徐博倫，陳佳倩，羅德志，詹 煌，金 晨，李風(fēng)琴，劉會珍，劉 毅，黃慧蓮

(江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004)

香港瓜馥木Fissistigma uonicum(Dunn)Merr.為番荔枝科瓜馥木屬植物，是瑤醫(yī)老班藥之一。其根具有祛風(fēng)活絡(luò)、消腫止痛的功效，主要用于治療風(fēng)濕痹痛[1]。但在現(xiàn)已報道的文獻(xiàn)中，對香港瓜馥木化學(xué)成分的研究較少，對該植物的藥理作用研究比較模糊。長期以來，植物中的天然產(chǎn)物一直作為藥物創(chuàng)新與發(fā)現(xiàn)的不竭源泉，含有多種不同類型結(jié)構(gòu)新穎并具有良好生物活性的天然產(chǎn)物，這些天然產(chǎn)物是發(fā)現(xiàn)新的活性抗腫瘤藥物的重要資源。因此本實驗立足于藥用植物資源的現(xiàn)代化開發(fā)和應(yīng)用，應(yīng)用各類提取分離方法，從香港瓜馥木中分離得到的化合物單體，進(jìn)一步將1H NMR，13C NMR等核磁數(shù)據(jù)與波譜理論分析方法相結(jié)合進(jìn)行解析，準(zhǔn)確的鑒定活性物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并從中篩選具有抗腫瘤作用的化合物，從藥理學(xué)角度進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系比較，分析香港瓜馥木根莖部位的生物堿類成分在抗腫瘤方面的作用。

1 儀器與材料

LC3000高效液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司);Agilent 1260高效液相色譜儀(美國安捷倫科技公司);AV-400M核磁共振儀(德國Bruker公司)。Sephadex LH-20葡聚糖凝膠為瑞士Pharmacia公司生產(chǎn)。薄層色譜硅膠(化學(xué)純，青島海洋化工有限公司)；柱色譜硅膠(100～200，200～300目，青島海洋化工廠分廠)；乙酸乙酯、石油醚(30 ℃～60 ℃)、乙醇、二氯甲烷、乙腈、甲醇等試劑均為分析純(西隴化學(xué)科學(xué)股份有限公司)。

實驗用香港瓜馥木于廣東省通道縣隴城鎮(zhèn)恩科村地區(qū)采收，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)胡生福老師鑒定為瓜馥木屬植物香港瓜馥木Fissistigma uonicum(Dunn)Merr.。憑證標(biāo)本(標(biāo)本號：20180103)現(xiàn)保存于江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代制劑教育部重點實驗室。人肝癌細(xì)胞HepG-2、人胃癌細(xì)胞SGC-7901均購自中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫。

2 提取與分離

取干燥香港瓜馥木莖10 kg，采用乙醇(95%)回流提取3次，每次提取2 h趁熱將提取液濾出且合并，濃縮至無醇味，得到0.6 kg總浸膏。將所得總浸膏用適量的雙蒸水充分溶解，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇反復(fù)萃取至無顏色，分別得到石油醚部位89 g、二氯甲烷部位114 g、乙酸乙酯部位130 g、正丁醇部位231 g。

將二氯甲烷部位用適量的甲醇溶解后，采用硅膠(200～300目數(shù))色譜法進(jìn)行粗分，依次用不同的二氯甲烷/甲醇(100:1→10:1)比例進(jìn)行梯度洗脫，以每700 mL為1個流份收集合并，并采用薄層色譜法(TLC)檢測，將具有相同斑點的流份進(jìn)行合并，回收有機溶劑，得到9個流份(Fr.1-Fr.9)，且主要成分在Fr.3，F(xiàn)r.4，F(xiàn)r.5，F(xiàn)r.7。

Fr.3部位采用MCI色譜法(20%→100%甲醇)梯度洗脫進(jìn)行分離，得到5個流份(Fr.3.1-Fr.3.5)。Fr.3.2采用硅膠柱層析(石油醚/乙酸乙酯體系100:1→10:1)進(jìn)行梯度洗脫，得到5個流份(Fr.3.2.1-Fr.3.2.5)。Fr.3.2.2部位經(jīng)過半制備液相(比例為：65%的甲醇/水)制備得到化合物5(3.2 mg)，7(7.6 mg)；Fr.3.4部位上Sephadex LH-20凝膠(二氯甲烷/甲醇體系1:1)反復(fù)純化，得到4個流份(Fr.3.4.1-Fr.3.4.4)，主要的兩個Fr.3.4.2、Fr.3.4.3部位分別經(jīng)過經(jīng)ODS-C18柱(10%→100%甲醇)梯度洗脫純化后，用半制備液相(比例為：61%的甲醇/水)制備得到化合物1(6.4 mg)，9(4.6 mg)，經(jīng)過半制備液相(比例為：54%的甲醇/水)制備得到化合物3(4.3 mg)，4(7.1 mg)。

