羅軍　楊蓉　黃蕾蕾　唐秀梅　王孝源　劉鵬　朱森林　邢承華

摘要：【目的】明確2種木霉對萵苣菌核病的防效差異，為揭示木霉菌的作用機(jī)理及應(yīng)用于萵苣菌核病防治提供科學(xué)依據(jù)。【方法】在單因素試驗基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法進(jìn)行木霉固體發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，獲得2種木霉（棘孢木霉和深綠木霉）的最佳發(fā)酵優(yōu)化條件;以碧玉萵筍為材料，進(jìn)行盆栽萵筍灌根接種木霉發(fā)酵液和核盤菌懸浮液處理（處理1：棘孢木霉+核盤菌;處理2：深綠木霉+核盤菌;處理3：核盤菌;處理4：50%多菌靈可濕性粉劑800倍液+核盤菌;處理5：無菌水），觀察萵苣生長情況，并分別于接種后第3、6、9、12和15 d測定萵筍葉片抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）]活性、丙二醛（MDA）、脯氨酸（Pro）及葉綠素含量?！窘Y(jié)果】2種木霉發(fā)酵液均能在一定程度上減輕核盤菌對萵苣的侵害，提高植物抗氧化酶活性，其中深綠木霉處理下萵苣葉片的SOD、POD和CAT活性更高，與無菌水處理相比，接種后12 d達(dá)最大增長率，分別為85.32%、78.05%和43.50%;與核盤菌處理相比，棘孢木霉和深綠木霉處理的MDA、Pro含量明顯下降，最大降幅分別為17.16%、28.41%和29.48%、30.44%;木霉能有效抵御核盤菌對植物造成的侵害，其中深綠木霉的促進(jìn)作用更明顯，處理后6～15 d的葉綠素含量顯著高于棘孢木霉處理（P<0.05，下同），最高為刺孢木霉處理組的1.112倍;木霉處理后可降低菌核病的發(fā)病程度，對萵苣菌核病具有較好防治效果，其中深綠木霉的防效達(dá)71.66%，顯著高于棘孢木霉和多菌靈處理組?！窘Y(jié)論】棘孢木霉和深綠木霉對核盤菌均具有明顯的拮抗作用，可在一定程度上防治萵苣菌核病，其中深綠木霉的防治效果更佳，可將其應(yīng)用于萵苣菌核病的防治以提高萵苣產(chǎn)量和品質(zhì)，同時可減少化學(xué)防治對環(huán)境造成的破壞。

關(guān)鍵詞： 木霉;深綠木霉;萵苣;菌核病;生物防治

中圖分類號： S436.36 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）12-2962-09

Abstract：【Objective】To explore the effects of two Trichoderma strains on Sclerotinia sclerotiorum on lettuce and provide scientific basis for revealing the mechanism of Trichoderma and its application in S. sclerotiorum control. 【Me-thod】Response surface methodology was used to optimize the solid-state fermentation conditions of Trichoderma based on single factor experiment， and the optimal fermentation conditions of two kinds of Trichoderma（T. asperellum and T. atroviride） were obtained. Jasper lettuce was used as material to treat the root of lettuce by inoculating Trichoderma fermentation broth and S. sclerotiorum suspension（Treatment 1： T. asperellum+S. sclerotiorum; Treatment 2： T. atroviride+S. sclerotiorum; Treatment 3： S. sclerotiorum; Treatment 4： 50% carbendazim WP 800 times liquid spray+S. sclerotiorum; Treatment 5： sterile water）. The growth of lettuce was observed， and the activities of antioxidant enzymes [superoxide dismutase（SOD）， peroxidase（POD） and catalase（CAT）]， malondialdehyde（MDA）， proline（Pro） and chlorophyll contents in lettuce leaves were measured on the day 3， 6， 9， 12 and 15 after inoculation. 【Result】The two kinds of Trichoderma fermentation liquid could reduce the damage of S. sclerotiorum to lettuce to a certain extent， and improve the activity of antioxidant enzymes. Among them， the activity of SOD， POD and CAT reached the maximum growth rate after the treatment of T. atroviride， which were 85.32%， 78.05% and 43.50% respectively. Compared with S. sclerotiorum group， MDA and Pro content decreased significantly in T. asperellum and T. atroviride groups， with the largest decrease of 17.16%， 28.41% and 29.48%， 30.44% respectively. Trichoderma could effectively resist the damage of S. sclerotiorum to plants， and the effect of T. atroviride was more obvious. The chlorophyll content of 6-15 d after treatment was significantly higher than that of T. asperellum group（P<0.05， the same below）， and the maximum growth rate was? as 1.112 times as that in T. asperellum. Trichoderma treatment could reduce the incidence of S. sclerotiorum， and had fine control effect on lettuce S. sclerotiorum. Among them， the control effect of T. atroviride was 71.66%， which was significantly higher than that in T. asperellum and carbendazim groups. 【Conclusion】Both T. asperellum and T. atroviride have obvious antagonistic effect on S. sclerotiorum， and can control S. sclerotiorum of lettuce to a certain extent. T. atroviride has better control effect， and can be applied to control the lettuce S. sclerotiorum to improve the yield and quality of lettuce， and redu-cing environmental damage through chemical control.

