陳繼楚　陳成勛　王曉梅　樊振中　劉春玲　任光岏　孫少起　王滿江

摘要：魚類疾病抵抗力與健康養(yǎng)殖及可持續(xù)發(fā)展密切相關(guān)，而免疫系統(tǒng)在魚類的疾病防御及其免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。大量研究表明，通過各類免疫因子及其相關(guān)通路來(lái)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，可以達(dá)到有效對(duì)抗各類外源性微生物的目的。本文從基因表達(dá)變化角度對(duì)草魚部分免疫相關(guān)因子及相關(guān)調(diào)控因子，對(duì)草魚免疫基因研究進(jìn)展進(jìn)行概述。

關(guān)鍵詞：草魚;免疫因子;Toll樣受體;免疫系統(tǒng);疾病病害;健康養(yǎng)殖;可持續(xù)發(fā)展

中圖分類號(hào)： S965.112;S917

文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2020）02-0046-06

收稿日期：2018-10-13

作者簡(jiǎn)介：陳繼楚（1993—），女，湖北武漢人，碩士研究生，主要從事水產(chǎn)增養(yǎng)殖研究。E-mail：865616952@qq.com。

通信作者：陳成勛，研究員，主要從事水產(chǎn)增養(yǎng)殖研究。E-mail：ccxnxy@163.com。

魚類免疫系統(tǒng)包括特異性免疫和非特異性免疫，在系統(tǒng)發(fā)育上，特異性免疫比非特異性免疫形成晚，在自身對(duì)病原微生物抵抗的過程中，非特異性免疫系統(tǒng)發(fā)揮了更大的作用[1]。非特異性免疫與生俱來(lái)，在面對(duì)入侵性外源微生物時(shí)反應(yīng)迅速，如免疫細(xì)胞保護(hù)機(jī)體的過程中，凝集素、調(diào)理素、溶菌酶和補(bǔ)體等可以輔助其進(jìn)行識(shí)別、黏附及共價(jià)結(jié)合，細(xì)胞膜上的Toll樣受體等通過識(shí)別病原微生物相應(yīng)的膜蛋白和脂多糖等，向下游的相關(guān)蛋白及蛋白激酶等傳遞信號(hào)，最終使細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子、轉(zhuǎn)生長(zhǎng)因子等非特異性免疫因子，進(jìn)行穩(wěn)定且迅速地排斥異己、清除和殺滅病原微生物[2]。在特異免疫反應(yīng)中，外源微生物入侵后，部分未被非特異性免疫系統(tǒng)處理的胞外抗原、各種抗原呈遞細(xì)胞處理后的產(chǎn)物，機(jī)體通過激活特異性免疫系統(tǒng)，由此產(chǎn)生對(duì)應(yīng)的免疫球蛋白來(lái)進(jìn)行特異性清除[3-4]。

魚類免疫系統(tǒng)的正常運(yùn)行都依賴各類免疫基因的表達(dá)、轉(zhuǎn)錄及各種相關(guān)通路的調(diào)控，通過研究不同條件下機(jī)體各組織差異基因的時(shí)序表達(dá)，可進(jìn)一步驗(yàn)證免疫基因及其表達(dá)的信號(hào)因子與各類疾病的相關(guān)性，從而為魚類疾病防治及免疫方向的研究奠定基礎(chǔ)[5-6]。