Fr.4部位用硅膠色譜法(二氯甲烷/甲醇體系100:1→10:1)梯度洗脫進(jìn)行分離，得到8個流份(Fr.4.1-Fr.4.8)。Fr.4.2部位上Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷/甲醇體系1:1)純化后得到了主要成分，通過ODS-C18柱(10%→100%甲醇)進(jìn)行分離，得到4個流份(Fr.4.2.1-Fr.4.2.4)，分別用半制備液相(比例為：41%的乙腈/水)制備得到化合物8(9.2 mg)，15(4.7 mg)，16(9.7 mg)。Fr.4.5部位上Sephadex LH-20凝膠(二氯甲烷/甲醇體系1:1)純化后得到了主要成分，通過ODS-C18柱(10%→100%甲醇)進(jìn)行分離，得到3個流份(Fr.4.5.1-Fr.4.5.3)，采用半制備液相(比例為：44%的乙腈/水)制備得到化合物2(3.9 mg)，6(8.9 mg)。

Fr.5部位采用MCI柱(20%→100%甲醇)梯度洗脫進(jìn)行分離，得到6個流份(Fr.5.1-Fr.5.6)。Fr.5.3部位上Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷/甲醇體系1:1)反復(fù)純化后得到主要成分，再上ODS-C18柱(10%→100%甲醇)進(jìn)行分離，得到4個流份(Fr.5.3.1-Fr.5.3.4)，分別經(jīng)過半制備液相(比例為：37%的乙腈/水)制備得到化合物10(5.2 mg)，13(4.1 mg)。Fr.5.5部位上Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷/甲醇體系1:1)純化后得到主要成分，用半制備液相(比例為：39%的乙腈/水)分別制備得到化合物12(4.7 mg)，14(9.1 mg)。

Fr.7部位上MCI柱(20%→100%甲醇)梯度洗脫進(jìn)行分離，得到5個流份(Fr.7.1-Fr.7.5)。Fr.7.2部位上Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷/甲醇體系1:1)分離純化后得到主要成分，再通過ODS-C18柱(10%→100%甲醇)進(jìn)行分離，得到4個流份(Fr.7.2.1-Fr.7.2.4)，分別經(jīng)過半制備液相(比例為：70%的甲醇/水)制備得到化合物11(7.3 mg)。Fr.7.3部位上Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷/甲醇體系1:1)純化后得到主要成分，經(jīng)半制備液相(比例為：68%的甲醇/水)制備得到化合物17(12.1 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

17個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物1：黃色粉末，分子式C16H8O3N。1H-NMR譜顯示在低場有7個芳香質(zhì)子，包括8.68(1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，8.39(1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-8)，7.94(1H，m，H-10)，7.69(1H，m，H-9)在D環(huán)未被取代的4個氫，以及8.84(1H，d，J=5.1 Hz，H-5)，8.07(1H，d，J=5.1 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子，δH7.60單峰歸屬為H-3。而δH6.53顯示有兩個氫是在去甲嗎啡生物堿的C-1和C-2處取代的亞甲二氧基的特征信號。在13C-NMR譜顯示有17個碳，包括1個羰基峰δc 181.2，一個連有氧原子的亞甲二氧基的碳信號δc 103.4，剩下15個雙鍵碳信號,表明中存在阿撲嗎啡骨架。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.84(1H，d，J=5.1 Hz，H-5)，8.68(1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，8.39(1H，dd，J=8.0，1.2 Hz，H-8)，8.07(1H，d，J=5.1 Hz，H-4)，7.94(1H，m，H-10)，7.69(1H，m，H-9)，7.60(1H，s，H-3)，6.53(2H，s，-OCH2O-)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：148.6(C-1)，106.1(C-1a)，122.7(C-1b)，151.8(C-2)，103.4(C-3)，135.5(C-3a)，124.7(C-4)，144.5(C-5)，144.5(C-6a)，181.2(C-7)，130.8(C-7a)，127.9(C-8)，128.6(C-9)，134.2(C-10)，127.1(C-11)，132.6(C-11a)，103.4(-OCH2O-)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報道基本一致，故鑒定化合物1為鵝掌楸堿。

化合物2：橙色粉末，分子式C19H13O5N。1H-NMR譜顯示有5個芳香族質(zhì)子，包括8.46(1H，d，J=8.9 Hz，H-11)，7.62(1H，d，J=8.9 Hz，H-10)在D環(huán)未被取代的2個氫，以及8.77(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，7.99(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子，而δH7.50單峰則歸屬為H-3；在δH6.48顯示有兩個氫是在去甲嗎啡生物堿的C-1和C-2處取代的亞甲二氧基的特征信號，還有δH3.94(3H，s，8-OCH3)，3.86(3H，s，9-OCH3)兩個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有19個碳，包括1個羰基峰δc 180.8，一個連有氧原子的亞甲二氧基的碳信號δc 103.0，兩個甲氧基碳信號(δc 60.6，56.1)剩下15個雙鍵碳信號。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.77(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.46(1H，d，J=8.9 Hz，H-11)，7.99(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)，7.62(1H，d，J=8.9 Hz，H-10)，7.50(1H，s，H-3)，6.48(2H，s，-OCH2O-)，3.94(3H，s，8-OCH3)，3.86(3H，s，9-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：153.3(C-1)，106.9(C-1a)，121.4(C-1b)，151.8(C-2)，102.2(C-3)，126(C-3a)，118.1(C-4)，144.2(C-5)，150(C-6a)，180.8(C-7)，135.1(C-7a)，146.9(C-8)，145.6(C-9)，123.6(C-10)，123.9(C-11)，125.4(C-11a)，103(-OCH2O-)，60.6(8-OCH3)，56.1(9-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報道基本一致，故鑒定化合物2為氧代克列班寧。

