王向輝

長春市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，吉林長春 130000

近年來，分子生物學(xué)檢測技術(shù)迅猛發(fā)展，已經(jīng)滲透到了醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的各個(gè)角落[1]，其中熒光定量PCR技術(shù)應(yīng)用較為廣闊，動(dòng)物疫病檢測領(lǐng)域也借助其快速、靈敏和特異的優(yōu)勢，大大地提高了動(dòng)物疫病檢測的準(zhǔn)確率，為常見動(dòng)物疫病的診斷提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持和保證。核酸提取作為熒光定量PCR檢測前期的一項(xiàng)普通操作，起著不可忽視的作用。本文將對比核酸提取儀和手動(dòng)核酸提取法的優(yōu)劣勢，為動(dòng)物疫病檢測提供借鑒和參考。

1 核酸提取儀

核酸提取儀，是通過預(yù)設(shè)的電腦程序來自動(dòng)化完成核酸提取任務(wù)的儀器。核酸提取儀分兩類：一類是較大型的，自動(dòng)化程度較高，稱為自動(dòng)液體工作站；另一類是體積較小的自動(dòng)核酸提取儀，可以配合商品化試劑自動(dòng)完成核酸提取過程。

大型自動(dòng)液體工作站設(shè)備和耗材價(jià)格昂貴，維護(hù)成本高，能夠一次提取大量檢測樣品，但是真正應(yīng)用較少；而小型自動(dòng)核酸提取儀具有運(yùn)行成本低、體積小和操作簡單等特點(diǎn)，受到很多實(shí)驗(yàn)室的歡迎，得到了廣泛的應(yīng)用。無論大型還是小型核酸提取儀，只需前期簡單操作并按照預(yù)設(shè)的電腦程序下達(dá)指令，減少了操作者的提取過程，縮小了人工操作引起的誤差，具有客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化特點(diǎn)。但對于檢測數(shù)量極少的樣品，顯然成本稍高，并且每個(gè)樣品的核酸含量不同，電腦程序?qū)λ写龣z樣品的純化體積均已固定，不能適時(shí)機(jī)動(dòng)地調(diào)節(jié)純化體積。

2 手動(dòng)核酸提取法

手動(dòng)核酸提取法同樣借助于商品化的試劑盒，操作者利用實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器并參照說明書操作步驟便可進(jìn)行核酸提取。

如果待檢樣品數(shù)量較少，從提取成本上考慮，手動(dòng)核酸提取法表現(xiàn)出低成本的優(yōu)勢，并且對于一般的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備要求不高。針對不同含量的樣品，可以機(jī)動(dòng)性的調(diào)節(jié)純化體積[2]。但是手動(dòng)核酸提取法操作過程中對于操作者的經(jīng)驗(yàn)有一定要求，因?yàn)槊總€(gè)人的操作習(xí)慣與熟練程度不同，不確定性較大，直接決定了提取到的核酸濃度和提取核酸需要的時(shí)間，進(jìn)而可能影響到后續(xù)檢測樣品的準(zhǔn)確率與時(shí)效，以常見手動(dòng)核酸提取法為例，操作過程中不可避免需要經(jīng)歷液體的棄去、離心管的反復(fù)開蓋、移液器的公用等幾個(gè)循環(huán)過程，因此極易產(chǎn)生交叉污染。

3 小結(jié)

提取到高質(zhì)量的核酸是確保準(zhǔn)確檢測的重要前提，目前大多數(shù)動(dòng)物疫病檢測實(shí)驗(yàn)室使用的核酸樣品是由手動(dòng)核酸提取法獲得的，受成本因素影響，通過核酸提取儀進(jìn)行核酸提取的實(shí)驗(yàn)室占少數(shù)，由于核酸提取過程中不同樣品核酸含量有差異，導(dǎo)致提取到的核酸濃度也不同，要保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確，做到不漏檢，提取的樣品核酸含量必須達(dá)標(biāo)，所以提取前要對樣品的信息進(jìn)行詳細(xì)了解，可以針對不同的樣品靈活選擇不同的提取方式。無論采用核酸提取儀還是手動(dòng)核酸提取法，操作人員的因素對于檢驗(yàn)結(jié)果都有一定影響，因此平時(shí)對于實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員要加強(qiáng)理論和實(shí)際操作培訓(xùn)，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室核酸污染的認(rèn)識(shí)，嚴(yán)格規(guī)范試驗(yàn)操作，逐步提高使用的熟練程度。生產(chǎn)核酸提取儀的廠家都能生產(chǎn)與機(jī)器配套使用的試劑盒，不同品牌的試劑盒提取步驟大致相同，提取時(shí)間和提取效率相差不大。而市場上生產(chǎn)手動(dòng)核酸提取試劑盒的廠家眾多，手動(dòng)核酸提取法使用的每一種試劑盒的提取步驟和提取效率也千差萬別，所以手動(dòng)核酸提取法在提取核酸時(shí)也盡量選取操作步驟簡便、提取效率高的商品化試劑盒。綜上，全自動(dòng)核酸提取儀與手動(dòng)核酸提取法均有各自的優(yōu)劣勢，沒有一種提取方法能夠適合任何實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室更應(yīng)該本著自己的實(shí)際情況進(jìn)行綜合考慮，以最優(yōu)的核酸提取方式，獲得符合檢測要求的核酸，更好的適用于動(dòng)物疫病檢測。