◎王珊 許海燕 侯敏娜 劉艷紅 王青

絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino為葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物，絞股藍(lán)藥材產(chǎn)地分布較為廣泛，全世界約有16種2變種，我國(guó)有14種2變種，主要分布在秦嶺及長(zhǎng)江以南地區(qū)。曾被列為待開(kāi)發(fā)的第一位的“名貴中藥材”，且其也是藥食兩用常用藥材。研究發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)皂苷為絞股藍(lán)的主要活性成分，主要含達(dá)瑪烷型皂苷，其具有較好的調(diào)血脂、保肝等作用。目前絞股藍(lán)絞股藍(lán)以其獨(dú)特的身份，在醫(yī)藥、保健、養(yǎng)殖等行業(yè)已有較好的應(yīng)用。但絞股藍(lán)的品種較為混亂，不同采收期的絞股藍(lán)的質(zhì)量差別較大，因此開(kāi)展不同采收期絞股藍(lán)的質(zhì)量評(píng)價(jià)具有重要意義，因此本研究主要對(duì)不同采收期的絞股藍(lán)總皂苷的含量進(jìn)行比較研究，該研究為絞股藍(lán)的采收加工及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的理論依據(jù)。

一、材料

T6-新世紀(jì)紫外分光光度計(jì)（北京普析通用股份有限公司）、十萬(wàn)分之一電子天平（METTLER-XP-205，深圳市盛美儀器有限公司）、KQ-5200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、WELCH真空泵LVS 302 Z（伊爾姆真空設(shè)備貿(mào)易有限公司）、SB-1100型EYELA水浴鍋（東京理化器械株式會(huì)社）。

人參皂苷Re對(duì)照品（批號(hào)：110754-201834，中國(guó)食品藥品檢定所），水為純凈水，石油醚、香草醛、冰醋酸、高氯酸、乙醇、正丁醇等其余試劑均為分析純。

絞股藍(lán)樣品均為2019年從道地產(chǎn)區(qū)直接收集，經(jīng)陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院雷國(guó)蓮教授鑒定為為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物絞股藍(lán)（Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino的干燥全草。

二、方法與結(jié)果

1.對(duì)照品溶液制備。精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成濃度為0.501 mg.mL-1的對(duì)照品溶液，備用。

2.供試品溶液的制備。分別稱取5、6、7、8、9五個(gè)不同采收期絞股藍(lán)藥材干燥粉末（過(guò)20目篩）約1g，加石油醚適量，超聲處理兩次每次30 min，棄去石油醚，加60%乙醇50 mL，超聲處理兩次，每次45min，過(guò)濾，合并濾液，揮至無(wú)醇味，水溶液加水飽和正丁醇30 mL萃取3次，合并正丁醇溶液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5 mL，即得不同采收期絞股藍(lán)總皂苷供試品溶液。

3.最大波長(zhǎng)的確定。將顯色后的供試品和對(duì)照品在200～700 nm波長(zhǎng)范圍下掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)最大波長(zhǎng)為550 nm。

4.標(biāo)準(zhǔn)曲線制定。精密量取人參皂苷Re對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于 10 mL 試管中，揮干溶劑，分別精密加入0.2 mL5%的香草醛冰醋酸溶液和0.8 mL的高氯酸，混勻，密塞，置于60℃水浴鍋中15 min，取出后、冷卻，再加5 mL冰醋酸，混勻，以空白試劑為對(duì)照，在550 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中以吸光度A為縱坐標(biāo)（Y），以對(duì)照品取樣量（mg）為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線計(jì)算回歸方程為：Y=3.145X-0.0289，R2=0.998（n＝5）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果顯示，人參皂苷Re在0.967～0.501 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

5.精密度試驗(yàn)。精密吸取同一份人參皂苷Re對(duì)照品溶液，按照2.4項(xiàng)下方法操作，在同一條件下連續(xù)測(cè)定6次吸光度，計(jì)算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.4%，表明儀器精密度良好。

6.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取同一批絞股藍(lán)樣品，按照2.2項(xiàng)下方法，按照 2.4 項(xiàng)下方法操作，分別于 0、0.5、1、1.5、2.5、3 h 測(cè)定吸光度，計(jì)算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.3%，表明絞股藍(lán)樣品在3 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

7.重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批絞股藍(lán)樣品，按照2.2項(xiàng)下方法，平行制備6個(gè)批次供試品溶液，按照2.4項(xiàng)下下方法操作，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算人參皂苷Re吸光度的RSD為0.6%，表明該方法重復(fù)性良好。

8.加樣回收率試驗(yàn)。取已知含量（23.1 mg）的絞股藍(lán)藥材樣品6份，每份0.5g，精密稱定，每份分別精密加入一定量（23.1 mg）的人參皂苷Re對(duì)照品，按照2.2項(xiàng)下方法，按照2.4項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.3%，RSD為2.13%（n=6），結(jié)果表明該方法的回收率良好。

9.樣品測(cè)定。分別精密量取不同采收期的絞股藍(lán)供試品溶液，按照2.4項(xiàng)下方法操作，平行測(cè)定3次測(cè)定吸光度，結(jié)果如表1所示。從表1結(jié)果可以看出，不同采收期對(duì)絞股藍(lán)皂苷的含量影響較大，隨著絞股藍(lán)生長(zhǎng)時(shí)間的延續(xù)總皂苷的含量呈上升趨勢(shì)，在7月份的時(shí)候總皂苷的含量（平均含量為4.519%）達(dá)到最高，之后呈下降趨勢(shì)。該研究結(jié)果為絞股藍(lán)的產(chǎn)地采收加工及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

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