Key words： Trichoderma; Trichoderma atroviride; lettuce; Sclerotinia sclerotiorum; biological control

Foundation item： Basic Public Welfare Research Project of Zhejiang（LGN19C140003， LGN18C140006）

0 引言

【研究意義】萵苣（Lactuca sativa）為菊科（Compositae）萵苣屬（Lactuca）1～2年生草本植物，作為一種常見蔬菜在我國各地普遍栽培，其地上與地下部分均具有極高的食用和藥用價值。近年來，由于農(nóng)作物種植密度增大、結(jié)構(gòu)趨向單一及病原拮抗菌減少等原因，萵苣菌核病等蔬菜土傳病害愈發(fā)嚴(yán)重。萵苣菌核病是由核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）引起的常發(fā)性病害，核盤菌寄主范圍廣，可通過分泌草酸和植物細(xì)胞壁降解酶類等侵害植物組織（李雙勝，2013），對萵苣的產(chǎn)量和品質(zhì)造成極大影響。已有研究證明，木霉（Trichoderma）是一類環(huán)境友好型的生防真菌，可引發(fā)植物體內(nèi)免疫相關(guān)酶類基因表達(dá)上調(diào)或激活免疫相關(guān)信號通路以增強(qiáng)寄主植物對病原菌的抗性（Nagaraju et al.，2012）。因此，探索不同木霉對萵苣菌核病的防治效果，對進(jìn)一步探明萵苣菌核病致病機(jī)理及提高萵苣產(chǎn)量和質(zhì)量具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前，國內(nèi)外已有將木霉應(yīng)用于植物病害防治的相關(guān)報道，主要是針對黃瓜枯萎?。ü茸婷舻龋?015）、番茄灰霉?。ɡ罴o(jì)順等，2018）、水稻紋枯?。⊿wain et al.，2018）、辣椒疫?。ㄈ~旻碩等，2019）和煙草黑脛病（Phytophthoranicotianae breda）（宋玉娟等，2020）等植物病害開展研究。不同木霉對各種植物土傳病害的防治效果不一，研究發(fā)現(xiàn)長柄木霉（T. longbrachiatum）對煙草黑脛病的相對防效為69.3%（張良等，2013），黃綠木霉（T. aureoviride）T1010對花生根腐病的防病效果在73.79%以上（陳建愛等，2018）。可見，木霉具有較高的生物防治價值，但不同木霉對不同植物病害的防治效果存在差異?？祻┢降龋?017）發(fā)現(xiàn)擬康寧木霉（T. koningiopsis）可通過重寄生作用產(chǎn)生抗菌類代謝產(chǎn)物，消解花生核盤菌菌絲，抑制菌核形成，進(jìn)而對花生菌核病產(chǎn)生拮抗作用。梁巧蘭等（2017）對木霉蛋白質(zhì)進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)深綠木霉T2中的蛋白質(zhì)類物質(zhì)TraT2A可激發(fā)百合對灰霉病的抗性，提高苯丙氨酸酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、過氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）等防御酶活性，對百合灰霉病表現(xiàn)出較強(qiáng)的防治效果。覃柳燕等（2017）研究表明，棘孢木霉（T. asperellum）菌株P(guān)Z6能通過提高香蕉葉SOD和過氧化氫酶（CAT）活性來清除活性氧，減輕細(xì)胞損害程度，從而增強(qiáng)香蕉植株的防病能力。趙興麗等（2020）通過平板拮抗試驗和溫室盆栽試驗，發(fā)現(xiàn)鉤狀木霉（T. hamatum）在辣椒根際定殖過程中對辣椒疫病具有生物防治作用，防治效果為53.33%?！