李慕白，王婷婷，陳靖馨，馬紅麗

子宮內(nèi)膜癌（endometrial cancer）起源于子宮內(nèi)膜，是一組上皮惡性腫瘤，常發(fā)生于圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后婦女，為最常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤之一。盡管大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌患者的預后良好，但晚期或轉(zhuǎn)移性疾病因其病情擴散、分化差，預后較差。因此，新型生物標志物和治療靶標的出現(xiàn)，對于提高子宮內(nèi)膜癌患者生存率至關(guān)重要。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一組長度范圍在200～100 000核苷酸，不具編碼蛋白質(zhì)功能的非編碼RNA[1]。作為最廣泛和最異質(zhì)的不編碼蛋白質(zhì)的RNA類型，lncRNA廣泛參與細胞分化、周期調(diào)控和凋亡等生物學過程，可在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后和表觀遺傳學等水平調(diào)節(jié)表達[2]。近年國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)各類型惡性腫瘤中l(wèi)ncRNA的表達存在失調(diào)現(xiàn)象，表明lncRNA在其中發(fā)揮致癌或抑癌作用[3]。在婦科腫瘤領(lǐng)域，越來越多的證據(jù)表明lncRNA對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展、臨床用藥及預后起到重要的作用。本文通過綜述lncRNA對子宮內(nèi)膜癌調(diào)控的研究，以期為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷及治療提供新方向。

1 lncRNA的檢測技術(shù)及分類

目前l(fā)ncRNA的研究主要是留取或培養(yǎng)疾病特定細胞或組織，通過基因芯片技術(shù)分離提取總RNA，通過微陣列技術(shù)高通量測序、蛋白質(zhì)印跡、實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（PCR）檢測lncRNA的表達并驗證基因芯片，分析差異lncRNA與研究疾病相互作用，尋找該疾病研究新突破。目前l(fā)ncRNA多從位置和功能兩方面進行分類，根據(jù)位置可分為基因間 lncRNAs、反義 lncRNAs、雙向 lncRNAs、內(nèi)含子lncRNAs和重疊轉(zhuǎn)錄本；根據(jù)功能可分為支架lncRNA、指導lncRNA、核糖激活、核糖阻斷或誘餌、競爭性內(nèi)源RNA（ceRNA）和lncRNA前體[4]。

2 lncRNA調(diào)控子宮內(nèi)膜癌的作用機制

2.1 促癌作用 研究證實通過人類第10號染色體上磷酸酶和張力蛋白同源缺失的基因/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（PTEN/PI3K/AKT/mTOR）通路在腫瘤中起重要作用，lncRNA可通過PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號通路促進子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖、遷移和侵襲。結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄本2（CCAT2）是一種新型長鏈非編碼RNA，已報道其已在幾種癌癥中為致癌基因，Xie等[5]使用HEC-1-A和RL95-2這兩種子宮內(nèi)膜癌細胞系研究CCAT2在子宮內(nèi)膜癌細胞中發(fā)揮的致癌作用，與非癌性子宮內(nèi)膜組織相比，CCAT2在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達，且在敲除該基因后子宮內(nèi)膜癌細胞的活力、遷移、侵襲受到抑制，但誘導了細胞的凋亡。同時，該研究還發(fā)現(xiàn)CCAT2可作為內(nèi)源性海綿競爭miR-216b，miR-216b抑制減輕CCAT2沉默，從而減少細胞生長和轉(zhuǎn)移，miR-216b負調(diào)節(jié)可進一步活化PTEN/PI3K/AKT和mTOR通路[5]。研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA淋巴細胞白血病缺失基因1（DLEU1）在子宮內(nèi)膜癌中高表達，其上調(diào)促進了子宮內(nèi)膜癌細胞的活力、遷移、侵襲，并降低了細胞凋亡的比例，促進腫瘤發(fā)展，且DLEU1可與mTOR直接連接并組合成免疫沉淀，表明lncRNA DLEU1可能通過與mTOR相關(guān)的PI3K/AKT/mTOR通路促進子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展[6]。另有研究也證實了DLEU1的促子宮內(nèi)膜癌作用，并發(fā)現(xiàn)其靶向miR-490靶基因，可通過抑制該靶基因的作用來激活PI3K/AKT/糖原合酶激酶3β（GSK-3β）途徑，相反抑制DLEU1可達到抑制該途徑的目的[7]。漿細胞瘤多樣異位基因1（PVT1）作為可以致癌的lncRNA，在子宮內(nèi)膜癌中高表達，主要通過抑制miR-195-5p，使miR-195-5P靶標酸性成纖維細胞生長因子受體和堿性成纖維細胞生長因子受體增加，激活PI3K/AKT和MAPK/Erk途徑，以達到促進惡性細胞行為[8]。非同源末端連接（NHEJ）途徑1（LINP1）在子宮內(nèi)膜癌細胞系的體外研究中起促進腫瘤的作用，且腫瘤形成試驗證實了LINP1可以促進體內(nèi)腫瘤的形成，蛋白質(zhì)印跡結(jié)果證實其可以激活PI3K/AKT信號傳導，該信號通路是LINP1潛在的作用機制[9]。LINC01170在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，在晚期癌組織中的表達水平明顯高于早期癌組織，干擾后發(fā)現(xiàn)癌細胞增殖降低，周期停在G0/G1期，細胞凋亡率提高，蛋白質(zhì)印跡結(jié)果還表明，敲低LINC01170后，AKT途徑活性降低，AKT蛋白磷酸化表達[10]。在子宮內(nèi)膜癌中，PI3K/AKT/mTOR途徑的作用已得到發(fā)現(xiàn)和研究，該途徑與促進腫瘤特性、預后不良和傳統(tǒng)的耐藥性有關(guān)，并且在臨床前和臨床試驗中得到驗證，在子宮內(nèi)膜癌治療中靶向抑制此途徑可能對無進展生存期有所改善[11-12]。

