張愛愛 韓 偉 宋建英 李飛星 王曉元 李方江

心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是目前全球死亡的主要原因[1-2]。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary atherosclerotic heart disease，CHD)，作為心血管疾病中常見的一大類疾病[3]，其發(fā)病機(jī)制涉及多種因素，其中重要的病理因素之一是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)，而炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣斑塊的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用，其參與動(dòng)脈粥樣斑塊的形成、發(fā)展甚至最終破裂[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，脂蛋白相關(guān)的(Lp-PLA2)是一種新的炎癥標(biāo)志物與冠心病相關(guān)，它可誘導(dǎo)細(xì)胞聚集和血管收縮，刺激急性炎癥反應(yīng)，可直接參與AS發(fā)生，能夠預(yù)測冠狀動(dòng)脈事件[6-7]。在未來，這種酶活性的抑制劑有望成為動(dòng)脈粥樣硬化的一種新療法[8-9]。我們的目的是通過比較冠心病患者和健康對(duì)照組Lp-PLA2的水平，討論Lp-PLA2與冠心病及其與血脂和hs-CRP的表達(dá)水平的關(guān)系。

表1 各組臨床資料比較

資料與方法

1.研究對(duì)象 選擇2016年2月至2019年1月，河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院收治360例患者接受冠狀動(dòng)脈造影(CAG)，并采集患者血液。其中包括男性179例(49.7%)，女性181例(50.3%)，年齡40～85歲，平均年齡(62.82±12.44)歲，根據(jù)冠心病診斷與治療指南將患者分組：包括穩(wěn)定型的心絞痛(SAP) 129例，不穩(wěn)定型心絞痛(UAP) 111例與AMI 120例，對(duì)照組由門診149例健康個(gè)體組成，年齡42～85歲，平均年齡為(62.87±12.39)歲，排除了以下條件：心肌病、瓣膜性心臟病、嚴(yán)重肝腎功能不全、惡性腫瘤、急性感染、長期服用降脂藥物、抽血前服用阿司匹林或他汀類藥物。參與者已經(jīng)簽署了參與研究的同意書。

2.方法 (1)樣本采集：所有受試者均于住院后禁食一晚，第二日凌晨從肘部采集靜脈血樣本，立即送檢分析。生化試驗(yàn)用血注分離凝膠管，脂質(zhì)LP-PLA2用血抽吸EDTA-Na2抗凝管。記錄一般臨床資料，如性別、年齡等。(2)檢測方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法測定(ELISA)測定脂質(zhì)LP-PLA2的含量，采用全自動(dòng)生化分析儀測定血脂等相關(guān)指標(biāo)，免疫濁度法測定hs-CRP的含量。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間的比較采用t檢驗(yàn)，三組以上比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK法。計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用Pearson線性相關(guān)；采用ROC曲線進(jìn)行特異性及敏感性的分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1. 臨床資料比較 比較冠心病各亞組在年齡、性別、糖尿病、高血壓、吸煙等方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

2. CHD各亞組中血漿Lp-PLA2水平和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的比較 CHD各亞組血漿Lp-PLA2濃度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。AMI組和UAP組Lp-PLA2濃度均高于SAP組(P<0.05); 且AMI組與UAP組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AMI組hs-CRP水平明顯高于對(duì)照組、SAP組和USP組(P<0.05)。CHD各亞組Lp(a)水平均高于對(duì)照組，其中AMI組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，SAP及UAP組與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CHD各亞組與對(duì)照組血清Tch，TG，Apo-A1，Apo-B，HDL-C，LDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05，表2)。

表2 各組生化指標(biāo)比較

3. CHD各組間血漿Lp-PLA2濃度與其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的比較 通過雙變量線性分析，可以發(fā)現(xiàn)，全部參與者血漿Lp-PLA2濃度與hs-CRP水平呈正相關(guān)(r=0.624，P<0.05)，而與Tch，TG，Apo-A1，Apo-B，HDL-C，LDL-C，LP(a)的水平無相關(guān)性。CHD組血漿Lp-PLA2濃度僅與hs-CRP呈正相關(guān)(r=0.433，P<0.05)，與Tch，TG，Apo-A1，Apo-B等其他指標(biāo)無相關(guān)性。對(duì)照組血漿Lp-PLA2濃度與TG正相關(guān)(r=0.438，P<0.05，表3)。

表3 各組間Lp-PLA2和其他指標(biāo)相關(guān)性分析

4. ACS中Lp-PLA2 and hs-CRP的敏感性及特異性的比較 Lp-PLA2、hs-CRP在ACS中ROC曲線圖，Lp-PLA2在ACS中的特異性高于hs-CRP，而hs-CRP 的敏感性高于Lp-PLA2(圖1)。

圖1 ACS中Lp-PLA2及hs-CRP的ROC曲線

討 論

在本實(shí)驗(yàn)中，研究了一種與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的新型炎癥生物標(biāo)志物L(fēng)p-PLA2和冠心病之間的關(guān)系，研究表明與對(duì)照相比，Lp-PLA2濃度在冠心病組中較高。目前大量實(shí)驗(yàn)研究表明，在目前接受冠狀動(dòng)脈造影的中國患者人群中，Lp-PLA2濃度與冠心病獨(dú)立相關(guān)，Lp-PLA2濃度與ACS的關(guān)系獨(dú)立于其他已知的預(yù)測因子和ACS的其他疾病[10-11]。

