舒然　李磊　龍友華　顧桂飛　張竹竹　尹顯慧

摘要：【目的】明確貴州獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)的種類(lèi)，為獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)病的防治提供理論依據(jù)?！痉椒ā繌馁F州省修文、息烽和大方縣采集感染根結(jié)線蟲(chóng)的獼猴桃植株，利用改良的貝曼漏斗法分離根結(jié)線蟲(chóng)，采用顯微鏡和掃描電鏡對(duì)獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行形態(tài)觀察與測(cè)量，結(jié)合分子生物學(xué)方法對(duì)線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定?！窘Y(jié)果】獼猴桃根系被根結(jié)線蟲(chóng)侵染后產(chǎn)生根結(jié)或瘤狀物，形成大小不等的根瘤，直徑為0.5～1.0 cm;直徑1.5～2.0 mm的須根受害較重，被侵染的須根產(chǎn)生單個(gè)或串生結(jié)節(jié)狀腫瘤，瘤狀物呈橢圓或近球形。獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)雌蟲(chóng)的排泄孔至頭端的距離是口針的1倍左右，口針微微向背部彎曲，唇盤(pán)呈啞鈴狀，側(cè)唇與中唇和唇盤(pán)分開(kāi)，分界明顯;雄蟲(chóng)唇盤(pán)大而圓，比中唇高，中唇外圍圓滑，與唇盤(pán)分界明顯。獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)種群與GenBank的南方根結(jié)線蟲(chóng)MK784570、KP234265和KF041336等線蟲(chóng)的序列相似度達(dá)99%?！窘Y(jié)論】侵染貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃的根結(jié)線蟲(chóng)為南方根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne incognita）。

關(guān)鍵詞： 獼猴桃;南方根結(jié)線蟲(chóng);形態(tài)觀察;鑒定;貴州省

中圖分類(lèi)號(hào)： S432.45;S436.634.1? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2020）12-2971-07

Abstract：【Objective】To clarify the species of kiwifruit root-knot nematodes and provide? reference for the prevention and treatment of kiwifruit root-knot nematodes. 【Method】In this experiment， kiwifruit plants infected with root-knot nematodes were collected from Xiuwen， Xifeng and Dafang in Guizhou， the modified Bayman funnel method was used to isolate root-knot nematodes， and root-knot nematodes were observed and detected using morphological features and molecular biology methods， and identified by molecular biology. 【Result】Root nodules or nodules were formed in the roots of the injured kiwifruit， and nodules of different sizes were formed， with diameters ranging from 0.5 to 1.0 cm. The fibrous roots with diameter at 1.5-2.0 mm were severely damaged， and the infected fibrous roots produced single or serial nodular tumors， and the tumors were elliptical or subspherical. The distance from the excretory hole to the head of the female root-knot nematode of kiwifruit was about oncec as that of the mouth needle， the needle was bent slightly toward the back， the lip disc was dumbbell-shaped， the lateral lip was separated from the middle lip and the lip disc， and the boundary was obvious. The males lip disc was large and round， higher than the middle lip， and the middle lip clearly demarcated from the lip disc. The nematode population had 99% sequence similarity with the nematodes MK784570， KP234265 and KF041336 from GenBank.【Conclusion】The results show that the root-knot nematode infected Xiuwen， Xifeng and Dafang kiwifruit in Guizhou is Meloidogyne incognita.

Key words： kiwifruit; Meloidogyne incognita; morphological observation; identification; Guizhou

Foundation item： Guizhou Science and Technology Support Plan Project（QKHZC〔2018〕2058，QKHZC〔2019〕2406）

