曾 李，倪冬姣，，熊愛軍，張?jiān)鲇瘢?深，吳日紅，邢孔萍，郭 麗，盧秋詠

(1 播恩生物技術(shù)股份有限公司，江西 贛州 341000；2農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 贛州 341000；3 佛山播恩生物科技有限公司，廣東 佛山 528000)

我國是油料生產(chǎn)和消耗大國，除大豆外，每年榨取各類油脂后，能剩下1 500萬t以上的各種餅粕。由于受多種因素的制約，餅粕在飼料中應(yīng)用不足30%[1]，大量餅粕只能簡(jiǎn)單用作肥料或者廢棄，不但浪費(fèi)資源，而且嚴(yán)重污染環(huán)境。在當(dāng)前集約化規(guī)模養(yǎng)殖生產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)相矛盾的情況下，有效合理地利用餅粕成為研究熱點(diǎn)。茶籽粕是茶籽提取茶油后剩下的殘?jiān)瑩?jù)統(tǒng)計(jì)我國每年有近百萬噸茶籽粕未被有效利用。由于加工工藝的不同，茶籽粕含有濃度高低不等的茶皂素以及單寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子，同時(shí)還含有較高水平的植物多糖、多酚和類黃酮等功能性營養(yǎng)成分[2-4]。微生物發(fā)酵可以降解茶籽粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高發(fā)酵料中有機(jī)酸和小肽的含量，降低茶籽粕中粗纖維的含量。發(fā)酵茶籽粕的生產(chǎn)工藝要求低，生產(chǎn)成本不高。本研究主要是選取海蘭褐蛋雞，在蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加發(fā)酵茶籽粕，探討其對(duì)海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能、雞蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)以及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響情況，為發(fā)酵茶籽粕在蛋雞生產(chǎn)中的科學(xué)應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 發(fā)酵菌種

枯草芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌均由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生物飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2 發(fā)酵茶籽粕

混合發(fā)酵菌種為乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌，按5∶4∶1的比例混合。茶籽粕、玉米和豆粕按8∶1∶1的比例混合，隨后均勻粉碎作為發(fā)酵底物。初始發(fā)酵條件為：pH=6～7，溫度為30 ℃～32 ℃，發(fā)酵水分28%～30%，固態(tài)密閉發(fā)酵7 d后，儲(chǔ)存?zhèn)溆?。發(fā)酵茶籽粕的營養(yǎng)成分指標(biāo)見表1。

1.1.3 試驗(yàn)日糧

基礎(chǔ)日糧由播恩生物技術(shù)股份有限公司提供。日糧組成及營養(yǎng)水平參照NRC和海蘭褐育種公司蛋雞營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，見表2。

1.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物

150日齡健康的海蘭褐蛋雞1 200羽。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

1 200羽150日齡的健康海蘭褐蛋雞隨機(jī)分成2組，每組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)300羽蛋雞。1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；2組為試驗(yàn)組，所用飼料由基礎(chǔ)日糧添加4%發(fā)酵茶籽粕混合而成。試驗(yàn)蛋雞采用4層階梯式籠養(yǎng)；每天以人工光照和自然光照相結(jié)合的方式進(jìn)行光明，時(shí)間為16 h；通風(fēng)采用機(jī)械通風(fēng)＋自然通風(fēng)；自由采食，自由飲水；按正常免疫程序接種疫苗，定期消毒。試驗(yàn)期為30 d，每日6:30、11:30和17:30喂料，每日11:00和17:00收集蛋，并進(jìn)行計(jì)數(shù)、標(biāo)記和存放，同時(shí)計(jì)算每日的產(chǎn)蛋率和破蛋率。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)和方法

1.3.1 產(chǎn)蛋性能指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)期間以重復(fù)為單位，每天記錄蛋雞的采食量、破蛋數(shù)、產(chǎn)蛋數(shù)和產(chǎn)蛋重量，每周統(tǒng)計(jì)1次每日平均采食量、產(chǎn)蛋率、破蛋率和料蛋比。

1.3.2 雞蛋品質(zhì)測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，以重復(fù)為單位，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取10枚雞蛋，測(cè)定雞蛋品質(zhì)。測(cè)定指標(biāo)包括蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃高度、蛋黃顏色與哈氏單位。

1.3.3 血清生化指標(biāo)測(cè)定

在試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取10羽蛋雞，翅靜脈采血，血液分別置于抗凝管中，靜置待有血清析出然后3 000 r/min離心10 min，取上層清液，置于-20 ℃冰箱待測(cè)，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，試劑盒由廣州京誠檢測(cè)集團(tuán)提供。測(cè)定總蛋白、白蛋白、球蛋白、葡萄糖、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯和尿酸的含量。

