李銀珍 杜日昌 丁宇 徐彤 廖羅飛

【摘要】 目的：探究COX-2及CEA在結(jié)腸癌分子病理研究中的作用。方法：以筆者所在醫(yī)院于2016年2月-2018年2月收治的60例因患結(jié)腸癌而接受手術(shù)的患者的組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，取患者的新鮮結(jié)腸癌組織，包括近、遠(yuǎn)端癌旁1、2、3 cm的腸壁組織及距腫瘤8 cm處的正常腸壁組織，使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CEA、COX-2在以上組織中的表達(dá)情況，探討COX-2及CEA在結(jié)腸癌分子病理中的作用。結(jié)果：腫瘤組織、不同距離腫瘤切緣組織CEA mRNA、COX-2 mRNA 的陽(yáng)性率隨著遠(yuǎn)離腫瘤而降低。近、遠(yuǎn)端3 cm的腸壁組織CEA mRNA、COX-2的陽(yáng)性率與正常腸壁組織差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：COX-2、CEA可能參與了結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)過(guò)程，臨床應(yīng)在術(shù)后進(jìn)行COX-2、CEA檢測(cè)，這有助于醫(yī)生通過(guò)腫瘤的生物學(xué)特征做出正確的臨床判斷。

【關(guān)鍵詞】 癌胚抗原 環(huán)氧化酶2 結(jié)腸癌 病理

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.03.029 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2020）03-00-03

[Abstract] Objective： To investigate the role of cyclooxygenase-2 （COX-2） and carcinoembryonic antigen （CEA） in the molecular pathology of colon cancer. Method： The tissue specimens of 60 patients with radical resection of colon cancer treated in our hospital from February 2016 to February 2018 were collected. Fresh colon cancer tissues， distal and proximal adjacent 1， 2 cm and 3 cm intestinal wall tissues and 8 cm normal intestinal wall tissues were collected. The expression of CEA and COX-2 in the above tissues was detected by RT-PCR， and COX-2 was discussed. The role of CEA in molecular pathology of colon cancer. Result： The positive rates of CEA and COX-2 in tumor tissues， incision margin tissues and distant intestinal wall tissues decreased with the distance from the tumor. There was no significant difference between the positive rates of CEA and COX-2 in proximal and distal intestinal wall tissues and that in normal intestinal wall tissues （P<0.05）. Conclusion： COX-2 and CEA may be involved in the occurrence， development and infiltration of colon cancer. Detection of COX-2 and CEA should be performed in clinic after operation， which is helpful for clinicians to make correct judgement on the biological characteristics of colon cancer.

[Key words] Carcinoembryonic antigen Cyclooxygenase 2 Colon cancer Pathology

First-authors address： Yuebei Peoples Hospital， Shaoguan 512025， China

近幾年，結(jié)腸癌的發(fā)病率逐年升高，已經(jīng)對(duì)人們的健康造成重大的威脅[1]。對(duì)于結(jié)腸癌，臨床的常規(guī)治療方式是手術(shù)切除，但手術(shù)切除創(chuàng)傷面較大，且術(shù)后的復(fù)發(fā)率較高，因此臨床效果并不理想。目前臨床對(duì)該疾病的病因尚未明確，有觀點(diǎn)認(rèn)為是由慢性潰瘍引起的癌變[2]。目前，臨床將組織病理學(xué)視為判斷惡性腫瘤的金標(biāo)準(zhǔn)，但存在陽(yáng)性表達(dá)率較低問(wèn)題，隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展，臨床迫切需要對(duì)腫瘤浸潤(rùn)通過(guò)分子的角度進(jìn)行分析和研究，但迄今為止，針對(duì)結(jié)腸癌分子邊緣的相關(guān)研究尚無(wú)定論[3-4]。本研究對(duì)腫瘤組織、不同距離腫瘤切緣組織環(huán)氧化酶2（COX-2）及癌胚抗原（CEA）進(jìn)行檢測(cè)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究所選取的研究對(duì)象為筆者所在醫(yī)院于2016年2月-2018年2月所收治的60例因結(jié)腸癌至筆者所在醫(yī)院治療行的根治術(shù)患者的組織標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）資料齊全者;（2）無(wú)其他臟器系統(tǒng)病變者;（3）經(jīng)病理學(xué)和手術(shù)檢查確診為結(jié)腸癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)前經(jīng)過(guò)其他輔助治療者;（2）患者轉(zhuǎn)院、退出研究、不愿參與本次研究或依從性不佳者。入選患者中男37例，女23例;年齡47～58歲，平均（52.34±5.36）歲，組織病理學(xué)：高分化22例，中分化23例，低分化15例，TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期17例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備 結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本，腸管切開，中性福爾馬林充分固定24 h，分別取腫瘤組織、近端1、2、3 cm處的組織以及遠(yuǎn)端1、2、3 cm處的組織，以及距腫瘤8 cm處的正常腸壁組織，共8處作為標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)脫水、包埋，制成石蠟組織保存。

1.2.2 組織總RNA提取 使用QIAGEM公司FFPE RNA提取試劑盒提取RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的濃度和純度。