0 引言

【研究意義】獼猴桃也稱(chēng)奇異果，其口感酸甜，富含維生素C，在我國(guó)廣泛種植（張安世等，2018）。目前，貴州省獼猴桃栽培面積排名全國(guó)第三，僅修文縣獼猴桃種植面積就超過(guò)1.0萬(wàn)ha。隨著獼猴桃栽培區(qū)域的擴(kuò)大，獼猴桃病害發(fā)生日益嚴(yán)重，其中根部病害以根結(jié)線蟲(chóng)侵害為主（敖禮林和饒衛(wèi)華，2000），常造成獼猴桃植株的根部腫大呈瘤狀或根結(jié)狀，引起地下病根腐爛（劉計(jì)權(quán)，2014），營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸通道受阻（郭衍銀等，2004），嚴(yán)重降低獼猴桃果實(shí)產(chǎn)量及品質(zhì)。根結(jié)線蟲(chóng)病已成為制約貴州獼猴桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要問(wèn)題之一。因此，對(duì)獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，并采取針對(duì)性防治措施，對(duì)保障貴州獼猴桃產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】根結(jié)線蟲(chóng)屬雜食性專(zhuān)性寄生蟲(chóng)（龍海等，2016;王虹云等，2018），1855年首次在英國(guó)報(bào)道（張燕霞，2011）。目前，在我國(guó)不同獼猴桃產(chǎn)區(qū)均有根結(jié)線蟲(chóng)發(fā)生危害的報(bào)道。方炎祖等（1991）報(bào)道，侵染湖南獼猴桃的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)主要是花生根結(jié)線蟲(chóng)（Meloidogyne arenaria）和南方根結(jié)線蟲(chóng)（M. incognita），以南方根結(jié)線蟲(chóng)為優(yōu)勢(shì)種群;張紹升等（1993）研究表明，福建建寧獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)為爪哇根結(jié)線蟲(chóng)（M. jaranica）和南方根結(jié)線蟲(chóng)，以爪哇根結(jié)線蟲(chóng)為優(yōu)勢(shì)種群;范學(xué)科和黨占平（2007）使用雌成蟲(chóng)會(huì)陰花紋及形態(tài)測(cè)量對(duì)獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)危害陜西關(guān)中地區(qū)獼猴桃的線蟲(chóng)為南方根結(jié)線蟲(chóng)。以上研究均采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)特征對(duì)獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定。鑒于使用形態(tài)觀察與測(cè)量鑒定線蟲(chóng)存在一定誤差，陳文等（2018）結(jié)合會(huì)陰花紋鑒定和分子生物學(xué)手段對(duì)貴州省修文縣的20份樣本進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明侵染修文縣獼猴桃的線蟲(chóng)種類(lèi)為南方根結(jié)線蟲(chóng);劉晨等（2018）采用形態(tài)學(xué)及PCR鑒定方法對(duì)陜西省周至縣獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行鑒定，明確其危害種類(lèi)為南方根結(jié)線蟲(chóng)。近年來(lái)，分子生物學(xué)技術(shù)快速發(fā)展，分子生物學(xué)鑒定方法已成為線蟲(chóng)種類(lèi)鑒定的重要手段之一（何清聰?shù)龋?020），ITS序列分析已應(yīng)用于黃瓜（黃英凱，2014）、煙草（楊艷梅等，2017）、花椒（曹業(yè)凡等，2019）、水稻（呂軍等，2019）和柑橘（何清聰?shù)龋?020）等不同作物上根結(jié)線蟲(chóng)的種類(lèi)鑒定。【本研究切入點(diǎn)】目前，有關(guān)貴州獼猴桃受根結(jié)線蟲(chóng)侵染后的根部形態(tài)、線蟲(chóng)形態(tài)描述及線蟲(chóng)危害特征等尚未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用顯微鏡和掃描電鏡對(duì)貴州獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行形態(tài)觀察與測(cè)量，以分子生物學(xué)手段為輔助鑒定獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)，并對(duì)其危害特征進(jìn)行描述，以期為貴州獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)病的防治提供理論支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