已證實 Wnt/β 連環(huán)蛋白（Wnt/β-Catenin）信號通路參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程，lncRNA亦可通過此通路調(diào)控子宮內(nèi)膜癌。Wang等[13]研究核富集轉(zhuǎn)錄體1（NEAT1）調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細胞生長、遷移和侵襲的作用及機制，發(fā)現(xiàn)NEAT1通過miR-214-3p調(diào)節(jié)高遷移率族蛋白A1的蛋白水平，高遷移率族蛋白A1上調(diào)了Wnt/β-Catenin下游基因人髓細胞增生原癌基因（c－myc）和基質(zhì)金屬蛋白酶 9（MMP-9）的蛋白和mRNA水平，促進癌細胞的生長、遷移和侵襲。另有研究發(fā)現(xiàn)，NEAT1/miR-146b-5p介導的Wnt/β-Catenin信號通路可被孕酮調(diào)節(jié)，從而抑制子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展，這一研究可能為子宮內(nèi)膜癌開發(fā)更有效的治療方法提供新策略[14]。lncRNA在促子宮內(nèi)膜癌作用機制中還涉及細胞外信號調(diào)節(jié)激酶/腺苷酸活化蛋白激酶（ERK/AMPK）信號通路。Wang等[15]研究表明，由絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（BRAF）激活的長鏈非編碼RNA（BANCR）的表達水平在1型子宮內(nèi)膜癌組織中較正常子宮內(nèi)膜組織顯著升高，并通過激活調(diào)節(jié)MMP-2/MMP-1表達的ERK/MAPK信號通路來促進子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、遷移和侵襲，且與子宮內(nèi)膜癌患者的FIGO分期、腫瘤分級、肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P＜0.05）。

LncRNA通過受體酪氨酸激酶/缺氧誘導因子α（AXL/HIF-α）途徑達到促子宮內(nèi)膜癌作用。H19作為潛在的腫瘤標志物，與癌旁組織相比，在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高水平表達，敲除H19雖不影響癌細胞的增殖，但癌細胞的遷移和侵襲作用受抑制，此外下調(diào)H19發(fā)現(xiàn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化部分逆轉(zhuǎn)，表明其可通過調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程促進子宮內(nèi)膜癌的侵襲性[16]。H19在子宮內(nèi)膜癌作用機制的研究中，也可通過競爭微小RNA（miRNA）來調(diào)節(jié)其靶基因水平，達到促癌作用。H19在靶向結(jié)合miRNA的同時，該靶基因可與同源盒基因10（HOXA10）結(jié)合，使HOXA10的mRNA和蛋白質(zhì)水平降低，從而促進癌細胞增殖[17]。在探索子宮內(nèi)膜癌中H19與miR-20b-5p相關(guān)的分子機制時發(fā)現(xiàn)，H19的表達不僅與該miRNA呈負相關(guān)，高水平H19還能升高受體酪氨酸激酶AXL和HIF-1α的表達以刺激細胞的遷移增殖和子宮內(nèi)膜上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程；此外，敲除H19可使腫瘤生長減慢，細胞凋亡增快，HIF-1α和體內(nèi)受體酪氨酸激酶的表達下調(diào)，可見H19是通過miR-20b-5p/AXL/HIF-α信號傳導途徑加速了子宮內(nèi)膜癌的形成[18]。

