孫秀媛 徐克芳 戴婧

(1青海省心腦血管病專科醫(yī)院檢驗科,青海 西寧 810012;2上海新起點康復醫(yī)院內(nèi)科)

高血壓腦出血是指在基礎(chǔ)疾病高血壓的基礎(chǔ)上發(fā)生腦實質(zhì)內(nèi)出血，具有較高的致殘率和致死率，嚴重威脅人們生命健康〔1〕。高血壓腦出血由于血腫的占位性效應(yīng)，同時伴有血液循環(huán)紊亂，導致腦組織缺血缺氧，引起繼發(fā)性腦損傷，可遺留各種后遺癥，嚴重者也可因重要神經(jīng)中樞功能障礙而死亡〔2〕。膜聯(lián)蛋白(ANX)是一個鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白超家族，其生物學功能包括生物膜的形成、信號傳導、離子通道建立、抗炎、調(diào)節(jié)細胞的遷移和凋亡等，ANXA7是ANX家族成員之一，目前研究主要表明其與腫瘤具有密切關(guān)系，而與心血管疾病的相關(guān)性研究甚少〔3〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9是MMPs家族成員之一，其被激活后，可破壞血腦屏障的完整性而參與多種神經(jīng)疾病病理過程〔4〕。組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)-1是MMP-9內(nèi)源性特異性抑制劑，可抑制MMP-9表達〔5〕。本研究旨在探討高血壓腦出血患者ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值與早期腦損傷的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2015年8月至2018年1月青海省心腦血管病?？漆t(yī)院收治的高血壓腦出血患者226例，設(shè)為高血壓腦出血組。納入標準：經(jīng)頭顱CT確診腦出血；無既往腦出血史；發(fā)病至入院時間不超過6 h；本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，研究對象均知情同意。排除標準：腦腫瘤、腦外傷、腦血管畸形等引起的繼發(fā)性腦出血；急慢性感染；血液系統(tǒng)疾病；惡性腫瘤；老年癡呆或阿爾茨海默癥等認知功能障礙。在高血壓腦出血組中，男119例，女107例，年齡65～88歲，平均(67.42±8.36)歲，出血部位：基底節(jié)102例，枕葉61例，顳葉38例，額葉25例；根據(jù)改良愛丁堡+斯堪的納維亞腦卒中量表(MESS)對患者的神經(jīng)功能缺損程度進行評分，分為：輕度(0～15分)49例，中度(16～30分)105例，重度(17～45分)72例；根據(jù)腦出血量分為：小量出血量組(30～45 ml)99例，中量出血量組(46～60 ml)84例，大量出血量組(>60 ml)43例；根據(jù)格拉斯哥預后評分(GOS)將出院患者分為：預后良好組(GOS 4～5分)149例，預后不良組(GOS 1～3分)77例。選取同期到青海省心腦血管病專科醫(yī)院體檢的健康人群100例作為對照組，男54例，女46例，年齡65～87歲，平均(68.02±8.13)歲。

1.2研究方法 (1)ANXA7、MMP-9/TIMP-1比較：采集所有對象清晨空腹靜脈血3 ml，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，獲得血清后置于-80℃冰箱保存待檢；(2)MESS〔6〕得分0～45分，分數(shù)越高，神經(jīng)功能損越嚴重。輕度為0～15分，中度為16～30分，重度為17～45分；(3)采用GOS評價患者的預后〔7〕：恢復良好為5分：有輕度缺陷，但可以正常生活；輕度殘疾為4分：有殘疾，但可以獨立生活，可在保護下工作；重度殘疾為3分：有殘疾，日常生活都需照料；植物狀態(tài)為2分：只有最小反應(yīng)；死亡為1分。預后良好：GOS評分≥4分，預后不良：GOS評分<4分。

1.3統(tǒng)計學分析 采用SPSS19.0軟件進行t檢驗、方差分析、q檢驗、Pearson相關(guān)分析及Logistic多元回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比較 高血壓腦出血組ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1均顯著低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比較

與對照組比較：1)P<0.05

2.2高血壓腦出血患者不同神經(jīng)功能缺損ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較 隨著高血壓腦出血患者不同神經(jīng)功能缺損程度的加重，ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1不斷升高(P<0.05)。見表2。

表2 高血壓腦出血患者不同神經(jīng)功能缺損ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較

與輕度組比較：1)P<0.05；與中度組比較：2)P<0.05

2.3高血壓腦出血患者不同出血量ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較 隨著高血壓腦出血患者出血量的增加，ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1不斷升高(P<0.05)。見表3。

表3 高血壓腦出血患者不同出血量ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較

與小量出血組比較：1)P<0.05；與中量出血組比較：2)P<0.05

2.4高血壓腦出血患者不同預后情況ANXA7、MMP-9/TIMP-1的比較 預后良好組ANXA7、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1顯著低于預后不良組(P<0.05)。見表4。

表4 高血壓腦出血患者不同預后情況ANXA7、MMP-9/TIMP-1比值的比較

與預后不良組比較:1)P<0.05

2.5高血壓腦出血患者入院時ANXA7、MMP-9/TIMP-1與各相關(guān)指標的相關(guān)性分析 經(jīng)過Pearson相關(guān)性分析，ANXA7、MMP-9/TIMP-1與高血壓腦出血患者MESS、出血量、GOS均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表5。