化合物3：黃色粉末，分子式C19H15O5N。在1H-NMR譜可觀察到有5個芳香族質(zhì)子，包括其中8.94(1H，d，J=9.1 Hz，H-11)，7.71(1H，d，J=2.8 Hz，H-8)，7.29(1H，dd，J=9.1，2.8 Hz，H-10)為芳香化合物上的ABX系統(tǒng)，以及8.92(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.26(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子；還有4.11(3H，s，3-OCH3)，4.06(3H，s，2-OCH3)，4.02(3H，s，1-OCH3)3個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有19個碳，包括1個羰基峰δc 181.2，3個甲氧基碳信號(δc 61.9，61,3，60.7)，剩下15個雙鍵碳信號,結(jié)合以上信號表明存在阿撲嗎啡骨架。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.94(1H，d，J=9.1 Hz，H-11)，8.92(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.26(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)，7.71(1H，d，J=2.8 Hz，H-8)，7.29(1H，dd，J=9.1，2.8 Hz，H-10)，4.11(3H，s，3-OCH3)，4.06(3H，s，2-OCH3)，4.02(3H，s，1-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：154.7(C-1)，115.1(C-1a)，121.4(C-1b)，147.4(C-2)，146.9(C-3)，130.4(C-3a)，119.1(C-4)，144.2(C-5)，144.8(C-6a)，181.2(C-7)，132.7(C-7a)，112.9(C-8)，157.4(C-9)，122.5(C-10)，129.7(C-11)，125.5(C-11a)，60.7(1-OCH3)，61.9(2-OCH3)，61.3(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報道基本一致，故鑒定化合物3為subsessilina。

化合物4：紅色粉末，分子式C19H15O5N。在1H-NMR譜可觀察到有5個芳香族質(zhì)子，包括8.71(1H，s，H-11)，7.74(1H，s，H-8)，7.62(1H，s，H-3)3個芳香環(huán)上的單峰氫信號，8.83(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.05(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子；還有4.06(3H，s，10-OCH3)，4.01(3H，s，2-OCH3)，3.99(3H，s，1-OCH3)3個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有19個碳，包括1個羰基峰δc 180.2，3個甲氧基碳信號(δc 60.2，56,3，55.5)，剩下15個雙鍵碳信號,結(jié)合以上信號表明存在阿撲嗎啡骨架。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物3僅有一個甲氧基的取代位置不同，其余信號數(shù)據(jù)相似。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.83(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.71(1H，s，H-11)，8.05(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)，7.74(1H，s，H-8)，7.62(1H，s，H-3)，4.06(3H，s，10-OCH3),4.01(3H，s，2-OCH3)，3.99(3H，s，1-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：150.5(C-1)，118.7(C-1a)，120.9(C-1b)，156.4(C-2)，106.8(C-3)，135.1(C-3a)，123.8(C-4)，144.4(C-5)，144.8(C-6a)，180.2(C-7)，126.4(C-7a)，113.3(C-8)，147.4(C-9)，152.8(C-10)，110.5(C-11)，127.1(C-11a)，55.5(1-OCH3)，60.2(2-OCH3)，56.3(10-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報道基本一致，故鑒定化合物4為芒籽香堿。

化合物5：黃色粉末，分子式C17H11O3N。在1H-NMR譜可觀察到有7個芳香族質(zhì)子，包括9.17(1H，d，J=8.2 Hz，H-11)，8.38(1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，7.90(1H，ddd，J=1.0，8.2 Hz，H-9)，7.67(1H，dd，J=1.0，8.2 Hz，H-10)4個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，以及8.79(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.03(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子，δH7.47歸屬為H-3單峰氫信號；還有δH4.02(3H，s，2-OCH3)1個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有17個碳，包括1個羰基峰δc 181.5，1個甲氧基碳信號δc 60.1，剩下15個雙鍵碳信號。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：9.17(1H，d，J=8.2 Hz，H-11)，8.79(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，8.38(1H，d，J=8.2 Hz，H-8)，8.03(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)，7.90(1H，ddd，J=1.0，8.2 Hz，H-9)，7.67(1H，dd，J=1.0，8.2 Hz，H-10)，7.47(1H，s，H-3)，4.02(3H，s，2-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：144.2(C-1)，110.6(C-1a)，118.4(C-1b)，155.1(C-2)，110.6(C-3)，131.5(C-3a)，121.0(C-4)，144.5(C-5)，157.8(C-6a)，181.5(C-7)，128.7(C-7a)，127.8(C-8)，113.0(C-9)，134.1(C-10)，128.2(C-11)，135.4(C-11a)，60.1(2-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道基本一致，故鑒定化合物5為7-oxodehydrocaaverine。

