěn)或倒地抽搐。若搶救不及時，很可能造成死亡。一般需要盡快進行肌注鹽酸異丙嗪500.0 mg；肌注地塞米松磷酸鈉30.0 mg，孕牛不用；皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素5.0 mg。

最急性反應：迅速皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素5.0 mg，20 min后根據(jù)緩解程度，可重復進行同劑量再注射1 次；肌注鹽酸異丙嗪500.0 mg。

對出現(xiàn)休克癥狀的病牛，迅速將去甲腎上腺素10.0 mg加入10%葡萄糖進行靜脈注射，并依次將20.0%葡萄糖酸鈣注射液1 000.0 mL、復方氯化鈉500.0 mL、氫化可的松100.0 mL、維生素C 5.0 g、維生素B63.0 g、5.0%碳酸氫鈉液500.0 mL進行靜脈注射。

7.4.6 異地母牛的布魯氏菌病控制技術

對于未從疫區(qū)引進的抗體陽性母牛，無論是否進行免疫，一律不準移動、購入，更不能移入牧區(qū)。

對于選定的國外母牛，需要經(jīng)過檢疫合格后，轉移至隔離場隔離45 天，并按照國家規(guī)定再次檢疫。在隔離場經(jīng)過45 天的隔離觀察，通過檢疫合格的牛只可以裝車，運輸至目的地。

（1）運輸前處理

在運輸前不要更換日糧，避免由此引起的應激；剛斷奶犢牛必須習慣在料槽中采食及在水槽中飲水后，才能考慮被運輸；斷奶犢牛在運輸前3～4 周應開始采食干草或谷物，運輸前7～10 天自由采食干草；允許牛只自由飲水，直到運輸前的2～3 h后飲水限量（若在裝載前進行處理或挑選，容許再次補水）；在運輸前至少12 h，盡量減少使用或不飼喂具有通便作用的谷物和豆類；對運輸前的牛只，減少采食青綠牧草和高水分的飼料，盡量飼喂干飼料；日糧中添加銅、硒和鋅能減少牛在運輸過程中的應激反應；若可能的話，在運輸前接種疫苗和采取驅蟲措施；病牛、體況差或被皮毛濕漉的牛不宜進行運輸。

（2）運輸過程中注意事項

使用降低應激反應的操作技術；裝載空間密度不易過大；當卡車啟動、轉彎或停留時，采用隔艙來緩解牛只的應激、緊張；避免拖車負載過輕，以減少牛只應激和挫傷；保障拖車內(nèi)通風良好；安排牛只在長途中適當休息；避免在崎嶇道路上運輸，并一直提供良好的墊料；在休息期間和目的地，為牛只提供飼料和水，并關注其福利；盡量為牛只提供遮陰條件；在炎熱天氣，超載會加劇牛只的應激反應，并增加其到達目的地后的恢復時間。

（3）帶牛消毒

種母牛進入新牧場前，對牛舍及運動場要提前進行消毒。牛只進入第2天，選擇無刺激的消毒藥，對新進牛只及圈舍全部進行消毒，1 天1 次，連續(xù)5 天。

8 預防人的感染

特別需要注意的是布魯氏菌可以通過不同渠道傳播給人，一是接觸傳播，包括接觸病牛及其排出物，如糞便、尿液、汗液、精液、陰道分泌物、血膿等以及病牛胎兒的羊水、胎衣、死胎、病死牛尸體等；二是空氣傳播、塵埃傳播，病菌可通過侵入人體呼吸道、傷口、消化道、眼結膜等，而使人致病。

預防措施：一是牛場內(nèi)禁止抽煙、吃東西、喝水、玩手機，減少接觸感染的可能性；二是建立專人專管機制，禁止獸醫(yī)、用具、車輛等的交叉使用；三是擠奶員、獸醫(yī)進場工作時，應戴眼鏡、手套、口罩、穿防護服。出牛場時，要用酒精噴霧消毒。四是及時無害化處理獸醫(yī)垃圾和繁殖垃圾，如將胎衣、死胎等倒入腐蝕窖或集中在冷庫，焚燒。