HOX轉(zhuǎn)錄本反義RNA（HOTAIR）、尿路上皮癌抗原 1（UCA1）、轉(zhuǎn)化生長因子激活的 lncRNA（ATB）等lncRNA多作為競爭性海綿，調(diào)節(jié)抑制性miRNA參與致癌進展。HOTAIR通過競爭靶向的miRNA，與其相互作用調(diào)節(jié)核磷素1表達，控制子宮內(nèi)膜癌細胞的活力、遷移和侵襲[19]。HOTAIR與子宮內(nèi)膜癌中的孕激素受體B的表達呈負相關(guān)，敲除HOTAIR可以通過上調(diào)孕激素受體B來提高醋酸甲羥孕酮的敏感性，HOTAIR介導子宮內(nèi)膜癌細胞中孕酮的敏感性，表明HOTAIR是子宮內(nèi)膜癌中孕激素反應的潛在預測因子，HOTAIR表達下調(diào)可能是克服孕激素抵抗的有效策略[20]。UCA1在子宮內(nèi)膜癌中的作用尚不清楚，但其在子宮內(nèi)膜癌中高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、腫瘤分級、晚期惡性腫瘤分期和血管浸潤有關(guān)，同時對患者的存活率也存在一定影響，可作為預測子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤進展和不良預后的新型分子標記[21]。ATB的表達在腫瘤組織和子宮內(nèi)膜癌細胞系中上調(diào)，其高表達的患者FIGO分期和腫瘤分化差，降低ATB水平可使抑制性因子miR-126的水平增加，并誘導腫瘤細胞凋亡和G1/S阻滯，同時還降低了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化表型，所以ATB致癌作用機制在于抑制腫瘤抑制因子miR-126信號[22]。lncRNA在參與發(fā)病過程中，多與miRNA形成lncRNA-miRNA軸，干預各類lncRNA-miRNA軸可能有望成為疾病治療的新方向。

2.2 抑癌作用 lncRNA亦可通過PTEN/PI3K/mTOR通路達到抑癌作用。母系印跡表達基因3（MEG3）是母系印跡基因，在多種腫瘤中發(fā)揮腫瘤抑制作用，研究發(fā)現(xiàn)MEG3在子宮內(nèi)膜癌中的表達顯著低于正常子宮內(nèi)膜組織，MEG3過表達抑制子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，促進細胞凋亡，并抑制PI3K/mTOR信號通路的激活，進一步RNA免疫沉淀測定顯示MEG3可以直接與PI3K結(jié)合，裸鼠實驗結(jié)果也顯示其具有顯著的抑制腫瘤生長的作用，MEG3在子宮內(nèi)膜癌細胞中所起的抑制作用可為治療子宮內(nèi)膜癌提供潛在治療新靶點[23]。Fer-1樣蛋白4（FER1L4）在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞內(nèi)下調(diào)，且其過表達細胞中觀察到細胞增殖顯著降低，以及細胞周期停滯在G0/G1期和凋亡細胞的比例增加，F(xiàn)ER1L4的下調(diào)與PTEN表達降低呈正相關(guān)，可促進PTEN表達并抑制AKT磷酸化，F(xiàn)ER1L4所調(diào)節(jié)的PTEN表達和AKT信號傳導可能有助于其抑制癌細胞增殖的作用[24]。血漿生長特異性阻滯因子（GAS5）作為抑癌基因，在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮海綿作用，通過與miR-103結(jié)合，抑制該miRNA的表達，從而顯著增強PTEN的表達，促進癌細胞凋亡，其可能是子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的重要介質(zhì)[25]。