獼猴桃受害病根采集于貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃基地。將根結(jié)癥狀典型的獼猴桃根部沖洗干凈，晾干表面水分。采用改良的貝曼漏斗法分離根結(jié)線蟲(chóng)：先將發(fā)病的根部組織切成約1 cm的碎段，用雙層紗布包好后放入有清水的漏斗中，線蟲(chóng)在趨水性和引力的作用下從獼猴桃根部組織中逃逸出來(lái)，并在水中游動(dòng)，會(huì)沉降至漏斗底部末端的橡皮管中;24 h后打開(kāi)止水夾將止水橡皮管中的水和線蟲(chóng)引入干凈燒杯，從中吸取5 mL的水樣在3000 r/min離心3 min，倒掉上清液再將底部沉降剩余的線蟲(chóng)倒入20 mL盛有無(wú)菌水的培養(yǎng)皿中，得到分離的線蟲(chóng)，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 獼猴桃發(fā)病根部組織觀察

采用次氯酸鈉—酸性品紅染色法（張燕等，2011），褪色完畢后切片置于電子顯微鏡（徠卡DM750，上海孚約商貿(mào)有限公司）下觀察、拍照。

1. 3 根結(jié)線蟲(chóng)形態(tài)掃描電鏡觀察

用塑料吸管將分離獲得的線蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中用蒸餾水清洗數(shù)次，緩慢加熱殺死線蟲(chóng)后移入4 ℃冰箱存放2 h取出進(jìn)行固定;再轉(zhuǎn)移至4 ℃條件下固定24 h，用去離子水清洗5～6次以徹底清除戊二醛，完成后轉(zhuǎn)移至5%鋨酸中，25 ℃下靜置2 h，用去離子水清洗下線蟲(chóng)上的鋨酸，將固定好的線蟲(chóng)依次置于不同濃度梯度的乙醇中脫水20 min。使用環(huán)氧樹(shù)脂干燥法處理線蟲(chóng)，鍍膜完成后將線蟲(chóng)置于掃描電鏡（MERLIN掃描電子顯微鏡，德國(guó)ZEISS公司）載物臺(tái)上噴金觀察（郭素枝等，2005;段玉璽，2011）。

1. 4 根結(jié)線蟲(chóng)形態(tài)鑒定

形態(tài)特征鑒定：參照張淑玲等（2019）的方法，先將線蟲(chóng)加熱殺死并固定，線蟲(chóng)脫水后制成玻片，然后使用顯微鏡觀察、測(cè)量并記錄數(shù)據(jù)。線蟲(chóng)雌蟲(chóng)形態(tài)計(jì)數(shù)測(cè)量：觀察線蟲(chóng)頭部特征，主要記錄指標(biāo)為體長(zhǎng)（L）、最大體寬（W）、口針長(zhǎng)度（Stylet）、口針基部球高和寬（Stylet knob height、Stylet knob width）、背食道腺開(kāi)口至口針基部距離（DGO）和排泄孔至頭端距離（Ex.P.）等值，顯微計(jì)數(shù)測(cè)量采用de Man公式。線蟲(chóng)雄蟲(chóng)形態(tài)計(jì)數(shù)測(cè)量：觀察線蟲(chóng)頭部和尾部主要特征，主要記錄指標(biāo)包括最大體長(zhǎng)（L）、最大體寬（W）、體長(zhǎng)/體寬（a）、口針長(zhǎng)度（Stylet）、口針基部球高和寬（Stylet knob height、Stylet knob width）、背食道腺開(kāi)口至口針基部距離（DGO）和交合刺長(zhǎng)度（Spicule）等值。

1. 5 根結(jié)線蟲(chóng)分子生物學(xué)鑒定

在光學(xué)顯微鏡下根據(jù)形態(tài)初步確定為同種線蟲(chóng)后，將20～30條2齡線蟲(chóng)參照張喆（2016）的方法提取根結(jié)線蟲(chóng)DNA。利用線蟲(chóng)rDNA-ITS的通用引物TW81（5'-GTTTCCGTAGGTGAACCTGC-3'）和AB28（5'-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGT-3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系50.0 μL：DNA模板20～50 ng，Taq聚合酶0.5 μL，dNTP 2.0 μL，10× Tap Buffer （Mg2+） 5.0 μL，上、下游引物（10 μmol/L）各2.0 μL，加ddH20至50.0 μL。擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃ 30 s，60 ℃ 25 s，72 ℃ 30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸8 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。以MEGA 6.0中的鄰接法（Neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。