草魚（Ctenopharyngodon idellus）是我國(guó)傳統(tǒng)養(yǎng)殖的四大家魚之一，一直以來(lái)作為國(guó)內(nèi)淡水養(yǎng)殖的主要品種，具有生長(zhǎng)快、飼料成本低、蛋白利用率高等優(yōu)點(diǎn)[1]，但草魚的抗病力較差、成活率低、養(yǎng)殖過程中易患草魚出血病、爛鰓病、赤皮病和腸炎病等，疾病頻發(fā)在一定程度上不僅對(duì)生產(chǎn)養(yǎng)殖造成了較為嚴(yán)重的損失，也制約了草魚的健康養(yǎng)殖和可持續(xù)發(fā)展。在對(duì)疾病防治進(jìn)行探索的過程中，除加強(qiáng)日常管理與提高養(yǎng)殖技術(shù)外，還可通過研究魚體免疫系統(tǒng)，了解機(jī)體自身的免疫功能，增強(qiáng)抗病防御能力[2]。疾病病害已經(jīng)長(zhǎng)期制約了草魚的健康養(yǎng)殖，使得免疫防治及疾病方向的研究也逐漸受到各方學(xué)者重視，因此針對(duì)免疫相關(guān)因子的研究也具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。迄今為止，有關(guān)草魚抗病防御機(jī)制的研究已有諸多報(bào)道，部分免疫相關(guān)基因的序列被克隆，不同條件下基因表達(dá)譜及相關(guān)免疫調(diào)控產(chǎn)物等均進(jìn)行了部分研究[7-8]，本文對(duì)草魚部分免疫因子的基因表達(dá)研究進(jìn)行概述，旨在為草魚的疾病防治提供參考。

1 Toll樣受體TLRs

Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）是一類重要的參與機(jī)體非特異性免疫的相關(guān)非催化性蛋白。它可以識(shí)別來(lái)源于微生物的具有保守結(jié)構(gòu)的分子，部分未被識(shí)別的外源微生物及激活機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng);Toll樣受體也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁[9]。至今在硬骨魚類中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了17種TLR基因（T1、2、3、4、5、7、8、9、13、14、18、19、20、21、22、23、27），其中TLR（13、14、19、20、21、22、23）為魚類所特有[10-11]。哺乳類的TLR4可識(shí)別LPS，但魚類的TLR4不具有識(shí)別LPS的功能且目前僅在部分鯉科魚類中被鑒定到[10]。

目前，已研究的草魚TLR基因相關(guān)報(bào)道中，楊春榮等發(fā)現(xiàn)健康草魚的TLR9基因在血、腦、眼、鰾、脾、肌肉、皮膚、肝胰臟、頭腎、中腎、鰓、腸和心臟組織均有所表達(dá)，在鰓組織中表達(dá)量最高，血和頭腎表達(dá)量次之[12]。黃吉文應(yīng)用嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）感染草魚后，轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)20種TLR基因，即TLR（1、2、3、4.2、4.3、4.4、5a、5b、7、8a、8b、9、13、18、20.1、20.2、21、22、25、27）;脾臟轉(zhuǎn)錄組分析顯示感染后72 h內(nèi)，14個(gè)基因表達(dá)無(wú)差異，有6個(gè)TLR基因顯著上調(diào)，即TLR（5a、5b、202、21、22、27），其中TLR（5a、5b）和TLR20.2在感染48 h上調(diào)最為顯著且呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，TLR21在感染72 h上調(diào)最為顯著，TLR（22、27）在感染12 h上調(diào)最為顯著;TLR27基因?yàn)椴蒴~中首次發(fā)現(xiàn)，其目前仍未被明確按結(jié)構(gòu)域歸類確定其所屬TLR亞家族。通過體外誘導(dǎo)刺激草魚CIK細(xì)胞系，經(jīng)鼠傷寒沙門菌的鞭毛蛋白（FLA-ST，flagellin from Salmonella typhimurium）、脂多糖LPS，（lipopolysaccharide）及聚肌苷酸[Poly（I：C），polyinosine-polycytidylic acid]誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn)TLR18基因表達(dá)量均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì);經(jīng)LPS及Poly（I：C）誘導(dǎo)后TLR20.2基因表達(dá)量呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì)，經(jīng)FLA-ST誘導(dǎo)后呈現(xiàn)先降后升再恢復(fù)正常的趨勢(shì);TLR21基因表達(dá)量經(jīng)LPS及FLA-ST誘導(dǎo)后顯著先升后降趨勢(shì)[13]。草魚感染柱狀黃桿菌（Flavobacterium cloumnare）后發(fā)現(xiàn)，7 d內(nèi)TLR3、TLR7、TLR 22 3種基因的表達(dá)量均呈現(xiàn)不同程度的顯著上調(diào)變化[14]。