化合物6：黃色粉末，分子式C17H11O3N。在1H-NMR譜可觀察到有6個芳香族質(zhì)子，包括9.08(1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，8.35(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)，7.87(1H，m，H-10)，7.63(1H，d，J=7.5 Hz，H-9)4個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，以及8.94(1H，d，J=4.9 Hz，H-5)，8.27(1H，d，J=4.9 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子；還有δH4.14(3H，s，1-OCH3)，4.06(3H，s，2-OCH3)，4.05(3H，s，3-OCH3)3個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有19個碳，包括1個羰基峰δc 181.3，3個甲氧基碳信號(δc 61.9，61,4，61.0)，剩下15個雙鍵碳信號，分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物3僅在8號位少一個羥基，其余信號相似。其1H-NMR(DMSO，600 MHz)δ：9.08(1H，d，J=8.0 Hz，H-11)，8.94(1H，d，J=4.9 Hz，H-5)，8.35(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)，8.27(1H，d，J=4.9 Hz，H-4)，7.87(1H，m，H-10)，7.63(1H，d，J=7.5 Hz，H-9)，4.14(3H，s，1-OCH3)，4.06(3H，s，2-OCH3)，4.05(3H，s，3-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：148.2(C-1)，114.4(C-1a)，122.1(C-1b)，147.2(C-2)，156.4(C-3)，130.4(C-3a)，119.2(C-4)，144.4(C-5)，144.7(C-6a)，181.(C-7)，131(C-7a)，128(C-8)，128.4(C-9)，134(C-10)，127.6(C-11)，134.7(C-11a)，61(1-OCH3)，61.9(2-OCH3)，61.4(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報道基本一致，故鑒定化合物6為O-methylmoscatoline。

化合物7：黃色油狀物，分子式C18H13O3N。在1H-NMR譜可觀察到有7個芳香族質(zhì)子，包括9.14(1H，d，J=8.3 Hz，H-11)，8.37(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，7.89(1H，m，H-10)，7.67(1H，d，J=7.8 Hz，H-9)4個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，以及8.86(1H，d，J=5.1 Hz，H-5)，8.09(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子，和δH7.70歸屬為H-3的單峰氫信號；還有δH4.07(3H，s，1-OCH3)，3.99(3H，s，2-OCH3)2個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有18個碳，包括1個羰基峰δc 181.5，兩個甲氧基碳信號(δc 60,5，56.5)，剩下15個雙鍵碳信號。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物6僅在3號位少一個甲氧基，其余信號相似，結(jié)合以上信號表明存在阿撲嗎啡骨架。其1H-NMR(DMSO，600 MHz)δ：9.14(1H，d，J=8.3 Hz，H-11)，8.86(1H，d，J=5.1 Hz，H-5)，8.37(1H，dd，J=7.8 Hz，1.2 Hz，H-8)，8.09(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)，7.89(1H，m，H-10)，7.70(1H，s，H-3)，7.67(1H，dd，J=7.8 Hz，1.2 Hz，H-9)，4.07(3H，s，1-OCH3)，3.99(3H，s，2-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：144.7(C-1)，118.2(C-1a)，121.5(C-1b)，152(C-2)，107.9(C-3)，135.2(C-3a)，124.2(C-4)，144.5(C-5)，156.4(C-6a)，181.5(C-7)，131.7(C-7a)，128(C-8)，128.3(C-9)，134.6(C-10)，128.9(C-11)，133.9(C-11a)，60.5(1-OCH3)，56.5(2-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道基本一致，故鑒定化合物7為觀音蓮明堿。

化合物8：黃色粉末，分子式C17H11O4N。在1H-NMR譜可觀察到有7個芳香族質(zhì)子，包括9.14(1H，d，J=8.3 Hz，H-11)，8.37(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，7.89(1H，m，H-10)，7.67(1H，d，J=7.8 Hz，H-9)4個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，以及8.86(1H，d，J=5.1 Hz，H-5)，8.09(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)為氧化阿樸菲類生物堿的2個特征質(zhì)子，和δH7.70歸屬為H-3的單峰氫信號；還有δH4.07(3H，s，1-OCH3)，3.99(3H，s，2-OCH3)2個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有18個碳，包括1個羰基峰δc 181.5，兩個甲氧基碳信號(δc 60,5，56.5)，剩下15個雙鍵碳信號。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物6僅在3號位少一個甲氧基，其余信號相似，結(jié)合以上信號表明存在阿撲嗎啡骨架。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：12.0(1H，brs，NH)，9.47(1H，d，J=9.6 Hz，H-11)，8.09(1H，s，H-3)，7.94(1H，d，J=9.6 Hz，H-8)，7.67(2H，m，H-9，10)，7.49(1H，s，H-7)，4.05(3H，s，1-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：151.1(C-1)，117.2(C-1a)，124(C-1b)，152.8(C-2)，111.9(C-3)，124.8(C-3a)，177(C-4)，155.6(C-5)，130.4(C-6a)，117(C-7)，124.8(C-7a)，128.4(C-8)，127.8(C-9)，127.2(C-10)，126.6(C-11)，126.1(C-11a)，59.6(1-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道基本一致，故鑒定化合物8為4,5-dioxodehydroa-similobing。