2 結(jié)果與分析

2. 1 根結(jié)線蟲(chóng)侵染后獼猴桃根部癥狀

獼猴桃根系被根結(jié)線蟲(chóng)侵染后產(chǎn)生根結(jié)或瘤狀物（圖1），形成大小不等的根瘤，直徑為0.5～1.0 cm，長(zhǎng)出瘤狀物的須根部位開(kāi)始變黑至腐爛。根系洗凈后根瘤狀部位變黃，呈現(xiàn)明顯的畸形生長(zhǎng)狀態(tài)。直徑在1.5～2.0 mm的獼猴桃須根受害較重，被侵染的須根產(chǎn)生單個(gè)或串生結(jié)節(jié)狀腫瘤，瘤狀物呈橢圓或近球形。根腫瘤有時(shí)會(huì)長(zhǎng)出小根莖，小根莖被侵染后會(huì)產(chǎn)生次生根結(jié)根瘤（圖1-B）。受侵染的根產(chǎn)生的根結(jié)組織早期呈淡黃色（圖1-D），后期變壞死亡呈黑色，且較小的細(xì)根容易斷裂后腐爛。

2. 2 根結(jié)線蟲(chóng)侵染后獼猴桃根部解剖形態(tài)

獼猴桃健康正常根系（圖2-A和圖2-B）與被侵染根系（圖2-C、圖2-D、圖2-E和圖2-F）組織相比結(jié)構(gòu)發(fā)生較大變化，未被侵染的根系發(fā)育正常，根的皮層與維管束組織細(xì)胞排列整齊，被侵染的根系可觀察到根結(jié)線蟲(chóng)在寄主皮層細(xì)胞移動(dòng)（圖2-E），根結(jié)線蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至維管組織中后繼續(xù)危害取食。未被侵染的根系維管組織細(xì)胞排列整齊一致，各組織間的界限清晰可見(jiàn)，被侵染根系各組織間的界限模糊不清，且根系維管組織中形成了巨型細(xì)胞（圖2-D）。被侵染后發(fā)病形成的巨型細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)濃厚、多核，發(fā)育的細(xì)胞隨意排列，嚴(yán)重變性;同時(shí)，形成的巨型細(xì)胞阻隔了植物根系中央的維管組織（圖2-F）。巨型細(xì)胞發(fā)育成熟后植株根系即出現(xiàn)明顯的結(jié)節(jié)。部分巨型細(xì)胞在后期會(huì)出現(xiàn)空洞和衰敗凋亡。

2. 3 根結(jié)線蟲(chóng)的形態(tài)描述

從修文縣、息烽縣和大方縣3個(gè)獼猴桃種植區(qū)共分離到1006個(gè)根結(jié)線蟲(chóng)樣品，根據(jù)形態(tài)初步確定為同種線蟲(chóng)。獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)雌性線蟲(chóng)蟲(chóng)體呈球形、梨形（圖3-A），口針長(zhǎng)13～15 μm，錐部微微向背部彎曲，基部呈球形或扁圓形。排泄口在口針基部附近（圖3-B和圖3-D），掃描電鏡下唇區(qū)的唇盤(pán)稍微隆起，中唇近半圓形（圖3-C）。中唇與唇盤(pán)融合形成啞鈴狀，唇區(qū)融合或分界明顯（圖3-C）。雌蟲(chóng)的側(cè)區(qū)表現(xiàn)不明顯，有一些彎向陰門(mén)的線紋。雌蟲(chóng)的口針較粗，微微向背部彎曲，通常長(zhǎng)度20.4～25.6 μm，基部球形，背食道腺開(kāi)口于口針基部后3 μm處，排泄孔位于食道腺中部（圖3-B和圖3-D）。