楊春榮等使用草魚出血病呼腸孤病毒GCRV（reovirus of grass carp）感染草魚后120 h，發(fā)現(xiàn)24 h時(shí)肝胰臟中TLR3基因表達(dá)量顯著高于正常水平，48 h時(shí)恢復(fù)至正常水平[15-16]。李青梅使用GCRV攻毒草魚后72 h，其中腎組織中TLR3基因表達(dá)量 6～72 h 內(nèi)持續(xù)顯著上調(diào);TLR7基因的表達(dá)量在 12～72 h內(nèi)持續(xù)顯著上調(diào);TLR22基因表達(dá)量在 72 h 內(nèi)持續(xù)顯著上調(diào)[17]。王文靜研究了經(jīng)GCRV誘導(dǎo)后1～7 d的草魚發(fā)現(xiàn)，其肝胰臟中TLR18基因在4 h顯著上調(diào)，脾臟中3 d內(nèi)表達(dá)水平顯著上調(diào)后7 d顯著下降，TLR20基因在肝胰臟中顯著下調(diào)，在脾臟中顯著下調(diào)4 h后上調(diào)至高表達(dá)水平，在鰓和腎臟中表達(dá)水平較高，TLR21基因在肝胰臟和脾臟中的表達(dá)量顯著下調(diào);經(jīng)嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)后1～7 d，TLR18在肝胰臟中表達(dá)水平呈現(xiàn)抑制，在脾臟中誘導(dǎo)4 h和7 d 2個(gè)時(shí)間點(diǎn)呈現(xiàn)抑制狀態(tài)，TLR20基因在肝胰臟中4 h內(nèi)迅速上升后開始下降，在脾臟中 3 d 內(nèi)逐漸上升后至7 d顯著被抑制，而在腎臟和鰓中表達(dá)水平相對(duì)較高，TLR21基因在肝胰臟和脾臟中的表達(dá)量顯著上調(diào)[18]。草魚感染GCRV后，發(fā)現(xiàn)其脾臟和頭腎組織中的TLR8基因呈現(xiàn)先抑制再上調(diào)后恢復(fù)正常水平的趨勢(shì)，陳曉慧對(duì)比斑馬魚（Barchydanio rerio var.）及虹鱒（Oncorhynchus mykiss）相關(guān)基因序列，成功檢測(cè)并克隆到草魚的TLR8序列，之后分析魚體感染嗜水氣單胞菌72 h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)TLR8基因的情況，發(fā)現(xiàn)脾臟中TLR8基因呈現(xiàn)6 h內(nèi)先下調(diào)后12～24 h上升至頂峰，72 h 恢復(fù)正常的趨勢(shì)[14]。

張小平通過在養(yǎng)殖水體中投放枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）及施氏假單胞菌（Pseudomonas）的復(fù)合菌微生態(tài)制劑，發(fā)現(xiàn)15 d后草魚肝胰臟中TLR3、TLR7基因表達(dá)量顯著提升;腸黏膜中TLR3基因表達(dá)量升高，TLR7基因表達(dá)量降低[19]。徐曉雁使用嗜水氣單胞菌感染草魚后經(jīng)發(fā)現(xiàn)0～7 d 內(nèi)，TLR4基因的表達(dá)量在脾臟中持續(xù)上升，在腎臟中表達(dá)量則無(wú)顯著性差異;TLR5基因的表達(dá)量在脾臟和腎臟中均呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)[11]。李雪吟使用不同濃度賴氨酸飼料飼喂草魚56 d后，使用LPS處理草魚腸道上皮細(xì)胞，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)TLR3、TLR4的表達(dá)水平均顯著上調(diào)[20]。2 髓樣分化因子