颈狙芯壳腥朦c】運(yùn)用木霉菌防治植物土傳病害已成為當(dāng)前的研究熱點，但關(guān)于木霉防治萵苣菌核病的探究甚少，且缺乏對比不同木霉對萵苣菌核病防效差異及應(yīng)用的相關(guān)報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】在單因素試驗基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法進(jìn)行木霉固體發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，獲得2種木霉的最佳發(fā)酵優(yōu)化條件，結(jié)合盆栽試驗進(jìn)行木霉灌根接種處理，觀察萵苣生長情況，并測定萵苣葉片的抗氧化酶活性、丙二醛（MDA）、脯氨酸（Pro）及葉綠素含量等生理指標(biāo)，以明確2種木霉對萵苣菌核病的防效差異，旨在獲得對菌核病防治效果較好的木霉菌，為采用生物法防治萵苣菌核病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試萵苣品種為碧玉萵筍，種子由重慶科光種苗有限公司提供。供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。供試菌株：選取來自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心的深綠木霉（T.atroviride，編號ACCC33804）、棘孢木霉（T. asperellum，編號ACCC 31650）和核盤菌（S. sclerotiorum，編號ACCC36453）。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 試驗設(shè)計 試驗于2018年11月—2019年9月在浙江金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院進(jìn)行。先用清水浸泡種子8 h，再將種子放入冰箱冷藏室，4 ℃下冷藏72 h，然后取出種子放在蔭涼潮濕處催芽。種子催芽后進(jìn)行土培（5粒/盆），待萵苣苗長出4片真葉后，挑選長勢較一致的苗株，灌根接種木霉發(fā)酵液和核盤菌懸浮液，設(shè)5個處理：（1）棘孢木霉+核盤菌;（2）深綠木霉+核盤菌;（3）核盤菌;（4）50%多菌靈可濕性粉劑800倍液+核盤菌;（5）無菌水（空白對照，CK）。每處理3個重復(fù)。試驗在25 ℃、16 h光照的溫室中進(jìn)行。

1. 2. 2 單因素試驗 分別以固基比（玉米渣∶麥麩）、透氣性（紗布層數(shù)）、含水量和接種量4個因素進(jìn)行單因素試驗，探究同一因素不同梯度下木霉產(chǎn)孢量的差別。各因素水平見表1。

1. 2. 3 響應(yīng)面試驗 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以木霉在不同發(fā)酵條件下孢子的產(chǎn)量為響應(yīng)值，以固基比、透氣性、含水量和接種量為4個主要因素，采用Box-Behnken中心組合設(shè)計試驗，對發(fā)酵培養(yǎng)條件的參數(shù)進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化，從而獲得最佳發(fā)酵優(yōu)化條件。

1. 2. 4 測定項目及方法 接種后3、6、9、12和15 d，各處理采集等量萵苣葉片樣品于液氮中保存，分別采用NBT光化還原法（屠潔等，2003）、愈創(chuàng)木酚法（趙煬等，2015）和Na2S2O3滴定法（李小方和張志良，2016）測定抗氧化酶SOD、POD和CAT活性;采用硫代巴比妥酸法（Anantharaman et al.，2017）測定萵苣MDA含量;采用茚三酮顯色法（楊敏文，2002）測定Pro含量;采用乙醇提取比色法（Batista et al.，2019）測定葉綠素含量。