1.3.4 腸道菌群測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，從每重復(fù)中抽取5羽雞屠宰，分別取回腸和盲腸內(nèi)容物各2 g，放入已滅菌的塑料袋中，采用平板培養(yǎng)計(jì)數(shù)法進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，測(cè)定乳酸菌、大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量，以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌總數(shù)的對(duì)數(shù)表示。

1.4 數(shù)據(jù)分析方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用生物統(tǒng)計(jì)軟件SAS 9.1進(jìn)行單因素方差分析，試驗(yàn)的結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”來表示。

2 結(jié)果和分析

2.1 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

由表3可知，與對(duì)照組蛋雞相比，試驗(yàn)組日糧添加發(fā)酵茶籽粕后，蛋雞的日采食量提高了3.64%(P＜0.05)，產(chǎn)蛋率顯著提高2.81%(P＜0.05)，破蛋率顯著下降(P＜0.05)；料蛋比差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞雞蛋品質(zhì)的影響

由表4可知，與對(duì)照組蛋雞所產(chǎn)蛋相比，試驗(yàn)組蛋雞所產(chǎn)蛋的蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度分別提高了10.53%(P＜0.05)和11.96%(P＜0.05)；蛋黃高度、蛋黃顏色和哈氏單位均有不同程度的提高，但差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組蛋雞相比，試驗(yàn)組蛋雞血清中總蛋白、白蛋白、葡糖糖和甘油三酯的水平偏低，但差異不顯著(P＞0.05)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(降低3.93%，P＜0.05)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(降低8.41%，P＜0.05)和尿酸(P＜0.05)的含量顯著降低。

2.4 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

從表6可知，與對(duì)照組蛋雞的腸道菌群結(jié)構(gòu)相比，日糧中添加發(fā)酵茶籽粕后，試驗(yàn)組蛋雞回腸中乳酸菌含量顯著增加(P＜0.05)、大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量顯著減少(P＜0.05)；盲腸中乳酸菌的數(shù)量有所增加(P＞0.05)，大腸桿菌的數(shù)量顯著減少(P＜0.05)，沙門氏菌的數(shù)量有所減少(P＞0.05)。

3 討論

3.1 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

發(fā)酵茶籽粕是經(jīng)過脫殼、脫皂和微生物發(fā)酵等一系列技術(shù)手段處理后產(chǎn)生的一種優(yōu)質(zhì)飼料原料。有研究表明，茶籽粕中的提取物可作為一種天然綠色的飼料添加劑來代替抗生素，減少飼料中的抗生素使用量[5]。但是，未經(jīng)發(fā)酵處理的茶籽粕含有較高水平的抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)，會(huì)嚴(yán)重影響飼料的適口性和動(dòng)物腸道的消化吸收能力。本研究的試驗(yàn)結(jié)果顯示：在基礎(chǔ)日糧中添加4%的發(fā)酵茶籽粕，海蘭褐蛋雞的平均日采食量提高3.64%(P＜0.05)，平均產(chǎn)蛋率提高2.81%(P＜0.05)，破蛋率顯著降低(P＜0.05)。其原因可能是由于茶籽粕經(jīng)微生物發(fā)酵后，所含的大量纖維素被轉(zhuǎn)化為可消化的單糖和低聚糖，改善了適口性；同時(shí)產(chǎn)生了高含量的有機(jī)酸、小肽和酶，并含有大量的活性益生菌。這些發(fā)酵代謝產(chǎn)物提高了蛋雞對(duì)飼料中能量、蛋白質(zhì)、鈣和磷等養(yǎng)分的消化、吸收和利用。此外，發(fā)酵茶籽粕還含有微量的茶皂素、單寧和茶多酚等功能活性成分。單寧能夠降低蛋雞腸道的蠕動(dòng)，提高飼料消化率[6]，茶皂素能夠增加蛋雞腸道黏膜的通透性，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高飼料利用效率[4]。茶多酚的殺菌和抗氧化等功能可促進(jìn)動(dòng)物腸道吸收和利用日糧中的鈣、磷以及微量元素，增加蛋殼中鈣的含量，提高蛋重及產(chǎn)蛋率，增強(qiáng)蛋殼硬度，降低破蛋率[7]。本試驗(yàn)的結(jié)果也同樣顯示：發(fā)酵茶籽粕在提高產(chǎn)蛋率的同時(shí)，顯著降低了海蘭褐蛋雞產(chǎn)蛋的破蛋率。