髓樣分化因子（myeloid differentiation factor 88，MyD88）是依賴于MyD88的TLR信號(hào)通路中的關(guān)鍵接頭分子，在傳遞上游信息中具有重要的作用[21]。魚類相關(guān)研究中，最初在斑馬魚中鑒定到MyD88并克隆，其與人、小鼠、非洲爪蟾具有較高的同源性[22]。在多種組織器官中均有表達(dá)，在腸、脾及肝胰臟中表達(dá)量為相對(duì)較高[23]。目前，已有不少學(xué)者對(duì)草魚的該基因做過相關(guān)研究，董捷發(fā)現(xiàn)，GCRV感染草魚后120 h，其肌肉、皮膚、肝胰臟、頭腎、中腎、鰓、腸、脾臟和心臟等組織中MyD88基因表達(dá)量均有不同比例上調(diào)，其中肝胰臟中MyD88基因表達(dá)量呈現(xiàn)先升，至72 h后降，120 h再升高趨勢(shì)，脾臟中表達(dá)量在24 h時(shí)升到最高值后開始下降，72 h下降至正常水平，120 h時(shí)再次上調(diào)[24]。陳曉慧使用GCRV刺激草魚后，發(fā)現(xiàn)脾組織和中腎組織中MyD88基因的表達(dá)量在24 h內(nèi)顯著上調(diào)[14]。李青梅使用GCRV攻毒草魚后72 h內(nèi)，發(fā)現(xiàn)中腎中MyD88基因表達(dá)量在0～6 h內(nèi)先降低后升高，12 h達(dá)到最大表達(dá)量后開始降低，72 h恢復(fù)正常水平無(wú)顯著差異[17]。李雪吟使用不同濃度賴氨酸飼料飼喂草魚56 d，再LPS處理草魚腸道上皮細(xì)胞后，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)MyD88表達(dá)水平顯著上調(diào)[20]。

3 腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素

Toll樣受體介導(dǎo)的信號(hào)通路下游常見免疫相關(guān)因子中，通過NF-κB經(jīng)典信號(hào)通路進(jìn)行活化后信號(hào)傳遞，所產(chǎn)生的腫瘤壞死因子及白細(xì)胞介素，是兩大類重要的促炎癥因子及免疫調(diào)節(jié)相關(guān)分子。

腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）是一種可以由多種免疫細(xì)胞產(chǎn)生的小分子蛋白質(zhì)，具有殺傷腫瘤細(xì)胞、進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)白細(xì)胞遷移、分化、增殖及凋亡等功能，主要通過其基因表達(dá)形成受體及一系列相關(guān)因子發(fā)揮功能[25]。使用LPS體外刺激處理草魚120 h內(nèi)，12 h時(shí)脾臟組織中TNF-α基因表達(dá)水平出現(xiàn)明顯的上調(diào)[26-27]。吳宗凡使用不同濃度的對(duì)羥基苯乙酰胺（4-hydroxybenzeneacetamide）和環(huán)（甘氨酸-脯氨酸）二肽刺激草魚CIK腎細(xì)胞，分析后發(fā)現(xiàn)24 h內(nèi)TNF-α基因表達(dá)量顯著上調(diào)[28]。吳春燕等在草魚的高脂飼料中添加不同濃度的景天科中草藥植物垂盆草（Sedum sarmentosum）水提取物，連續(xù)投喂飼料42 d后發(fā)現(xiàn)，1 200 mg/kg劑量組肝胰臟中TNF-α基因表達(dá)量顯著低于同期的高脂組[23]。