雄性線蟲(chóng)呈蠕蟲(chóng)形，蟲(chóng)體粗大、體型較長(zhǎng)，蟲(chóng)體上體環(huán)明顯（圖4-A和圖4-B）。掃描電鏡下的唇區(qū)中部凹陷，唇盤(pán)大而圓，比中唇高;中唇外部圓滑，比唇盤(pán)窄，與唇盤(pán)之間分界明顯，側(cè)器口裂縫狀，位于唇盤(pán)兩側(cè)下方（圖4-C）;唇環(huán)不明顯且不完整;精子呈圓形，交合刺長(zhǎng)約30 μm，無(wú)交合傘微微腹彎，末端鈍圓（圖4-D）。

2. 4 根結(jié)線蟲(chóng)形態(tài)測(cè)量結(jié)果

由表1可知，雌蟲(chóng)體長(zhǎng)356.6～789.8 μm，體寬318.7～567.6 μm，口針長(zhǎng)度12.6～15.7 μm，口針基部球高和寬分別為1.6～2.7和2.7～4.6 μm。背食道腺開(kāi)口至口針基部距離為2.6～5.3 μm，排泄孔至頭端距離/口針長(zhǎng)度的比值為0.7～1.8。雄蟲(chóng)體長(zhǎng)達(dá)1567.0～2109.0 μm，a和b值分別為39.34～67.89和8.7～16.8，口針長(zhǎng)度17.8～26.8 μm，口針基部球高度和寬度分別為2.4～4.7和4.2～6.9 μm，交合刺長(zhǎng)20.9～37.9 μm。以上各形態(tài)的測(cè)量計(jì)算值與南方根結(jié)線蟲(chóng)基本一致。

2. 5 根結(jié)線蟲(chóng)分子鑒定結(jié)果

選用線蟲(chóng)通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果見(jiàn)圖6。目的條帶清晰、明亮，表明rDNA-ITS純度較高，結(jié)構(gòu)完整，大小約1000 bp。

2. 6 根結(jié)線蟲(chóng)rDNA-ITS序列系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建

將上述經(jīng)純化和測(cè)序得到的序列（大小為955 bp）提交至NCBI進(jìn)行BLAST搜尋，獲得與本測(cè)序序列相似度較高的17個(gè)序列?；诟Y(jié)線蟲(chóng)的rDNA-ITS序列使用MEGA 6.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。由圖7看出，本研究的獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)種群以99%的支持率與GenBank的17個(gè)南方根結(jié)線蟲(chóng)種群聚在一個(gè)支系上，與南方根結(jié)線蟲(chóng)MK784570、KP234265和KF041336等線蟲(chóng)的序列相似度達(dá)99%。由此可確定本研究采集的侵染獼猴桃的根結(jié)線蟲(chóng)為南方根結(jié)線蟲(chóng)（M. incognita）。

3 討論

獼猴桃當(dāng)前已作為貴州省精品水果進(jìn)行大力發(fā)展，是農(nóng)民增收致富的重要經(jīng)濟(jì)作物之一，而種植過(guò)程中的病害危害已嚴(yán)重威脅其產(chǎn)業(yè)發(fā)展（常青，2019）。其中線蟲(chóng)侵害是獼猴桃生產(chǎn)上的主要病害之一，獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)主要危害植株根部，從苗期到成株均可受害。

本研究觀察被線蟲(chóng)侵染的獼猴桃根部，發(fā)現(xiàn)受害的獼猴桃根部產(chǎn)生根結(jié)或瘤狀物，形成大小不等的根瘤，直徑在0.5～1.0 cm，與梁朋（2012）的研究結(jié)果一致。本研究病原線蟲(chóng)主要特征為：雌蟲(chóng)的排泄孔至頭端的距離是口針的1倍左右，口針微微向背部彎曲，唇盤(pán)呈啞鈴狀，側(cè)唇與中唇和唇盤(pán)分開(kāi)，分界明顯;雄蟲(chóng)唇盤(pán)大而圓，比中唇高，中唇外圍圓滑，與唇盤(pán)分界明顯，與Eisenback（1985）、黃英凱（2014）的描述基本相符。