化合物9：黃色粉末，分子式C18H13O4N。在1H-NMR譜顯示有一個寬單峰12.09(1H，brs，-NH)信號，還有6個芳香族質(zhì)子，包括9.46(1H，m，H-11)，7.95(1H，m，H-8)，7.69(2H，m，H-9，10)4個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，以及8.17(1H，s，H-3)，7.53(1H，s，H-7)分別為H-3、H-7的單峰氫信號；還有δH4.11(3H，s，1-OCH3)，4.06(3H，s，2-OCH3)2個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有18個碳，包括2個羰基峰(δc 176.9、155.5)，兩個甲氧基碳信號(δc 60.1，56.5)，剩下14個雙鍵碳信號。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物8僅在2號位的取代基有區(qū)別，其余信號較為相似。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：12.09(1H，brs，-NH)，9.46(1H，d，J=9.6 Hz，H-11)，8.17(1H，s，H-3)，7.95(1H，d，J=9.6 Hz，H-8)，7.69(2H，m，H-9，10)，7.53(1H，s，H-7)，4.11(3H，s，1-OCH3)，4.06(3H，s，2-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：152.7(C-1)，126(C-1a)，118.2(C-1b)，155.5(C-2)，112.6(C-3)，127.2(C-3a)，176.9(C-4)，153.8(C-5)，132.4(C-6a)，112.7(C-7)，128(C-7a)，130.2(C-8)，126.9(C-9)，124.7(C-10)，128.5(C-11)，123.6(C-11a)，60.1(1-OCH3)，56.5(2-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道基本一致，故鑒定化合物9為降賽法拉二酮B。

化合物10：黃色粉末，分子式C16H11O4N。在1H-NMR譜顯示有5個芳香族質(zhì)子，包括8.64(1H，s，H-5)，7.72(1H，d，J=8.6 Hz，H-8)，7.11(1H，d，J=8.6 Hz，H-7)3個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，以及δH7.66(1H，s，H-2)，7.04(1H，s，H-9)分別為H-2、H-9的單峰氫信號；還顯示有δH4.08(3H，s，4-OCH3)1個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有16個碳，包括1個羰基峰δc 168.2，一個甲氧基碳信號δc 59.4，剩下14個雙鍵碳信號，結(jié)合以上信號表明為馬兜鈴內(nèi)酰胺骨架。其1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.64(1H，d，J=2 Hz，H-5)，7.72(1H，d，J=8.6 Hz，H-8)，7.66(1H，s，H-2)，7.11(1H，dd，J=8.6 Hz，2 Hz，H-7)，7.04(1H，s，H-9)，4.08(3H，s，4-OCH3)；13C-NMR(DeOD，100 MHz)δ：121.8(C-1)，113.2(C-2)，151.6(C-3)，148.8(C-4)，120(C-4a)，127.3(C-4b)，122.6(C-4c)，111.7(C-5)，155.1(C-6)，116.9(C-7)，129.9(C-8)，127.6(C-8a)，104.1(C-9)，132.5(C-9a)，168.2(C-11)，59.4(4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道基本一致，故鑒定化合物10為aristololactam AIIIa。

化合物11：淡黃色油狀物，分子式C17H13O4N。在1H-NMR譜顯示有一個寬單峰10.90(1H，s，-NH)信號，還顯示有5個芳香族質(zhì)子，包括9.08(1H，d，J=7.2 Hz，H-5)，7.94(1H，d，J=7.2 Hz，H-8)，7.55(2H，m，H-6，7)4個在D環(huán)未被取代的芳香質(zhì)子，還有一個7.16(1H，s，H-9)單峰氫信號；還顯示有δH4.35(3H，s，2-OCH3),4.02(3H，s，4-OCH3)2個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有17個碳，包括1個羰基峰δc 166.7，兩個甲氧基碳信號(δc 62.4，59,6)，剩下14個雙鍵碳信號，結(jié)合以上信號表明為馬兜鈴內(nèi)酰胺骨架。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物10僅在2號位及7號位的兩個取代基有所不同，其余信號相似。其1H-NMR(DMSO，600 MHz)δ：10.90(1H，s，-NH)，9.54(1H，s，-OH)，9.08(1H，d，J=7.2 Hz，H-5)，7.94(1H，d，J=7.2 Hz，H-8)，7.55(2H，m，H-6，7)，7.16(1H，s，H-9)，4.35(3H，s，2-OCH3),4.02(3H，s，4-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：109.3(C-1)，148.5(C-2)，143.9(C-3)，149.6(C-4)，133.6(C-4a)，115.8(C-4b)，121.4(C-4c)，126.4(C-5)，125.7(C-6)，126(C-7)，128.8(C-8)，125.1(C-8a)，103.9(C-9)，134.7(C-9a)，166.7(C-11)，62.4(2-OCH3)，59.6(4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道基本一致，故鑒定化合物11為goniokpedaline。