最大增長率（%）=（木霉處理組-同周期無菌水對照組）/無菌水對照組×100

最大降幅（%）=（核盤菌處理組-同周期木霉處理組）/核盤菌處理組×100

1. 2. 5 木霉菌對萵苣菌核病病情指數(shù)和防治效果試驗 在病情基本穩(wěn)定后測定病株率與嚴(yán)重度，計算病株率、病情指數(shù)和相對防效。參照孫葉爍等（2019）的標(biāo)準(zhǔn)記載病情：0級，無病;1級，輕微發(fā)病，病斑長度0～0.8 cm;3級，輕度發(fā)病，病斑長度0.9～1.6 cm;5級，中等發(fā)病，病斑長度1.7～2.4 cm;7級，高度發(fā)病，病斑長度2.5～3.2 cm;9級，嚴(yán)重發(fā)病，病斑長度大于3.3 cm。

病情指數(shù)=∑（病級數(shù)×該病級發(fā)病株數(shù)）/（最高發(fā)病級數(shù)×總調(diào)查株樹）×100

防治效果（%）=（對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù)）/對照區(qū)病情指數(shù)×100

1. 3 統(tǒng)計分析

運(yùn)用Design Expert 8.0.6對木霉最佳培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化并制作3D Surface圖。用SPSS 21.0和Excel 2016分析，計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤，以單因素方差分析法和Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析，并用Origin 8.5制圖。

2 結(jié)果與分析

2. 1 單因素試驗結(jié)果

試驗結(jié)果（表2和表3）表明，2種木霉均以固基比（玉米渣∶麥麩）=2∶1時的產(chǎn)孢效果最好;隨著含水量的增加，2種木霉的產(chǎn)孢量均呈先增加后下降的變化趨勢，當(dāng)含水量達(dá)50%后產(chǎn)孢量開始下降，說明當(dāng)環(huán)境達(dá)一定濕度后會抑制木霉菌絲的正常生長;棘孢木霉和深綠木霉分別在接種量為30和40 μL時的產(chǎn)孢效果最好;當(dāng)紗布層數(shù)為6層時最有利于木霉的生長。

2. 2 2種木霉響應(yīng)面條件優(yōu)化結(jié)果

通過對數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，建立固基比（X1）、含水量（X2）、接種量（X3）和透氣性（X4）與木霉產(chǎn)孢量（Y）的二次回歸模擬方程：棘孢木霉產(chǎn)孢量Y=（20.00+2.488X1-5.200X2-0.6046X3-1.842X4-6.625 X1X2-0.2625X1X3-0.7000X1X4+1.500X2X3+5.125X2X4-0.04875X3X4-7.825X12-4.431X22-11.21X32-9.618X42）×1010;深綠木霉產(chǎn)孢量Y=（30.00+0.5052X1-0.66488X2-0.6242X3-0.1570X4-1.492X1X2+0.01425X1X3+0.0335 X1X4-0.08325X2X3-0.5250X2X4-0.7525X3X4-1.494X12-1.4431X22-1.474X32-1.440X42）×109。

從響應(yīng)面回歸系數(shù)顯著性分析結(jié)果可知，各因素對棘孢木霉產(chǎn)孢量的影響排序為X2（含水量）>X1（固基比）>X4（透氣性）>X3（接種量），對深綠木霉產(chǎn)孢量的影響排序為X2（含水量）>X3（接種量）>X1（固基比）>X4（透氣性）。通過三維響應(yīng)面圖（圖1和圖2）分析可知棘孢木霉4種影響因素固基比、含水量、透氣性和接種量的優(yōu)化值分別為：5∶2、40%、6層和30 μL，深綠木霉4種影響因素的優(yōu)化值分別為：2∶1、45%、6層和40 μL。在最佳發(fā)酵條件下，棘孢木霉的產(chǎn)孢量為3×1011 CFU/mL，深綠木霉的產(chǎn)孢量為3×1010 CFU/mL，與預(yù)測值吻合較好，說明采用響應(yīng)面法優(yōu)化木霉產(chǎn)孢量有效。