本研究從田間采集獼猴桃根部發(fā)病部位經(jīng)室內(nèi)分離獲得線蟲(chóng)，并對(duì)獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)進(jìn)行形態(tài)觀察與形態(tài)測(cè)量，基于rDNA-ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，結(jié)合特異性擴(kuò)增條帶，明確了貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃園發(fā)生的根結(jié)線蟲(chóng)為南方根結(jié)線蟲(chóng)，與范學(xué)科和黨占平（2007）、陳文等（2018）的研究結(jié)果一致。獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)多樣，研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)獼猴桃上的根結(jié)線蟲(chóng)病主要由花生根結(jié)線蟲(chóng)（方炎祖等，1991）、爪哇根結(jié)線蟲(chóng)（張紹升等，1993）和南方根結(jié)線蟲(chóng)（范學(xué)科和黨占平，2007）引起。近年來(lái)，貴州從外省大量引進(jìn)獼猴桃苗木，本研究?jī)H發(fā)現(xiàn)了南方根結(jié)線蟲(chóng)，究其原因可能是試驗(yàn)樣本采集區(qū)域僅限于一個(gè)基地且樣本數(shù)量少。本研究?jī)H從形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)手段初步鑒定侵染獼猴桃的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)，至于貴州獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)發(fā)生規(guī)律、群體分布和侵染機(jī)制等方面有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法，明確侵染貴州省修文、息烽和大方縣獼猴桃的根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)為南方根結(jié)線蟲(chóng)，并對(duì)其形態(tài)特征和危害癥狀進(jìn)行描述，為獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)防治提供了一定理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

敖禮林，饒衛(wèi)華. 2000. 獼猴桃根線蟲(chóng)病及其綜合防治技術(shù)[J]. 中國(guó)南方果樹(shù)，29（3）： 43. [Ao L L，Rao W H. 2000. Kiwi fruit root nematode disease and its integrated control technology[J]. South China Fruits，29（3）： 43.]

曹業(yè)凡，汪來(lái)發(fā)，王曦茁，徐志倫，李央，姚玲. 2019. 九葉青花椒根結(jié)線蟲(chóng)病的病原鑒定[J]. 植物保護(hù)，45（5）： 242-246. [Cao Y F，Wang L F，Wang X Z，Xu Z L，Li Y，Yao L. 2019. Identification of root-knot nematode on Zanthoxylumarmatum var. novemfolius[J]. Plant Protection，45（5）： 242-246.]

常青. 2019. 陜西省獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)病發(fā)生現(xiàn)狀[G]//中國(guó)植物保護(hù)學(xué)會(huì).中國(guó)植物保護(hù)學(xué)會(huì)2019年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集：98-103. [Chang Q. 2019. Current status of kiwifruit root-knot nematode disease in Shaanxi Province[G]//Chinese Society of Plant Protection. Proceedings of the Chinese Academy of Plant Protection 2019 Annual Conference：98-103.]

陳文，孫燕芳，吳石平，李添群，唐靖文，龍海波. 2018. 貴州修文獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)的發(fā)生種類(lèi)與鑒定[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，31（1）： 84-88. [Chen W，Sun Y F，Wu S P，Li T Q，Tang J W，Long H B. 2018. Occurrence status and species identification of root knot nematode endangering kiwifruit in Xiuwen County，Guizhou[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，31（1）： 84-88.]

段玉璽. 2011. 植物線蟲(chóng)學(xué)[M]. 北京： 科學(xué)出版社：213-214. [Duan Y X. 2011. Plant nematodes[M]. Beijing： Science Press：213-214.]

范學(xué)科，黨占平. 2007. 獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)病的病原鑒定及其防治[J]. 陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，（6）： 71-72. [Fan X K，Dang Z P. 2007. Pathogen identification and prevention of kiwifruit root-knot nematode disease[J]. Shaanxi Agricultural Scien-ce，（6）： 71-72.]