miR-22宿主基因（MIR22HG）在子宮內(nèi)膜癌中作為腫瘤抑制因子存在，體外功能測定顯示增加MIR22HG的表達可抑制子宮內(nèi)膜癌細胞并誘導細胞凋亡，使細胞停滯在G0/G1期，其作用機制是靶向miRNA，通過miR-141-3p/死亡相關(guān)蛋白激酶1（DAPK1）軸抑制癌細胞增殖[26]。LINC00672是2365-bp的轉(zhuǎn)錄物與位于17q12染色體的正向鏈2個外顯子，是子宮內(nèi)膜癌的易感基因，具有可檢測的序列保守性，并且僅限于單個短區(qū)域的超保守性，而LINC00672在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展過程中異常下調(diào)，在抗腫瘤過程中扮演抑制輔助因子存在，在人體內(nèi)外研究中，LINC00672過表達可緩解兩個子宮內(nèi)膜癌的惡性表型的發(fā)展[27]。TUSC7通過miR-616/SOCS4（SOCS5）軸抑制子宮內(nèi)膜癌的進展，TUSC7在子宮內(nèi)膜癌組織和細胞系中表達下調(diào)，Wu等[28]通過上調(diào)TUSC7發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌細胞的增殖、循環(huán)進展和轉(zhuǎn)移被明顯抑制，并且TUSC7可與miR-616作用并降低其表達，上調(diào)靶標SOCS4（SOCS5）的表達達到抑制子宮內(nèi)膜癌的作用，并在異種移植腫瘤小鼠模型的體內(nèi)實驗中得以驗證。Lnc-XLEC1是X染色體連鎖的長鏈非編碼RNA，該基因在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)育過程中異常下調(diào)，研究表明，lnc-XLEC1的過表達減少了子宮內(nèi)膜癌細胞的遷移和增殖，導致子宮內(nèi)膜癌細胞的G1期大量積累，其機制可能是由于抑制了Myc基因啟動子結(jié)合蛋白1和負調(diào)控細胞周期蛋白依賴性激酶/細胞周期相關(guān)基因/細胞周期蛋白F（Cdk/Rb/E2F）途徑[29]。因此，LncRNA在子宮內(nèi)膜癌中具有一定的潛在抗腫瘤作用，值得進一步研究。

3 參與子宮內(nèi)膜癌化療藥耐藥性的lncRNA

TUSC7、LncRNA HOTAIR和LINC00672對子宮內(nèi)膜癌化療藥物存在影響。TUSC7在子宮內(nèi)膜癌組織和對順鉑、紫杉醇耐藥的細胞株中的表達低于敏感細胞，且TUSC7表達水平與子宮內(nèi)膜癌患者對順鉑和紫杉醇化療的反應呈正相關(guān)，TUSC7通過抑制靶基因的靶向沉默，成為抑制細胞生長并提高化療敏感性的潛在抑癌基因[30]。HOTAIR在順鉑耐藥的lshikawa細胞和用順鉑處理的親本lshikawa細胞中同時下調(diào)，HOTAIR的干擾減少了對順鉑耐藥的lshikawa細胞的增殖，并且增強了順鉑耐藥的lshikawa細胞的自噬活性，HOTAIR可以通過影響自噬相關(guān)基因Beclin-1、多藥耐藥性和P-糖蛋白表達來調(diào)節(jié)細胞自噬，從而調(diào)節(jié)人子宮內(nèi)膜癌細胞的順鉑耐藥能力[31]。Li等[27]研究也發(fā)現(xiàn)，LINC00672過表達水平顯著增加了子宮內(nèi)膜癌細胞中50%紫杉醇的抑制濃度，并提高了異種移植小鼠對紫杉醇的敏感性，p53可抑制腫瘤生長并使癌細胞對化療藥物敏感，而在LINC00672的部分抗腫瘤作用中，通過與異核核糖核蛋白的相互作用參與p53介導的LASP1基因的抑制。因此，LINC00672可以影響子宮內(nèi)膜癌惡性腫瘤對紫杉醇的化學敏感性，其對腫瘤耐藥治療有一定價值。