化合物12：淺黃色粉末，分子式C18H19O4N。在1H-NMR譜顯示有7個芳香族質(zhì)子信號，全部為苯環(huán)上δH7.09(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，7.08(1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6′)，6.84(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′),6.70(2H，d，J=8.4 Hz，H-2,6)，6.67(2H，d，J=8.4 Hz，H-3,5)7個未被取代的質(zhì)子；另外顯示有δH7.43(1H，d，J=15.6 Hz，H-7′)，6.67(1H，d，J=15.6 Hz，H-8′)2個雙鍵氫信號；一個甲氧基3.85(3H，s，3′-OCH3)，并且在δH3.79(2H，q，J=7.6 Hz，H-8)，2.99(2H，t，J=7.4 Hz，H-7)有4個脂肪鏈氫信號，還有δH8.36(1H，s，4-OH)，8.11(1H，s，4′-OH)2個羥基信號。在13C-NMR譜顯示有18個碳，包括1個酰胺的羰基峰δc 166.7，1個甲氧基碳信號δc 55.7，以及2個脂肪鏈的碳信號(δc 35.7，41.9)，剩余2個苯環(huán)上的碳信號。其1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：8.36(1H，s，4-OH)，8.11(1H，s，4′-OH)，7.43(1H，d，J=15.6 Hz，H-7′)，7.24(1H，m，-NH)，7.09(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，7.08(1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6′)，6.84(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′),6.70(2H，d，J=8.4 Hz，H-2,6)，6.67(1H，d，J=15.6 Hz，H-8′)，6.67(2H，d，J=8.4 Hz，H-3,5)，3.85(3H，s，3′-OCH3)，3.79(2H，q，J=7.6 Hz，H-8)，2.99(2H，t，J=7.4 Hz，H-7)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)δ：130.5(C-1)，130.4(C-2)，116.3(C-3)，157.5(C-4)，116.3(C-5)，130.4(C-6)，35.7(C-7)，41.9(C-8)，127.4(C-1′)，111.2(C-2′)，148.8(C-3′)，149.3(C-4′)，116.8(C-5′)，122.5(C-6′)，140.3(C-7′)，119.8(C-8′)，166.7(C-9′)，55.7(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道基本一致，故鑒定化合物12為穆坪馬兜鈴酰胺。

化合物13：淺黃色粉末，分子式C18H19O4N。在1H-NMR譜顯示有7個芳香族質(zhì)子信號，全部為δH7.09(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，7.08(1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6′)，6.84(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′),6.70(2H，d，J=8.4 Hz，H-2,6)，6.67(2H，d，J=8.4 Hz，H-3,5)2個，苯環(huán)上未被取代的質(zhì)子；另外有δH7.41(1H，d，J=15.6 Hz，H-7′)，6.18(1H，d，J=15.6 Hz，H-8′)2個雙鍵氫信號，一個甲氧基δH3.85(3H，s，3′-OCH3)；并且在δH3.75(2H，q，J=7.6 Hz，H-8)，2.93(2H，t，J=7.4 Hz，H-7)有4個脂肪鏈氫信號，還有2個8.36(1H，s，4-OH)，8.07(1H，s，4′-OH)羥基信號。在13C-NMR譜顯示有18個碳，包括1個酰胺的羰基峰δc 167.6，一個甲氧基碳信號δc 55.9，一組雙鍵碳信號，以及2個脂肪鏈的碳信號(δc 35.5，41.9)，剩余12個芳香碳信號。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物12只因在雙鍵上的碳為兩種不同的構(gòu)型，導(dǎo)致這兩個碳的化學(xué)位移有所區(qū)別。其1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：8.36(1H，s，4-OH)，8.07(1H，s，4′-OH)，7.41(1H，d，J=15.6 Hz，H-7′)，7.20(1H，m，-NH)，7.09(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，7.08(1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6′)，6.84(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′)，6.70(2H，d，J=8.4 Hz，H-2,6)，6.18(1H，d，J=15.6 Hz，H-8′)，6.67(2H，d，J=8.4 Hz，H-3,5)，3.84(3H，s，3’-OCH3)，3.75(2H，q，J=7.6 Hz，H-8)，2.93(2H，t，J=7.4 Hz，H-7)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)δ：130.5(C-1)，130.4(C-2)，116.3(C-3)，157.5(C-4)，116.3(C-5)，130.4(C-6)，35.5(C-7)，41.9(C-8)，127.9(C-1′)，114.8(C-2′)，148.2(C-3′)，149.3(C-4′)，116.1(C-5′)，125.6(C-6′)，137.8(C-7′)，122(C-8′)，167.6(C-9′)，55.9(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道基本一致，故鑒定化合物13為順式阿魏酸酰對羥基苯乙胺。