Lp-PLA2磷脂酶是炎癥相關(guān)的標(biāo)志物，與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，主要由炎癥細(xì)胞產(chǎn)生，PLA2是磷脂酶A2族的一員，被廣泛研究，它廣泛表達(dá)于肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板和血管平滑肌細(xì)胞。Lp-PLA2又稱血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-active factor acetylhydrolase, PAF-AH)，是一種能夠催化細(xì)胞膜中脂蛋白和甘油磷脂第二酰基酯鍵水解，產(chǎn)生賴氨酸磷脂酶和非酯化脂肪酸的酶。在血液循環(huán)中，Lp-PLA2主要由成熟的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和分泌，其中血小板活化因子能促進(jìn)其分泌，在血液循環(huán)中，Lp-PLA2與脂蛋白顆粒結(jié)合，其中80%與LDL-C結(jié)合，15%～20%與HDL結(jié)合，其余與極低密度脂蛋白(VLDL-C)結(jié)合[12]。PAF可促進(jìn)血小板聚集、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化、白三烯等炎癥介質(zhì)釋放、血栓形成和炎癥反應(yīng)。另一方面，Lp-PLA2也能水解血管內(nèi)膜的氧化卵磷脂，產(chǎn)生溶血磷脂酰膽堿(lyso-PC)和氧化游離脂肪酸(ox-FFA)，這兩種產(chǎn)物是促炎介質(zhì)，可刺激和產(chǎn)生粘附分子和細(xì)胞因子，進(jìn)一步促進(jìn)單核細(xì)胞從管腔向內(nèi)膜的聚集運(yùn)動(dòng)，巨噬細(xì)胞來源于內(nèi)膜內(nèi)單核細(xì)胞的聚集，通過吞噬氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，最終聚集形成斑塊，釋放細(xì)胞因子和蛋白酶，降解平滑肌細(xì)胞和纖維帽的膠原基質(zhì)，導(dǎo)致斑塊的脆性和破裂，進(jìn)一步導(dǎo)致血栓的形成和心血管事件的發(fā)生，LP-PLA2在AS過程中的作用還存在爭議，但越來越多的證據(jù)表明，LP-PLA2可以促進(jìn)AS的發(fā)生[13-15]。

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)年齡、性別調(diào)整后，CHD各亞組血漿Lp-PLA2濃度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；AMI組和UAP組Lp-PLA2濃度均高于SAP組(P<0.05); 且AMI組與UAP組間存在差異(P<0.05)；這與目前大量研究結(jié)果相一致[12-13]。通過上述比較，可以發(fā)現(xiàn)，Lp-PLA2可能在AS中發(fā)揮促進(jìn)作用，與冠心病及其臨床類型的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，對(duì)判斷冠心病的發(fā)生發(fā)展具有重要價(jià)值，AMI組血漿Lp-PLA2濃度高于UAP組，可能與AMI患者血漿Lp-PLA2濃度升高有關(guān)，由于斑塊和血栓形成導(dǎo)致血管阻塞,由炎癥反應(yīng)引起的粥樣斑塊形成AMI組強(qiáng)于UAP組。研究顯示hs-CRP的升高與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性(嚴(yán)重程度)有關(guān)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而Lp-PLA2濃度隨著動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性(嚴(yán)重程度)的增加而升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究顯示通過雙變量線性分析，可以發(fā)現(xiàn)，血漿Lp-PLA2濃度與hs-CRP水平呈正相關(guān)(r=0.624，P<0.05)，而與Tch，TG，Apo-A1，Apo-B，HDL-C，LDL-C，LP(a)的水平無相關(guān)性；CHD組血漿Lp-PLA2濃度僅與hs-CRP呈正相關(guān)(r=0.433，P<0.05)，與Tch，TG，Apo-A1，Apo-B等其他指標(biāo)無相關(guān)性；對(duì)照組血漿Lp-PLA2濃度與TG正相關(guān)(r=0.438，P<0.05)，在分析Lp-PLA2間的相關(guān)性時(shí)，其濃度與hs-CRP的水平有一定的相關(guān)性，這意味著Lp-PLA2可能與hs-CRP炎癥因子相關(guān)，協(xié)同參與AS的炎癥反應(yīng)，原因可能是Lp-PLA2在AS過程中與hs-CRP共享不同的生理病理邏輯機(jī)制；本研究發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2的特異性明顯高于hs-CRP，這可能是這兩種標(biāo)志物在AS中發(fā)揮不同作用的原因：hs-CRP可能是急性非特異性炎癥反應(yīng)的產(chǎn)物，而Lp-PLA2可能在心血管炎癥中發(fā)揮更特異的作用，此結(jié)果也許與樣本量少有關(guān)，還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究考察了冠心病患者不同組別的脂質(zhì)Lp-PLA2濃度的變化及其與hs-CRP的關(guān)系，目前還沒有公認(rèn)的關(guān)于Lp-PLA2在AS過程中所起作用的理論，脂多糖Lp-PLA2的確切影響及作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。但本研究證實(shí)了Lp-PLA2在ACS中明顯增加，血漿Lp-PLA2與hs-CRP對(duì)AS發(fā)生具有協(xié)同作用，且Lp-PLA2對(duì)ACS診斷特異性高于hs-CRP，因此，Lp-PLA2可能是冠心病診斷的潛在靶點(diǎn)，這對(duì)預(yù)防和治療AS事件具有重要的臨床意義。