白細(xì)胞介素（interleukin，IL）是一類由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞產(chǎn)生的重要細(xì)胞因子，其在維持機(jī)體免疫功能和炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮極其重要的作用。系統(tǒng)發(fā)育分析已經(jīng)證明，IL-1家族的有限幾種成員和受體在硬骨魚類中存在直系同源物。IL-1是早期促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子中樞性的一個(gè)并誘導(dǎo)級(jí)聯(lián)效應(yīng)，通過上調(diào)或下調(diào)其他細(xì)胞因子來(lái)間接地介導(dǎo)，最終導(dǎo)致炎癥反應(yīng)[29]。目前，學(xué)者們已經(jīng)在13種硬骨魚類中發(fā)現(xiàn)并鑒定了IL-1β因子的基因表達(dá)，它通過刺激T細(xì)胞來(lái)調(diào)節(jié)免疫，類似于哺乳動(dòng)物中IL-1β的作用。而硬骨魚類的IL-1β又區(qū)別于蛙類、鳥類及哺乳動(dòng)物的IL-1β[30]。使用嗜水氣單胞菌感染草魚后發(fā)現(xiàn)，其腸道中的7個(gè)白細(xì)胞介素相關(guān)基因（IL-10、IL-10Rα、IL-10Rβ、IL-2RG、IL-17R、IL-22、IL-23）在致炎1 d后表達(dá)量上調(diào)至最高水平;IL-12p40、IL-12Rβ2基因在3 d上調(diào)至最高;IL-23R、IL-6基因則在致炎后3 d顯著上調(diào)，而IL-21在致炎后3 d顯著下調(diào)[31]。徐炳森研究表明，伴刀豆球蛋白（concanavalin，Con A）可誘導(dǎo)草魚的頭腎淋巴細(xì)胞白細(xì)胞介素IL-2基因的表達(dá)[32]。王尚念使用嗜水氣單胞菌攻毒草魚72 h后發(fā)現(xiàn)，IL-1β基因在腎臟、脾臟和頭腎組織中表達(dá)較高[33]。張小平通過在養(yǎng)殖水體中投放枯草芽孢桿菌及施氏假單胞菌的復(fù)合菌微生態(tài)制劑發(fā)現(xiàn)，15 d內(nèi)草魚肝胰臟中IL-8基因表達(dá)量顯著升高，IL-1β顯著降低腸黏膜中IL-8基因表達(dá)量顯著降低[19]。李雪吟使用不同濃度賴氨酸飼料飼喂草魚56 d，再使用LPS處理草魚腸道上皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，IL-1、IL-8基因表達(dá)量顯著上升[20]。

4 干擾素及其調(diào)節(jié)因子

干擾素（interferon，IFN）是一類重要的細(xì)胞功能糖蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等功能，其轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子為干擾素調(diào)節(jié)因子（interferon regulatory factors，IRF），其中常見的有IRF1、IRF3、IRF5、IRF7。干擾素及其相關(guān)調(diào)節(jié)因子是魚類抵御病毒入侵的重要組成之一[34-37]。

草魚干擾素最初是由邵健忠等開始探究[38-41]，通過GCRV病毒誘生后分離純化得到草魚血清中一種高效價(jià)的抗病毒活性物質(zhì)，鑒定為干擾素[39]，進(jìn)一步研究免疫調(diào)節(jié)功能，發(fā)現(xiàn)草魚的干擾素是由頭腎、脾、腎、外周血和胸腺組織的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，可以經(jīng)病毒體外誘導(dǎo)產(chǎn)生α/β干擾素[40-41]。Zhang等通過體外細(xì)胞培養(yǎng)草魚腎細(xì)胞系CIK，并從中鑒定出抗病毒的干擾素基因[42-43]。李青梅使用GCRV攻毒草魚后發(fā)現(xiàn)，72 h內(nèi)中腎中IFN-I的表達(dá)量在6～72 h內(nèi)呈現(xiàn)持續(xù)上調(diào)趨勢(shì)[17]。許巧情等研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)柱狀黃桿菌誘導(dǎo)后IRF-5基因表達(dá)量在受精卵中呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，推測(cè)未受精卵中存在IRF-5母源mRNA表達(dá)，隨著胚胎發(fā)育，其免疫防御機(jī)制逐漸完善[44]。仔魚出膜后，IRF-5的表達(dá)量又開始上調(diào)且維持在一定數(shù)量，推測(cè)母源性該基因在早起胚胎發(fā)育以及抵抗外源病毒和細(xì)菌的侵染方面發(fā)揮重要作用，通過母源基因的保護(hù)，草魚胚胎免疫系統(tǒng)逐漸發(fā)育至完全[45]。王偉等還曾根據(jù)前人的研究，克隆出IFN上游的一種起調(diào)節(jié)誘導(dǎo)的抗病毒基因Mx（myxovirus rsistance）并將其在草魚肝胰臟中進(jìn)行了表達(dá)[46]。