1.2.3 cDNA逆轉(zhuǎn)錄 使用Promega公司逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄：取2 μl RNA樣品在70 ℃保溫10 min，隨后加入25 mmol/L MgCl2，4 μl;10X逆轉(zhuǎn)錄酶2 μl;10 mmol/L dNTP 2 μl，RNA酶抑制劑0.5 μl，Oligo（dT）2 μl;AMV逆轉(zhuǎn)錄酶15 U，補(bǔ)加DEPC水至總體積20 μl;42 ℃保溫15 min，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA第一鏈。反應(yīng)后，99 ℃ 5 min滅活逆轉(zhuǎn)錄酶。

1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 相對(duì)定量的內(nèi)參基因是管家基因（β-actin），各基因的引物和探針序列如下：β-actin：上游5-TGAGCGCGGCTACAGCTT-3，下游5-TCCTTAATGTCACGCACGATTT-3，探針5-ACC ACCACGGCCGAGCGG-3;CEA：上游5-GAAAGAGCAGGCAGCAGAGA-3，下游5-TAGTGAGCTTGGCAGTGGTG-3，探針5-CACAGAGAATGCATCC-3;COX-2：上游5-GTTCCACCCGCAGTACAGAA-3，下游5-AGGGCTTCAGCATAAAGCGT-3，探針5-TTCCATTGACCAGAGCA-3。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將實(shí)時(shí)熒光定量PCR所得數(shù)據(jù)用2-△△CT法處理，△△CT=試驗(yàn)組（CT目標(biāo)基因-CT內(nèi)參基因）-對(duì)照組（CT目標(biāo)基因-CT內(nèi)參基因），對(duì)照組為正常腸壁組織，目標(biāo)基因?yàn)镃EA、COX2，內(nèi)參基因?yàn)棣?actin，得出不同部位組織中CEA、COX2相對(duì)于β-actin的表達(dá)量，以1為界，大于1的為高表達(dá)，小于1的為低表達(dá)，再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

腫瘤組織、正常腸組織、不同距離腫瘤切緣組織CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達(dá)情況如表1所示。隨著離腫瘤距離的增加，CEA mRNA、COX-2 mRNA高表達(dá)的陽(yáng)性率下降，表達(dá)水平均值降低。近端切緣1、2cm、遠(yuǎn)端切緣1、2cm處CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達(dá)水平與腫瘤組織相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。近端切緣3 cm、遠(yuǎn)端切緣3 cm處CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達(dá)水平與腫瘤組織相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），近端切緣3 cm、遠(yuǎn)端3 cm的腸壁組織CEA mRNA、COX-2的陽(yáng)性率與正常腸壁組織差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05。表明近端切緣3 cm、遠(yuǎn)端切緣3 cm處的CEA mRNA、COX-2 mRNA的表達(dá)水平明顯低于腫瘤組織，與正常腸壁組織接近。

3 討論

結(jié)腸對(duì)人有重要的作用，如果罹患結(jié)腸癌，會(huì)影響患者的消化系統(tǒng)，對(duì)正常的學(xué)習(xí)和工作造成極大的影響，因此應(yīng)盡早治療。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)顯示，結(jié)腸癌是一種較為復(fù)雜、發(fā)病部位位于結(jié)腸黏膜上的消化道疾病，結(jié)腸癌會(huì)隨著病情的發(fā)展，出現(xiàn)多種的并發(fā)癥，而手術(shù)治療是目前應(yīng)用最廣泛、療效最為可靠的治療方式[5-7]。

自1999年國(guó)內(nèi)學(xué)者通過(guò)檢測(cè)食管癌手術(shù)切緣組織而提出“分子切緣”概念后，臨床長(zhǎng)期從分子水平進(jìn)行手術(shù)切緣的研究，而國(guó)內(nèi)外關(guān)于CEA和COX-2與結(jié)腸癌分子邊緣的關(guān)系的研究較少[8-10]。研究發(fā)現(xiàn)，CEA在結(jié)腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到90%以上，而COX-2在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)率也高于80%[11-12]。本研究中，CEA高表達(dá)陽(yáng)性率達(dá)95.00%，COX-2高表達(dá)陽(yáng)性率為71.67%，這與研究結(jié)果存在偏差，可能與研究例數(shù)較少有關(guān)。正常結(jié)腸組織中兩指標(biāo)的陽(yáng)性率分別為16.67%（10/60）和21.67%（13/60），本研究發(fā)現(xiàn)，距離腫瘤近、遠(yuǎn)端3 cm的腸壁組織CEA mRNA、COX-2的陽(yáng)性率與正常腸壁組織無(wú)顯著差異（P<0.05），分別為13.33%、13.33%、20.00%、23.33%，提示遠(yuǎn)、近端距腫瘤3 cm處可能為正常腸壁組織。在遠(yuǎn)、近端1、2 cm癌旁組織及結(jié)腸癌組織中的CEA mRNA和COX-2 mRNA表達(dá)顯著較高，這與在其他上皮性腫瘤中觀察到的，CEA和C0X-2表達(dá)從正常組織到癌前病變到癌呈進(jìn)行性升高相一致。而這一結(jié)果也提示，距離越近表達(dá)越接近腫瘤組織，提示CEA和COX-2可能參與了結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)過(guò)程，這與在其他上皮性腫瘤中觀察到的CEA和COX-2表達(dá)變化相一致。

綜上所述，COX-2、CEA可能參與了結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)過(guò)程，可作為結(jié)腸癌分子邊緣研究的分子標(biāo)志物。

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（收稿日期：2019-10-10） （本文編輯：張亮亮）