2. 3 2種木霉對萵苣葉片抗氧化酶活性的影響

抗氧化酶具有保護(hù)植物免受氧化傷害的作用，與植物抗逆性密切相關(guān)。由圖3可知，木霉處理組（處理1和處理2）的SOD、POD和CAT活性均呈先上升后略微下降的變化趨勢，最終抗氧化酶活性均保持在高于多菌靈處理組的水平。2種木霉對萵苣葉片抗氧化酶活性的影響程度存在一定差異，深綠木霉處理下萵苣葉片的SOD、POD和CAT活性更高，與無菌水處理組比較，抗氧化酶活性在接種后12 d達(dá)最大增長率，分別為85.32%、78.05%和43.50%。可見，深綠木霉可較好地激活植物的抗氧化酶系統(tǒng)，在一定程度上緩解氧化損傷。

2. 4 2種木霉對萵苣葉片MDA含量的影響

MDA是膜脂過氧化的主要產(chǎn)物，其含量可反映膜結(jié)構(gòu)受害程度及機(jī)體的自我修復(fù)能力（Cao et al.，2019）。由圖4可知，棘孢木霉處理組的MDA含量呈先降后升的變化趨勢，與同周期核盤菌處理組相比，其最大降幅為17.16%，深綠木霉處理組的MDA含量顯著低于核盤菌處理組，最大降幅為29.48%。由此可知，木霉處理后可通過減少MDA積累以防止膜脂的過氧化作用。接種一段時間后，深綠木霉處理組的MDA含量明顯低于棘孢木霉和多菌靈處理組，說明深綠木霉對菌核病的防治效果優(yōu)于棘孢木霉和多菌靈。

2. 5 2種木霉對萵苣葉片Pro含量的影響

Pro是調(diào)節(jié)植物細(xì)胞滲透平衡和穩(wěn)定生物大分子結(jié)構(gòu)的一種蛋白質(zhì)組分。從圖5可看出，核盤菌處理組萵苣葉片Pro含量明顯增加，所受脅迫最嚴(yán)重，但木霉處理后Pro含量顯著降低（P<0.05，下同），在一定程度上緩解了核盤菌對萵苣造成的傷害。將2種木霉的處理效果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，深綠木霉處理組Pro含量在接種后3～15 d均低于棘孢木霉處理組，但差異不顯著（P>0.05），由此可知深綠木霉對核盤菌的拮抗作用較佳。棘孢木霉、深綠木霉和多菌靈3個處理組的Pro含量與核盤菌處理組相比最大降幅分別為 28.41%、30.44%和26.02%?？梢?，2種木霉對萵苣菌核病的緩解作用優(yōu)于化學(xué)藥劑。

2. 6 2種木霉對萵苣葉片葉綠素含量的影響

在逆境條件下，葉綠素含量與光合作用的強(qiáng)弱密切相關(guān)，可直接反映植物光合生理的情況。由圖6可知，只接種核盤菌處理組的萵苣葉片葉綠素含量隨處理時間的延長不斷下降，推測核盤菌可使葉綠素的合成受阻，進(jìn)而造成萵苣光合作用強(qiáng)度不斷減弱;而木霉處理組的萵苣葉片葉綠素含量呈先下降后上升的變化趨勢，且均顯著高于核盤菌處理組，表明木霉能有效抵御核盤菌對植物造成的侵害。其中，深綠木霉的促進(jìn)作用更明顯，處理后6～15 d深綠木霉處理組的萵苣葉片葉綠素含量均顯著高于棘孢木霉處理組，最高為棘孢木霉處理組的1.112倍，表明不同木霉對植物光合生理的影響具有差異性，且深綠木霉可更好地緩解核盤菌對萵苣光合系統(tǒng)造成的損傷。

