王改芳

(呂梁學(xué)院生命科學(xué)系 ， 山西呂梁033000)

復(fù)合微生態(tài)制劑是由多種有益的單體活性微生物經(jīng)過培養(yǎng)、增菌、發(fā)酵等多種特殊工藝制成的一種應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)的活菌制劑，復(fù)合微生態(tài)制劑具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡、提高消化機(jī)能和免疫力、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育等多種優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中[1]。酵母菌是一種兼性厭氧微生物，該菌主要存在于牛、羊、鹿等反芻動(dòng)物的瘤胃中，豬 、雞、兔等單胃動(dòng)物的盲腸及結(jié)腸中，具有易培養(yǎng)、易繁殖特點(diǎn)，該菌中含有蛋白質(zhì)、維生素等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)，尤其是酵母菌細(xì)胞壁所含的甘聚寡糖，可以提高機(jī)體免疫機(jī)能和抗氧化能力[2-3]。國(guó)內(nèi)關(guān)于酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑在肉羊養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用較少。本試驗(yàn)以杜寒雜交肉羊?yàn)檠芯繉?duì)象，添加不同比例的酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑，分析其對(duì)杜寒雜交肉羊免疫機(jī)能及抗氧化能力的影響，為進(jìn)一步的酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑的臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑由酵母菌(9.0×109CFU/g)、枯草芽孢桿菌(4.5×108CFU/g)、乳酸桿菌(2.0×109CFU /g)、乳雙歧桿菌(2.0×109CFU/g) 組成，為發(fā)酵的淡黃色的固體粉末，由呂梁學(xué)院生命科學(xué)系微生物實(shí)驗(yàn)室制備；細(xì)胞因子(IL-2、IL-6)ELISA試劑盒、免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)ELISA試劑盒，均購(gòu)自 Elabscience 公司；超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒，均購(gòu)自北京中控生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 體重為(20±2.2)kg健康杜寒雜交肉羊120只，由山西呂梁杜寒雜交肉規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)提供。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理 采用單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選擇120只健康杜寒雜交肉羊，隨機(jī)分成4個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。分別為空白對(duì)照組(1組)和5.0%(2組)、10.0%(3組)、15.0%(4組)酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑添加組，試驗(yàn)期為56 d。按照山西呂梁市杜寒雜交肉羊規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)與管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)和管理，定期疫苗防疫和驅(qū)蟲，飼養(yǎng)試驗(yàn)以每個(gè)重復(fù)為單位，單獨(dú)采食、自由采食。基礎(chǔ)日糧配制參照美國(guó)國(guó)家研究委員會(huì)NRC(2004年)推薦的中國(guó)肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，精料制成顆粒飼料(直徑為6mm，長(zhǎng)度為10 mm)，按照常規(guī)的精粗比混合飼喂。飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrition level (dry matter basis)

1.3.2 免疫及抗氧化能力指標(biāo)測(cè)定 在試驗(yàn)第1、28、56天，每個(gè)組隨機(jī)抽取10只杜寒雜交肉羊采血分離血清。按照說明書測(cè)定免疫指標(biāo)(IL-2、IL-6、IgG、IgM、IgA)和抗氧化能力指標(biāo)(T-SOD、GSH-Px、T-AOC)。

1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)結(jié)果用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以每個(gè)重復(fù)為單位進(jìn)行單因素多重因素比較，分析其各個(gè)試驗(yàn)組的差異顯著性，以P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊免疫機(jī)能的影響 由表2可知，在試驗(yàn)第1天時(shí)，試驗(yàn)2、3、4組杜寒雜交肉羊血清中IgG、IgA、IgM含量均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)；在試驗(yàn)期第28、56天時(shí)，試驗(yàn)2組杜寒雜交肉羊的血清中IgG、IgA含量均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)3、4組杜寒雜交肉羊的血清中IgG、IgA含量均顯著高于1組(P<0.05)。試驗(yàn)2、3、4組血清中IgM含量均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)。

表2 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊血清中免疫球蛋白含量檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of immunoglobulin content in serum of Duhan crossbred sheep by yeast compound microecological preparation

由表3可知，在試驗(yàn)第1天時(shí)，試驗(yàn)2、3、4組杜寒雜交肉羊血清中IL-2、IL-6含量均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)；在試驗(yàn)第28、56天時(shí)，試驗(yàn)2組杜寒雜交肉羊血清中IL-2含量高于1組，但差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)3、4組杜寒雜交肉羊血清中IL-2含量均顯著高于1組(P<0.05),試驗(yàn)2、3、4組杜寒雜交肉羊血清中IL-6含量均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)。