4 lncRNA對子宮內(nèi)膜癌診斷、預后的意義

在子宮內(nèi)膜癌中作為促進基因或者抑制基因的各類 lncRNAs，如 CCAT2、HOTAIR 和 NEAT1 等，可作為子宮內(nèi)膜癌中良好的診斷和預后生物標志物。其中BLACAT1在多種惡性腫瘤血清和組織中的表達水平均明顯上調(diào)，無論在血清還是組織中變化相似，并且血清中的BLACAT1在12種癌癥中具有較高的診斷性能，然而只有在子宮內(nèi)膜癌中血清BLACAT1的高表達水平與不良的總生存率顯著相關(guān)，這表明BLACAT1不僅可以作為癌癥的非特異性診斷生物標志物，還可作為預測子宮內(nèi)膜癌預后的潛在生物標志物[32]。FER1L4作為子宮內(nèi)膜癌抑癌基因，Kaplan-Meier生存曲線分析表明，F(xiàn)ER1L4高水平表達的患者總生存率明顯高于低水平表達的患者，且對預后因素的多變量分析證實，F(xiàn)ER1L4低表達是子宮內(nèi)膜癌生存率低的重要獨立預測因子，故FER1L4在子宮內(nèi)膜癌中具有重要的臨床意義，且可以作為子宮內(nèi)膜癌患者的獨立預后指標[33]。

Zhou等[34]通過對lncRNA表達譜和臨床數(shù)據(jù)進行全基因組整合分析，確定了由11個預后lncRNA組成的新型lncRNA聚焦表達特征，鑒定出的11-lncRNA特征可用于穩(wěn)定地預測子宮內(nèi)膜癌患者的生存情況，功能分析中已將預后的lncRNA的表達與子宮內(nèi)膜癌過程中眾多的抑癌或致癌途徑聯(lián)系起來，發(fā)現(xiàn)與臨床協(xié)變量相比，他們代表了獨立且優(yōu)越的預后價值。Tang等[35]從263個子宮內(nèi)膜癌樣品和33個正常對照之間鑒定了差異表達的lncRNA，包括 LINC00475、LINC001352、MIR503HG、KCNMB2-AS1和LINC001143，由這5個差異表達的lnc RNA建立的風險評分模型可以顯著區(qū)分高風險患者和低風險患者的生存率，該風險評分有良好的生存預測性能，而且基于組織學分級和復發(fā)狀態(tài)的兩個獨立的預后臨床因素，高風險評分仍是不良的預后因素，該研究進一步證明了lncRNA與miRNA的共表達作用。這項新穎的風險評分系統(tǒng)為指導子宮內(nèi)膜癌患者個性化治療和預后生物標志物提供基礎(chǔ)，并且可為當前的臨床系統(tǒng)增加預后價值。

近年研究采用鑒定特有l(wèi)ncRNA的構(gòu)建預后簽名的方法，為子宮內(nèi)膜癌的預后提供生物標志物。Xia等[36]首次展示子宮內(nèi)膜癌的競爭性內(nèi)源網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，以揭示促進子宮內(nèi)膜癌發(fā)展的分子機制。在該競爭性RNA網(wǎng)絡(luò)中，共鑒定出15種高度表達的lncRNA，并分析出基于 LINC00491、LINC00483、ADARB2-AS1和C8orf49的簽名，作為預測子宮內(nèi)膜癌預后的最佳特征，因此，基于上述4種lncRNA的簽名可被鑒定為生物標志物，以區(qū)分高風險和低風險的患者，有作為子宮內(nèi)膜癌獨立預后生物標志物的可能，參與此簽名的lncRNAs可作為子宮內(nèi)膜癌精準醫(yī)學的治療靶標[36]。Ouyang等[37]也為構(gòu)建預后的lncRNA簽名，鑒定出7種lncRNA作為潛在的預后因素，這個7-lncRNA簽名不僅用來預測子宮內(nèi)膜癌的預后，還可用于術(shù)后治療和隨訪。

5 結(jié)語

近年研究發(fā)現(xiàn)部分經(jīng)典lncRNA在子宮內(nèi)膜癌中均有調(diào)控作用。目前在子宮內(nèi)膜癌中l(wèi)ncRNA對化療藥物耐藥性存在影響，lncRNA可能有助于改進化療藥物耐藥性，但其參與的作用機制尚不明確，故lncRNA對化療藥物抗性可成為今后研究的方向，期望為治療子宮內(nèi)膜癌提供新思路。此外，研究表明，lncRNA可作為miRNA海綿發(fā)揮功能，其在子宮內(nèi)膜癌的潛在分子機制和多個調(diào)控途徑中起到重要作用，可能成為疾病治療的潛在靶點或評估患者預后的關(guān)鍵，具有重要的臨床意義。然而，lncRNA在子宮內(nèi)膜疾病的研究尚處于初期階段，其具體的作用機制有待進一步探討，期望在今后的研究中擴展及深入對此領(lǐng)域的研究，將會為子宮內(nèi)膜癌提供更多新的診療思路。