2. 7 2種木霉對萵苣菌核病病情指數(shù)和防治效果的影響

由圖7-A可知，各處理病情指數(shù)以核盤菌組最高，深綠木霉最低，其中棘孢木霉和深綠木霉組的病情指數(shù)分別為45.28和23.25，均顯著低于核盤菌處理組和多菌靈處理組，說明木霉處理后可較好地降低菌核病的發(fā)病程度，且木霉的防治效果優(yōu)于多菌靈。2種木霉對萵苣菌核病的防治效果不一，其中深綠木霉的防效高達(dá)71.66%，顯著高于棘孢木霉和多菌靈處理組（圖7-B）。表明木霉可在一定程度上增強(qiáng)萵苣的抗逆性，降低菌核病的發(fā)病率和發(fā)病程度。

3 討論

木霉是自然界廣泛分布的一類生防真菌（Gadhi et al.，2020），大多數(shù)木霉對土傳病原真菌具有廣譜拮抗作用（Salas-Marina et al.，2011）。作為一種重要的生防因子，木霉可激活寄主自身的物理或化學(xué)屏障（Saravanakumar et al.，2016），誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性或局部抗性等發(fā)揮生防作用，從而增強(qiáng)其抗病能力（張春秋等，2018）。植物體內(nèi)的SOD、CAT和POD是細(xì)胞內(nèi)活性氧代謝的主要調(diào)節(jié)酶（李曉曼和王建軍，2019），其主要作用是分解清除因活性氧代謝產(chǎn)生的H2O2，避免超氧自由基對細(xì)胞膜的攻擊（李艷娟等，2017）;POD還是木質(zhì)素合成的關(guān)鍵酶之一，其在體內(nèi)的活性變化能反映細(xì)胞受損壞程度（覃柳燕等，2017）。孫冬梅等（2010）在葉面接種大豆菌核病菌后測定相關(guān)酶活性變化，發(fā)現(xiàn)施用木霉拮抗菌劑可促進(jìn)相關(guān)酶活性的提高。本研究結(jié)果表明，核盤菌處理下萵苣的抗氧化酶系統(tǒng)呈先增后減的變化趨勢，說明萵苣受核盤菌侵害后會發(fā)生氧化應(yīng)激和膜脂過氧化反應(yīng)，短時間激活植物體內(nèi)抗氧化酶防御系統(tǒng)進(jìn)行抵抗，但長時間下導(dǎo)致細(xì)胞代謝無法正常進(jìn)行。而施加2種木霉后，萵苣葉片的SOD、CAT和POD活性明顯提高，說明木霉可在一定程度上提高萵苣體內(nèi)的抗氧化酶活性，且深綠木霉組的抗氧化酶活性明顯高于棘孢木霉組，深綠木霉在萵苣根部的定殖能更好地增加植物體內(nèi)與防御有關(guān)酶的合成或積累，增強(qiáng)萵苣的抗氧化酶防御系統(tǒng)。