5 補(bǔ)體

補(bǔ)體（complement）主要由肝細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，常以無(wú)活性形式存在于正常血清和體液中的一組蛋白質(zhì)，共有20多種，由特定的補(bǔ)體基因編碼而成[47]。補(bǔ)體本身沒有特異性，不能和游離的抗原或抗體結(jié)合，只能與抗原抗體復(fù)合物進(jìn)行結(jié)合，主要作用是在一定條件下進(jìn)行一系列酶促級(jí)聯(lián)反應(yīng)，在機(jī)體抵抗細(xì)菌侵染的免疫應(yīng)答過程中，通過補(bǔ)體激活，活化淋巴細(xì)胞，對(duì)魚類健康生長(zhǎng)發(fā)育起重要作用[48-55]。

目前，硬骨魚類中補(bǔ)體C（1、2、3、4、5、6、7、8、9）的成分及其性質(zhì)和功能等大多都已明確，而草魚中目前主要所研究的補(bǔ)體有C2、C3、C4、C6、C7和C9[49]。補(bǔ)體C3基因在感染大中華鳋（Sinergasilus major）的病魚肝胰臟、脾臟中檢測(cè)到大量的表達(dá)，鰓組織中檢測(cè)到少量的表達(dá)[50]。經(jīng)滅活后的柱狀黃桿菌誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)，草魚C9基因在1、7 d時(shí)在肝胰臟和脾臟中呈現(xiàn)顯著上調(diào)[51-52]。通過研究不同條件下的肝臟原代細(xì)胞中草魚C2基因[53]，發(fā)現(xiàn)其過表達(dá)能引起除部分補(bǔ)體因子外的各種下游組分表達(dá)量上調(diào);而經(jīng)過刺激過表達(dá)后的肝臟細(xì)胞中，其炎癥因子等的表達(dá)量顯著提高，被敲減C2基因的細(xì)胞則與之結(jié)果相反，表明C2基因在激活補(bǔ)體下游各項(xiàng)組分中起到重要的免疫作用，在各個(gè)組織中均呈現(xiàn)時(shí)間依賴性的表達(dá)模式。使用福爾馬林滅活的嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)后，發(fā)現(xiàn)草魚補(bǔ)體基因BF/C2A、BF/C2B、C6在血、腦、肌、中腎、肝胰臟、頭腎、皮、脾、心、鰓、腸、鰭12個(gè)組織中均呈現(xiàn)表達(dá)量顯著上調(diào);C7基因僅在頭腎、中腎、皮、脾、心臟和腸中進(jìn)行了表達(dá)并顯著上調(diào);后續(xù)檢測(cè)不同發(fā)育時(shí)期的補(bǔ)體基因mRNA表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)體C6在孵化1 d開始顯著上升10 d后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，表明補(bǔ)體C6在草魚發(fā)育早期起著一定的免疫與機(jī)體保護(hù)功能[54]。盧明淼等在飼料中添加不同濃度的果寡糖，連續(xù)投喂草魚56 d后發(fā)現(xiàn)2 g/kg劑量組的魚體血清中補(bǔ)體C3和C4的活性顯著高于對(duì)照組[56]。張濤在飼料中添加不同濃度的添加劑，連續(xù)投喂49 d后發(fā)現(xiàn)022%濃度酵母多糖組的魚體血清中補(bǔ)體C3的活性與對(duì)照組相比均呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢(shì)[57]。

6 主要組織相容性復(fù)合體及其相關(guān)因子

主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex，MHC）是一組高度多態(tài)的蛋白復(fù)合體，主要功能為遞呈抗原，被T細(xì)胞所識(shí)別，從而激活機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫[58-59]。

草魚MHC和哺乳動(dòng)物MHC一樣，分為參與內(nèi)源性抗原呈遞的Ⅰ型和參與外源性抗原呈遞的Ⅱ型[60]。通常MHC-Ⅰ型類分子與CD8+細(xì)胞（cluster of differentiation 8+ cell）相互作用，只呈遞內(nèi)源蛋白;而MHC-Ⅱ類分子與CD4+細(xì)胞相互作用，只呈遞外源蛋白[61]。