表5 高血壓腦出血患者入院時ANXA7、MMP-9/TIMP-1與各相關(guān)指標的相關(guān)性分析

2.6高血壓腦出血患者腦損傷的Logistic回歸分析 以MESS評分為因變量，以ANXA7(<30 μg/L=1,≥30 μg/L=1)、MMP-9/TIMP-1(<0.8=0,≥0.8=1)為自變量，經(jīng)Logistic多元逐步回歸分析，ANXA7、MMP-9/TIMP-1是高血壓腦出血患者發(fā)生腦損傷的預警因素。見表6。

表6 高血壓腦出血患者腦損傷的logistic回歸分析

3 討 論

高血壓腦出血是臨床常見病，腦出血引起的血腫可導致病灶中心神經(jīng)細胞損傷，也會造成血腫周圍的神經(jīng)組織損傷；同時高血壓腦出血還可破壞血腦屏障，血腫周圍聚集大量炎癥細胞，釋放出的炎癥因子擴大免疫炎癥反應(yīng)，引起繼發(fā)性腦損傷〔8～10〕。

ANX也叫作鈣磷脂結(jié)合蛋白，其成員主要以四具體的形式存在，有極高的同源性。ANXA7在腦組織中廣泛表達，通過促進質(zhì)膜融合，參與機體的分泌過程〔11，12〕。Gerelsaikhan等〔13〕研究表明，ANXA7與突出小體相關(guān)蛋白(SNAP)-23存在相互作用。SNAP-23主要表達于腦組織中，且分布于突出后膜，參與突觸的融合及神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，可以促進神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的胞吐〔14〕。因此推測ANXA7可能是通過與SNAP-23作用，影響進神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的胞吐過程。有研究表明〔15〕，發(fā)生腦出血繼發(fā)性腦損傷后，ANXA7表達上升，且與SNAP-23/ SNAP-25的作用增多；通過hr ANXA7的干預，可以促進ANXA7與SNAP-23/SNAP-25的作用，提高谷氨酸水平，加劇腦損傷進程，而ANXA7抗體則具有相反的作用。

MMPs家族是一類肽鍵內(nèi)切酶，可以降解細胞外基質(zhì)，而細胞外基質(zhì)可維持血腦屏障〔16〕。MMP-9可降解細胞外基質(zhì)成分中的層黏連蛋白、纖維連接蛋白等，導致毛細血管通透性增加，使得血腦屏障破壞，導致血管源性水腫形成，由此參與腦出血后引起的繼發(fā)性腦損傷〔17〕。Egashira等〔18〕研究表明，在蛛網(wǎng)膜下腔出血后引起的血腦屏障和腦白質(zhì)損傷中，MMP-9起了很大作用。TIMP-1是MMP-9的抑制劑，可與其特異性結(jié)合，形成復合物，從而抑制MMP-9活性，對腦組織起到保護作用〔19〕。由上可知，TIMP-1/MMP-9動態(tài)平衡可以作為評估高血壓腦出血后降低血腫進展和減輕血管源性水腫的治療靶點。李丹東等〔20〕研究表明，實驗性大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH) MMP-9/TIMP-1比值與基底動脈痙攣和腦組織含水量具有顯著的相關(guān)性，可以作為判斷SAH后早期腦損傷的指標。

本研究結(jié)果提示ANXA7、MMP-9/TIMP-1與高血壓腦出血患者的腦損傷及腦出血量有密切關(guān)系。因為高血壓腦出血后主要存在炎癥反應(yīng)，而MMP-9、TIMP-1是與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的細胞因子，劇烈的炎癥反應(yīng)會引起腦損傷，因此對腦神經(jīng)細胞分泌的細胞因子有影響，由此推斷這是ANXA7水平升高的原因。本研究也進一步說明，當高血壓腦出血逐漸恢復后，ANXA7、MMP-9/TIMP-1水平也隨之恢復平衡狀態(tài)。

本研究結(jié)果提示ANXA7、MMP-9/TIMP-1可能參與高血壓腦出血的腦損傷病理過程，分析其可能原因是正常人MMP-9/TIMP-1處于一個動態(tài)平衡，當受到刺激后，就會失去平衡。高血壓腦出血發(fā)生后，形成的血腫會刺激大量炎性因子的釋放，其中就包括MMP-9和TIMP-1，且MMP-9升高水平明顯高于TIMP-1，導致MMP-9/TIMP-1比值升高，過量的MMP-9通過降解細胞外基質(zhì)破壞的血腦屏障的完整性，引起腦水腫，導致大量炎癥因子進入腦組織，進一步加劇腦損傷；腦神經(jīng)細胞在炎性因子的刺激下分泌更多的ANXA7，因此與SNAP-23/SNAP-25的作用增加，導致谷氨酸水平提高，加劇腦損傷。因此，MMP-9/TIMP-1與ANXA7參與高血壓腦出血腦損傷可能是一個上下游的關(guān)系，但其具體作用機制還有待進一步的分子生物學研究。

綜上，ANXA7、MMP-9/TIMP-1與高血壓腦出血患者的腦損傷程度有關(guān)，可作為預后的評估指標。