方炎祖，羅桂菊，朱曉香，廖新光，王宇道. 1991. 湖南獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)病害研究[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，（4）： 40-42.[Fang Y Z，Luo G J，Zhu X X，Liao X G，Wang Y D. 1991. A study on the root-knot nematode disease of kiwifruit in Hunan[J]. Hunan Agricultural Sciences，（4）： 40-42.]

郭素枝，章淑玲，陳玉芬，張紹升. 2005. 甘薯莖線蟲(chóng)的掃描電鏡制樣方法[J]. 福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），34（1）： 43-45. [Guo S Z，Zhang S L，Chen Y F，Zhang S S. 2005. Sampling method of Ditylenchus destructor specimens for scanning electron microscopy[J]. Journal of Fujian Agriculture and Forestry University（Natural Science Edition），34（1）：43-45.]

郭衍銀，王秀峰，徐坤，朱艷紅，鄭永強(qiáng). 2004. 南方根結(jié)線蟲(chóng)對(duì)生姜生長(zhǎng)及內(nèi)源激素的影響[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，34（1）： 49-54. [Guo Y Y，Wang X F，Xu K，Zhu Y H，Zheng Y Q. 2004. Effects of Meloidogyne incognita on the growth and intrinsic hormones of ginger[J]. Acta Phytopathologica Sinica，34（1）： 49-54.]

何清聰，王東偉，張德詠，劉勇，王劍，成飛雪. 2020. 湖南柑橘根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)鑒定及特異性PCR檢測(cè)[J]. 植物保護(hù)，46（1）：179-184. [He Q C，Wang D W，Zhang D Y，Liu Y，Wang J，Cheng F X. 2020. Identification and PCR detection of citrus root-knot nematode in Hunan Province[J]. Plant Protection，46（1）：179-184.]

黃英凱. 2014. 福建省蔬菜基地根結(jié)線蟲(chóng)病病原鑒定及發(fā)病規(guī)律研究[D]. 福州： 福建農(nóng)林大學(xué). [Huang Y K. 2014. Pathogen and occurrence regularity of root-knot nematode disease in vegetable bases in Fujian Province[D]. Fuzhou： Fujian Agriculture and Forestry University.]

梁朋. 2012. 番茄嫁接苗對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的抗性評(píng)價(jià)及抗性機(jī)制的研究[D]. 重慶： 西南大學(xué). [Liang P. 2012. Study on the resistance evaluation of grafted tomato（Lycopersicon esculentum Mill.） seedlings and resistance mechanisms to Meloidogyne incognita[D]. Chongqing： Southwest University.]

劉晨，王晨光，張鋒，陳志杰，李英梅，張淑蓮. 2018. 周至縣獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)種類(lèi)鑒定[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，（2）：117-118. [Liu C，Wang C G，Zhang F，Chen Z J，Li Y M，Zhang S L. 2018. Identification of root-knot nematode on Actinidia chinensis in Zhouzhi County[J]. Modern Agricultural Science and Technology，（2）：117-118.]

劉計(jì)權(quán). 2014. 綿馬貫眾對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的抑制作用研究[D]. 太原： 山西大學(xué). [Liu J Q. 2014. Studies on inhibitory effect of Dryopteris crassirhizoma against Meloidogyne incognita[D]. Taiyuan： Shanxi University.]

龍海，李芳榮，程穎慧，謝泳桂，李一農(nóng). 2016. 根結(jié)線蟲(chóng)多樣性研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)植保導(dǎo)刊，36（2）： 22-26. [Long H，Li F R，Cheng Y H，Xie Y G，Li Y N. 2016. Research progress on diversity of root-knot nematodes[J]. China Plant Protection，36（2）： 22-26.]

呂軍，余藝濤，邱立新，李奔奔，謝群生，吳猛香. 2019. 湖南平江縣水稻根結(jié)線蟲(chóng)病發(fā)生調(diào)查及病原種類(lèi)分子鑒定[J].中國(guó)植保導(dǎo)刊，39（8）：15-19. [Lü J，Yu Y T，Qiu L X，Li B B，Xie Q S，Wu M X. 2019. Survey and molecular identification of rice root knot nematode in Pingjiang County，Hunan Province[J]. China Plant Protection，39（8）：15-19.]