表3 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊血清中細(xì)胞因子含量的檢測(cè)結(jié)果Table 3 Detection of cytokines in serum of Duhan crossbred mutton sheep by yeast compound microecological preparation

2.2 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊抗氧化能力的影響 由表4可知，在試驗(yàn)第1天時(shí)，試驗(yàn)2、3、4組杜寒雜交肉羊的血清中T-SOD、T-AOC、 GSH-Px活性均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)；在試驗(yàn)第28、56天時(shí)，試驗(yàn)2組杜寒雜交肉羊的血清中T-SOD、T-AOC活性均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)，試驗(yàn)3、4組杜寒雜交肉羊的血清中T-SOD、T-AOC活性均顯著高于1組(P<0.05)，試驗(yàn)2、3、4組杜寒雜交肉羊血清中GSH-Px含量均高于1組，但差異不顯著(P>0.05)。

表4 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊血清中抗氧化能力指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果Table 4 The test results of compound microecological preparation of Saccharomyces cerevisiae on the indexes of antioxidant capacity in the serum of Duhan crossbred sheep

3 討論

3.1 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊免疫機(jī)能的影響 動(dòng)物機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)主要包括體液免疫和細(xì)胞免疫，其中體液免疫主要由球蛋白介導(dǎo)，組成體液免疫的球蛋白主要由IgG、IgA、IgM組成， 免疫球蛋白IgG主要作用于抗感染免疫；IgA在黏膜免疫中起著重要的作用；IgM具有很強(qiáng)的殺菌功能，是體液免疫中出現(xiàn)的最早的抗體[4]。因此，

血清中免疫球蛋白含量是評(píng)價(jià)免疫機(jī)能的重要指標(biāo)之一。細(xì)胞免疫中主要以IL-2、IL-6細(xì)胞因子為主，IL-2主要作用于T淋巴細(xì)胞，具有增殖、調(diào)節(jié)及抗體產(chǎn)生等作用，在細(xì)胞免疫過程中具有重要作用[5]。IL-6主要作用于 B細(xì)胞分化、增殖及再次產(chǎn)生免疫應(yīng)答，為調(diào)節(jié)性細(xì)胞免疫因子[6]。因此，動(dòng)物血清中免疫球蛋白的含量及細(xì)胞因子的含量高低直接反映機(jī)體的免疫功能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加10.0%、15.0%的酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑可以顯著提高杜寒雜交肉羊血清中IgG、IgA和IL-2含量(P<0.05)，在試驗(yàn)期間，試驗(yàn)組的血清中IgM和IL-6含量均高于1組，但差異不明顯(P>0.05)。因而證實(shí)酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑可以提高杜寒雜交肉羊體液免疫和細(xì)胞免疫水平，從而提高免疫機(jī)能。劉明生等[7]報(bào)道了復(fù)合微生物制劑可以提高蛋雞的免疫球蛋白含量。胡興義等[8]報(bào)道了復(fù)合益生菌制劑可以提高哺乳仔豬免疫水平。酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑中所含的生物活性物質(zhì)可以調(diào)節(jié)杜寒雜交肉羊的免疫系統(tǒng)，促進(jìn)體內(nèi)的免疫球蛋白及細(xì)胞因子的合成與分泌，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能。

3.2 酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)杜寒雜交肉羊抗氧化能力的影響 相關(guān)研究表明，動(dòng)物機(jī)體在新陳代謝過程中可以產(chǎn)生多種的氧化自由基，自由基誘發(fā)動(dòng)物機(jī)體中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷，清除機(jī)體多余自由基對(duì)于維持動(dòng)物健康具有重要意義[9-10]。動(dòng)物體內(nèi)具有完整的抗氧化體系，如T-AOC、T-SOD、CAT和GSH-Px等，這些系統(tǒng)可以通過多種方式清除體內(nèi)的自由基，維持機(jī)體內(nèi)代謝平衡，促進(jìn)動(dòng)物正常生長(zhǎng)[11]。因此，血清中T-AOC、T-SOD和GSH-Px活性的高低是評(píng)價(jià)抗氧化能力的重要的指標(biāo)之一。本試驗(yàn)結(jié)果表明，10.0%、15.0%的酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑添加，可以提高杜寒雜交肉羊的抗氧化能力。與王傳龍等[12]報(bào)道的酵母菌培養(yǎng)物可以提高蛋雞抗氧化性能一致?？赡苡捎诮湍妇鷱?fù)合微生態(tài)制劑中所含有的有效成分激活了體內(nèi)的酶系統(tǒng)，促進(jìn)自由基在體內(nèi)的代謝，清除多余的自由基，提高了抗氧化能力，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)為下一步的酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑在羊生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。