化合物14：白色粉末，分子式C17H17O3N。在1H-NMR譜顯示有4組對稱芳香族質(zhì)子，分別為δH7.31(2H，d，J=14.1，6.6 Hz，H-2，6)，7.00(2H，d，J=8.3 Hz，H-2′，6′)，6.71(2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′)，6.68(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)；另外有δH7.29(1H，d，J=15.7 Hz，H-7′)，6.34(1H，d，J=15.7 Hz，H-8′)2個雙鍵氫信號，并且在δH3.32(2H，q，J=7.6 Hz，H-8)，2.64(2H，t，J=7.4 Hz，H-7)有4個脂肪鏈氫信號。在13C-NMR譜顯示有17個碳，包括1個酰胺的羰基峰δc 165.7，2個雙鍵碳信號，以及2個脂肪鏈的碳信號(δc 34.6，40.1)，剩余6組對稱的芳香碳信號。分析其1H和13C數(shù)據(jù)，表明該化合物與化合物12僅在3′位置上沒有取代基，其余信號相似。其1H-NMR(DMSO，600 MHz)δ：8.00(1H，t，J=5.5 Hz，-NH)，7.31(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，7.29(1H，d，J=15.7 Hz，H-7′)，7.00(2H，d，J=8.3 Hz，H-2′，6′)，6.71(2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′)，6.68(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.34(1H，d，J=15.7 Hz，H-8′)，2.64(1H，t，J=7.2 Hz，H-7)，3.32(2H，dd，J=14.1，6.6 Hz，H-8)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：129.4(C-1)，129.3(C-2)，115.2(C-3)161.8(C-4)，115.2(C-5)，129.3(C-6)，34.6(C-7)，40.1(C-8)，124(C-1′)，129.5(C-2′)，116.4(C-3′)，155.9(C-4′)，116.4(C-5′)，129.5(C-6′)，139.1(C-7′)，117.3(C-8′)，165.7(C-9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道基本一致，故鑒定化合物14為對羥基桂皮酰酪胺。

化合物15：黃色晶體(吡啶)，分子式C18H19O4N。在1H-NMR譜顯示有有7個芳香族質(zhì)子，分別為7.21(1H，d，J=0.5 Hz，H-1)，7.16(1H，dd，J=8.4，0.5 Hz，H-3)，7.10(1H，d，J=8.4 Hz，H-4)A環(huán)上的3個ABX系統(tǒng)的質(zhì)子信號，以及7.17(1H，d，J=8.0 Hz，H-13)，7,06(1H，d，J=8.0 Hz，H-9)，6.88(1H，d，J=8.0 Hz，H-10)，6.88(1H，d，J=8.0 Hz，H-12)B環(huán)上的2組對稱的質(zhì)子信號；另外還顯示有7.24(1H，d，J=12.9 Hz，H-15)，6.71(1H，d，J=12.9 Hz，H-16)1組順式的雙鍵信號，并且在δH3.88(2H，q，J=7.2 Hz，H-6)，2.99(2H，q，J=7.2 Hz，H-5)分別為H-6、H-5的4個脂肪鏈氫信號，在δH3.66(3H，s，OCH3)有1個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有18個碳，包括1個酰胺的羰基峰δc 166.8，12個芳香碳信號，1組順式的雙鍵碳信號δc 116.4(C-9)，130.5(C-10)，以及2個脂肪鏈的碳信號(δc 35.7，42.0)。其1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：7.24(1H，d，J=12.9 Hz，H-15)，7.21(1H，d，J=0.5 Hz，H-1)，7.17(1H，d，J=8.0 Hz，H-13)，7.16(1H，dd，J=8.4，0.5 Hz，H-3)，7.10(1H，d，J=8.4 Hz，H-4)，7.06(1H，d，J=8.0 Hz，H-9)，6.88(1H，d，J=8.0 Hz，H-10)，6.88(1H，d，J=8.0 Hz，H-12)，6.71(1H，d，J=12.9 Hz，H-16)，3.88(2H，q，J=7.2 Hz，H-6)，3.66(3H，s，OCH3)，2.99(2H，q，J=7.2 Hz，H-5)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)δ：119.8(C-1)，157.5(C-2)，121.9(C-3)，116.4(C-4)，130.5(C-4a)，35.7(C-5)，42.0(C-6)，166.8(C-8)，116.4(C-9)，130.5(C-10)，148.9(C-11)，130.4(C-12)，116.8(C-13)，148.2(C-14)，140.4(C-15)，111.3(C-16)，127.5(C-16a)，55.7(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道基本一致，故鑒定化合物15為Gusanlung C。

化合物16：黃色粉末，分子式C19H18O6。在1H-NMR譜可觀察到有5個芳香族質(zhì)子，全部為C環(huán)δH8.05(2H，m，H-2′，6′)，7.61(3H，m，H-3′，4′，5′)5個未被取代的芳香質(zhì)子；還可觀察到有δH6.86(1H，s，H-3)歸屬A環(huán)上的位移一個質(zhì)子；另外還有4.03(3H，s，7-OCH3)，3.97(3H，s，8-OCH3)，3.84(3H，s，6-OCH3)，3.78(3H，s，5-OCH3)4個甲氧基信號。在13C-NMR譜顯示有19個碳，包括1個羰基峰δc 166.7，4個甲氧基碳信號(δc 61.9，61.9，61.6，61.5)，12個芳香碳信號，有2個雙鍵碳信號δc 160.3(C-2)，107.6(C-3)。其1H-NMR(DMSO，600 MHz)δ：8.05(2H，m，H-2′，6′)，7.61(3H，m，H-3′，4′，5′)，6.86(1H，s，H-3)，4.03(3H，s，7-OCH3)，3.97(3H，s，8-OCH3)，3.84(3H，s，6-OCH3)，3.78(3H，s，5-OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：160.3(C-2)，107.6(C-3)176(C-4)，147.3(C-5)，143.7(C-6)，151.2(C-7)，137.8(C-8)，147.6(C-9)，114.4(C-10)，131.7(C-1′)，126(C-2′)，129.3(C-3′)，131(C-4′)，129.3(C-5′)，126(C-6′)，61.9、61.9、61.6、61.5(5，6，7，8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道基本一致，故鑒定化合物16為5,6,7,8-tetramethoxyflavone。