當(dāng)脅迫強(qiáng)度超過植物體內(nèi)抗氧化酶對活性氧自由基的清除能力時即發(fā)生膜脂過氧化，MDA含量會上升（張紅楠等，2018）。本研究結(jié)果顯示，木霉處理后MDA含量明顯降低，伴隨著抗氧化酶活性的增高，說明木霉能激活植物體內(nèi)的抗氧化酶活性，從而引起免疫相關(guān)酶類基因表達(dá)上調(diào)，較大程度地減少MDA積累，以防止膜脂過氧化，提高寄主對病原菌的抗性，與Zhang等（2016）、尤佳琪等（2019）發(fā)現(xiàn)木霉拮抗菌劑可提升感染菌核病植物的相關(guān)酶活性來降低MDA含量的結(jié)果一致。而在核盤菌侵害下拮抗菌對萵苣體內(nèi)活性氧清除能力及細(xì)胞膜保護(hù)效應(yīng)會隨時間的延長有所減弱。施加木霉種類的不同對萵苣的抗病響應(yīng)也存在一定差異，接種深綠木霉可更好地增強(qiáng)萵苣的系統(tǒng)抗性，從而抵抗病原菌的侵害。當(dāng)植物發(fā)生膜脂過氧化損傷時，必然引起體內(nèi)滲透系統(tǒng)發(fā)生紊亂，而Pro作為一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，其積累能保持原生質(zhì)體滲透平衡及膜結(jié)構(gòu)完整（Teh et al.，2016;吳雅文等，2018）。從本研究結(jié)果可知，核盤菌侵染下萵苣體內(nèi)Pro含量顯著上升，證實當(dāng)植物受到逆境脅迫時，體內(nèi)的Pro含量急劇增加（韓德鵬等，2019）;但接種木霉和多菌靈可降低植物體內(nèi)Pro含量。棘孢木霉和深綠木霉處理組Pro含量與核盤菌組相比最大降幅分別為28.41%和30.44%，均低于多菌靈處理組，說明木霉能有效緩解核盤菌對萵苣的危害，且2種木霉對萵苣菌核病的緩解作用優(yōu)于化學(xué)藥劑，與Shukla等（2014）發(fā)現(xiàn)哈茨木霉可降低萵苣體內(nèi)Pro含量，緩解鹽脅迫的結(jié)論相符?？梢?，木霉有助于緩解核盤菌對植物的侵害，維持植物體內(nèi)的滲透平衡，增強(qiáng)植物的抗逆能力。

葉綠素作為綠色植物體內(nèi)最重要的營養(yǎng)色素，其含量與光合作用密切相關(guān)，也間接反映了植物抗逆性（Mauro et al.，2011）。Guler等（2016）研究發(fā)現(xiàn)深綠木霉能增加玉米（Zea mays L.）的葉綠素含量，進(jìn)而增強(qiáng)其在逆境下的光合作用。本研究結(jié)果顯示，各木霉處理組的萵苣葉片葉綠素含量顯著增加，說明木霉可提升植物的光合能力，維持光合電子傳遞的正常進(jìn)行（李江鵬等，2019;劉領(lǐng)等，2019）。但2種木霉對萵苣光合作用的影響存在一定差異，其中深綠木霉對萵苣葉綠素含量的促進(jìn)作用更強(qiáng)，表明深綠木霉能更好地降低病原菌對光合系統(tǒng)造成的傷害，提高萵苣對不良環(huán)境的適應(yīng)性。

不同木霉對病原菌的防治效果存在差異。李松鵬等（2018）對比了3種木霉對水稻紋枯病的防效，最低和最高防效分別為49.25%和80.60%。王依純等（2019）對3種木霉的抑菌活性及防病效果進(jìn)行初步研究，發(fā)現(xiàn)木霉對黃瓜枯萎病的防效在65%～82%，其中哈茨木霉610的防效最佳。本研究分析了不同處理組萵苣菌核病的病情指數(shù)和防治效果，發(fā)現(xiàn)木霉處理組間的病情指數(shù)存在差異，且均低于多菌靈處理組，其中深綠木霉的防治效果最佳，達(dá)71.66%，說明木霉可對土傳病害進(jìn)行防治，且種類不同，防治能力具有一定差異。

4 結(jié)論

木霉對萵苣核盤菌具有明顯的拮抗作用，其能通過增強(qiáng)萵苣體內(nèi)抗氧化酶活性、增加葉綠素含量及調(diào)節(jié)機(jī)體滲透作用等方式減緩核盤菌對植物造成的危害，從而降低萵苣的發(fā)病率和病情指數(shù)。其中，深綠木霉的防治效果更佳，可將其應(yīng)用于萵苣菌核病的防治以提高萵苣產(chǎn)量和品質(zhì)，同時可減少化學(xué)防治對環(huán)境造成的破壞。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）