徐在言通過分析草魚MHC類的多種相關(guān)多肽發(fā)現(xiàn)，其中一種不可溶性蛋白SIMP并通過研究其基因結(jié)構(gòu)，確定草魚SIMP基因不像人類SIMP基因具有組織表達(dá)的均一性，只在草魚的腦組織中高表達(dá)，在脾臟中則低豐度表達(dá)[62]。蘇建明等克隆了草魚MHCⅡα基因，并檢測(cè)到該基因主要在草魚的脾臟、頭腎、鰓、腸道等組織表達(dá)[63]。使用草魚出血病疫苗處理幼齡草魚后，在免疫后14 d內(nèi)發(fā)現(xiàn)其中腎、腸道、脾臟中的MHCⅠ相對(duì)表達(dá)量均有所提高，推測(cè)可能是MHC因子參與了下游各類相關(guān)模式識(shí)別受體并進(jìn)行了信號(hào)傳遞，引起了與對(duì)應(yīng)信號(hào)通路免疫相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄[64-66]。

7 免疫球蛋白

免疫球蛋白（immunoglobulins）是魚類主要的免疫因子之一，主要是IgM，有些魚類中也存在IgI、IgZ、IgT、IgH等其他免疫球蛋白。目前草魚中已經(jīng)克隆IgM、IgZ和IgD 3種免疫球蛋白基因，并且制備出了相對(duì)應(yīng)的抗體。邵建忠等經(jīng)研究得出草魚的體表黏液和腸道黏液中免疫球蛋白與血清中的免疫球蛋白種類相同[67]。江育林等通過研究推斷，草魚的免疫應(yīng)答中可能具有一種含有較多二硫鍵的類似于IgM某些特性的大分子蛋白質(zhì)，其在分離純化過程中能分離成分子量近似于人IgG的較小分子，但當(dāng)時(shí)沒有獲得明確的結(jié)果[68]。李亞南使用嗜水氣單胞菌感染草魚14 d后，定性分析血清中蛋白結(jié)構(gòu)并對(duì)比凝聚后的聚合體進(jìn)而推斷，草魚血液中的免疫球蛋白主要應(yīng)該是IgM[69]。肖凡書等通過克隆草魚含有IgM、IgZ和IgD重鏈ζ、δ、μ基因的基因座，發(fā)現(xiàn)了草魚IgZ、IgZ-2和IgM-IgZ 3種不同的免疫球蛋白[70]。李青梅等使用GCRV攻毒草魚后發(fā)現(xiàn)，72 h內(nèi)中腎中IgM基因表達(dá)量在48～72 h內(nèi)呈上調(diào)趨勢(shì)[17]。張鵬英等使用GCRV疫苗腹腔注射健康草魚，發(fā)現(xiàn)14 d內(nèi)頭腎、中腎、腸和脾臟中的IgM的相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組[64]。

草魚作為我國(guó)重要的四大家魚之一，從20世紀(jì)50年代起，各種細(xì)菌病、病毒病已逐漸成為草魚養(yǎng)殖業(yè)的“瓶頸”。至今為止，在病原檢測(cè)、流行情況、診斷方法及防治方法上已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但草魚免疫因子及相關(guān)免疫應(yīng)答分子機(jī)制方面的研究由于起步相對(duì)較晚，仍舊有大量的免疫相關(guān)因子未被了解，部分已經(jīng)被研究的內(nèi)容也仍舊須要進(jìn)一步加強(qiáng)探究。從而根據(jù)各項(xiàng)疾病的癥狀及病理變化，結(jié)合生理生化指標(biāo)、基因時(shí)空表達(dá)變化等試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)一步確定草魚免疫應(yīng)答的關(guān)鍵基因，從而調(diào)動(dòng)、開發(fā)草魚自身的防御潛力，是有效防止病害發(fā)生、開展健康養(yǎng)殖、實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要戰(zhàn)略之一。

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