化合物17：白色粉末，分子式C22H26O8。在1H-NMR譜可觀察到有2組對稱的芳香族質(zhì)子δH6.63(4H，s，H-2′，2″，6′，6″)，有1組對稱的羥基質(zhì)子δH8.31(2H，s，4，4′-OH)，有3組對稱的脂肪鏈氫信號δH4.64(2H，s，H-2，6)，4.18(2H，s，H-4)，3.45(2H，s，H-8)，3.08(2H，s，H-1，5)，有4個甲氧基信號δH3.76(12H，s，4×OCH3)在13C-NMR譜顯示有22個碳，包括4個甲氧基碳信號56.08(2×OCH3)，53.81(2×OCH3)和12個芳香碳信號。其1H-NMR(DMSO，600 MHz)δ：8.31(2H，s，4，4′-OH)，6.63(4H，s，H-2′，2″，6′，6″)，4.64(2H，s，H-2，6)，4.18(2H，s，H-4)，3.45(2H，s，H-8)，3.08(2H，s，H-1，5)，3.76(12H，s，4×OCH3)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：53.8(C-1)，85.5(C-2)，71.2(C-4)，53.8(C-5)，85.5(C-6)，71.2(C-8)，131.6(C-1′)，103.7(C-2′)，148.0(C-3′)，134.9(C-4′)，148.0(C-5′)，103.7(C-6′)，131.6(C-1″)，103.7(C-2″)，148.0(C-3″)，134.9(C-4″)，148.0(C-5″)，103.7(C-6″)，56.08(2×OCH3)，53.81(2×OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道基本一致，故鑒定化合物17為(+)-丁香脂素。

表1 從香港瓜馥木分離鑒定所得化合物

4 細(xì)胞毒活性研究

將HepG-2、SGC-7901細(xì)胞株在37 ℃，5% CO2的條件下培養(yǎng)。收集呈對數(shù)期細(xì)胞鋪板，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至1×104個·mL-1，在96孔培養(yǎng)板中每孔加入100 μL細(xì)胞懸液。待細(xì)胞貼壁生長24 h后，加入待測樣品和對照組(陽性對照濃度為20 μg·mL-1的順鉑，待測樣品精密稱定后配制成約10 mmol·L-1的母液)，與細(xì)胞共同孵育72 h后，加入終濃度為5 mg·mL-1的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。吸棄上清，每孔再加入150 μL二甲基亞砜，在搖床上低速振蕩10 min。在多功能酶標(biāo)分析儀492 nm處測量各孔的吸光值(A)，計算各化合物的細(xì)胞抑制率和IC50值。

細(xì)胞抑制率=(A對照-A樣品)/(A對照-A空白)×100%

化合物1～15的IC50值見表2。結(jié)果顯示，在15個生物堿單體化合物中，化合物2，6，10，14對HepG-2顯現(xiàn)了很好的細(xì)胞毒活性，化合物6，7，10對SGC-7901有明顯的細(xì)胞毒活性。

表2 化合物1～15的細(xì)胞毒活性測試結(jié)果(IC50)

5 結(jié)論

瓜馥木屬植物中富含生物堿類化合物，在抗痛風(fēng)、抗真菌、抗腫瘤、抗菌等方面有很好的藥理活性。文獻(xiàn)調(diào)研顯示，目前對香港瓜馥木的化學(xué)研究報道較少，有必要對其進(jìn)行深入研究。本文分離鑒定了17個化合物，其中15個生物堿類成分(化合物4，11，14是從瓜馥木屬中首次分離得到)，并對生物堿類成分做了HepG-2(人肝癌細(xì)胞株)、SGC-7901(人胃癌細(xì)胞株)的細(xì)胞毒試驗。實驗結(jié)果表明，生物堿氧代克列班寧、O-methylmoscatoline、aristololactam BIIIa、對羥基桂皮酰酪胺對HepG-2顯現(xiàn)了很好的細(xì)胞毒活性，化合物O-methylmoscatoline、觀音蓮明堿、aristololactam AIIIa對SGC-7901有明顯的細(xì)胞毒活性。通過分析同類化合物的構(gòu)效關(guān)系，針對顯著活性的化合物，課題組后續(xù)將開展更為詳盡的藥效學(xué)追蹤試驗。本文的研究結(jié)果有利于揭示生物堿類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理活性，為促進(jìn)開發(fā)和利用瓜馥木屬植物資源提供依據(jù)。