3.2 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞雞蛋品質(zhì)的影響

蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色以及哈氏單位都是評(píng)價(jià)雞蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)[8]。蛋殼厚度及強(qiáng)度主要表現(xiàn)在蛋殼致密堅(jiān)固性上，其會(huì)受到飼料的營養(yǎng)物質(zhì)含量、養(yǎng)殖環(huán)境以及蛋雞健康狀況等不同條件的影響。崔闖飛等[9]的研究表明，在蛋雞飼料中添加枯草芽孢桿菌，雞蛋的蛋殼厚度和強(qiáng)度得到了明顯的提高。而本試驗(yàn)也獲得了相似的結(jié)果，日糧中添加用枯草芽孢桿菌發(fā)酵的茶籽粕后，蛋雞所產(chǎn)蛋的蛋殼厚度比對(duì)照組的提高了10.53%，蛋殼強(qiáng)度提高了11.96%。哈氏單位與雞蛋新鮮程度呈正相關(guān)，并且哈氏單位可以體現(xiàn)雞蛋的蛋白質(zhì)含量，其值越高表明蛋白黏稠度越高，雞蛋也就越新鮮[10]。另外，益生菌能促進(jìn)蛋雞對(duì)多種營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，而本試驗(yàn)所用的枯草芽孢桿菌、酵母菌以及乳酸菌在發(fā)酵茶籽粕中以活菌形式存在，促進(jìn)了海蘭褐蛋雞對(duì)維生素A和胡蘿卜素等的吸收，加速了有效色素的沉淀，從而提升了蛋黃的顏色質(zhì)量。本試驗(yàn)的結(jié)果跟前人的研究結(jié)果類似，說明發(fā)酵茶籽粕經(jīng)過復(fù)合益生菌發(fā)酵后含有高水平的活菌，可實(shí)現(xiàn)跟益生菌類似的功能，改善海蘭褐蛋雞的雞蛋品質(zhì)。

3.3 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

在本試驗(yàn)中，日糧中添加發(fā)酵茶籽粕后，蛋雞血清中總蛋白、白蛋白和免疫相關(guān)的酶低于對(duì)照組蛋雞的，但是差異不顯著，說明降低程度是在適當(dāng)可控的范圍內(nèi)變化。血液中總蛋白、白蛋白和酶類含量的高低表明了機(jī)體代謝情況以及免疫情況[11]，這些指標(biāo)在一定的范圍內(nèi)變化，說明試驗(yàn)所用的蛋雞處于相當(dāng)健康的水平。研究表明，尿酸作為蛋禽類氨基酸的最終代謝產(chǎn)物，其在血清中的濃度反映了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)分解的程度以及效率，本試驗(yàn)在日糧中添加發(fā)酵茶籽粕降低了雞血清中的尿酸含量。有研究表明，血清中尿酸的減少意味著蛋白質(zhì)在機(jī)體其他部位的沉積增多[12]。在本試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組蛋雞的產(chǎn)蛋率、料蛋比以及雞蛋品質(zhì)等結(jié)果也證實(shí)了發(fā)酵茶籽粕可以降低蛋雞血清中尿酸的含量，從而間接提高了試驗(yàn)組蛋雞的產(chǎn)蛋率及雞蛋品質(zhì)。

3.4 發(fā)酵茶籽粕對(duì)海蘭褐蛋雞腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

蛋雞腸道內(nèi)存在大量有益菌和有害菌，它們一方面參與腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收以及機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝等，另一方面與腸道的相互作用達(dá)成共生關(guān)系后一起維持腸道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)平衡。所以，蛋雞腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化會(huì)影響蛋雞的腸道健康，并影響機(jī)體的健康。馮華等[13]在日糧中添加乳酸菌后，蛋雞腸道中的大腸桿菌被抑制，同時(shí)數(shù)量顯著降低。馬春陽等[14]在蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加枯草芽孢桿菌后，發(fā)現(xiàn)蛋雞盲腸乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著增加，大腸桿菌數(shù)量顯著減少。本試驗(yàn)的結(jié)果也證實(shí)在海蘭褐蛋雞基礎(chǔ)日糧中添加發(fā)酵茶籽粕后，蛋雞腸道中乳酸菌的生長加快，沙門氏菌和大腸桿菌等有害微生物被抑制。另外，發(fā)酵茶籽粕所含的微量茶皂素、茶多酚和茶籽多糖等活性成分也可能會(huì)對(duì)病原菌產(chǎn)生一定的影響，從而改善腸道菌群的結(jié)構(gòu)，促進(jìn)海蘭褐蛋雞對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)更好地吸收，影響其生產(chǎn)性能和雞蛋品質(zhì)。

4 結(jié)論

飼料中添加4%的發(fā)酵茶籽粕能提高海蘭褐蛋雞的產(chǎn)蛋性能和雞蛋品質(zhì)，改善蛋雞腸道菌群結(jié)構(gòu)，提高蛋雞的健康水平。

參考文獻(xiàn)：(14篇；略)