王虹云，李濤，姚建剛，張麗莉，周楊，董泰麗，付傳翠，夏秀波，曹守軍. 2018. 新型雞糞發(fā)酵提取液對(duì)番茄生長(zhǎng)及根結(jié)線蟲(chóng)病的影響[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，49（6）：1130-1138. [Wang H Y，Li T，Yao J G，Zhang L L，Zhou Y，Dong T L，F(xiàn)u C C，Xia X B，Cao S J. 2018. Effects of a new type of chicken manure fermented extract on growth of tomato and root knot nematode[J]. Journal of Southern Agriculture，49（6）：1130-1138.]

楊艷梅，梁艷，袁紹杰，趙希城，胡先奇. 2017. 云南省部分煙區(qū)根結(jié)線蟲(chóng)形態(tài)和分子鑒定[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，48（2）： 284-291. [Yang Y M，Liang Y，Yuan S J，Zhao X C，Hu X Q. 2017. Morphology and molecular identification of root-knot nematode in partial tobacco growing areas in Yunnan[J]. Journal of Southern Agriculture，48（2）： 284-291.]

張安世，司清亮，齊秀娟，張中海. 2018. 獼猴桃種質(zhì)資源的SRAP遺傳多樣性分析及指紋圖譜構(gòu)建[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，34（1）：138-144. [Zhang A S，Si Q L，Qi X J，Zhang Z H. 2018. Genetic diversity and fingerprints of Actinidia germplasm resource based on SRAP markers[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，34（1）：138-144.]

張喆. 2016. 云南煙草根結(jié)線蟲(chóng)的種類(lèi)鑒定[D]. 廣州： 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院. [Zhang J. 2016. Identification of tobacco root-knot nematodes species from Yunnan Province[D]. Guangzhou： Zhongkai University of Agriculture and Engineering.]

張淑玲，李惠霞，徐鵬剛，劉永剛，于洪濤，劉向. 2019. 黑龍江腐爛莖線蟲(chóng)群體的分離和鑒定[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，49（6）：756-762. [Zhang S L，Li H X，Xu P G，Liu Y G，Yu H T，Liu X. 2019. Isolation and identification of Ditylenchus destructor from Heilongjiang[J]. Acta Phytopathologica Sinica，49（6）：756-762.]

張紹升，林尤劍，高日霞. 1993. 福建獼猴桃根結(jié)線蟲(chóng)病病原鑒定[J]. 福建農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），22（4）： 433-435. [Zhang S S，Lin Y J，Gao R X. 1993. Identification of root-knot nematode species parasitizing Actinidia in Fujian China[J]. Journal of Fujian Agriculture and Fore-stry University（Natural Science Edition），22（4）： 433-435.]

張燕，石紅利，郭愷，鄭經(jīng)武. 2011. 腎形腎狀線蟲(chóng)的生活史及繁殖能力[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），37（1）： 11-16. [Zhang Y，Shi H L，Guo K，Zheng J W. 2011. Life cycle and reproductive capacity of Rotylenchulus reniformis[J]. Journal of Zhejiang University（Agriculture and Life Sciences） ，37（1）： 11-16.]

張燕霞. 2011. 黃瓜漸滲系抗南方根結(jié)線蟲(chóng)病遺傳規(guī)律及分子標(biāo)記研究[D]. 南京： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué). [Zhang Y X. 2011. Study on inheritance and molecular markers of resistance to the root-knot nematode（Meloidogyne incognita） in cucumber introgression lines[D]. Nanjing： Nanjing Agricultural University.]

Eisenback J D. 1985. Diagnostic characters useful in the identification of the four most common species of root-knot nematodes（Meloidogyne spp.）[M]// Sasser J N，Carter C C. An advanced treatise on Meloidogyne（Vol I）： Biology and control. Ralergh： North Carolina University Graphics，95-112.

（責(zé)任編輯 麻小燕）