程 賢， 畢良武*， 曾維星， 趙振東， 陳玉湘， 張?bào)谢?/p>

(1.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所；生物質(zhì)化學(xué)利用國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室；國(guó)家林業(yè)和草原局林產(chǎn)化學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；江蘇省生物質(zhì)能源與材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；江蘇省林業(yè)資源高效加工利用協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京210042；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院；廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧530200；3.廣西庚源香料有限責(zé)任公司，廣西 東興538100)

肉桂(Cinnamomum cassiaPresl)主要分布在我國(guó)的廣西，此外，印度、老撾以及越南等地也有種植[1]。 肉桂作為一種常見(jiàn)的中藥材，其主要活性成分為肉桂油[2]。 肉桂油常用于傳統(tǒng)中藥復(fù)方，肉桂油深加工產(chǎn)品可用于食品防腐劑、香料、抑菌劑、殺蟲(chóng)劑和功能性材料等領(lǐng)域[3]。 肉桂油通常由干燥的枝、葉經(jīng)水蒸氣蒸餾所得，具有多種藥理作用。 除此以外，肉桂油提取后的剩余物中含有大量的多酚和黃酮，其中多酚類(lèi)成分包括兒茶素、原兒茶酸、羥基查爾酮和原花青素等，黃酮類(lèi)成分包括槲皮素、山柰酚和香豆素等[4-6]。 肉桂中的多酚和黃酮類(lèi)成分具有抗菌、抗氧化、抗腫瘤等生物活性，是天然抗氧化劑的重要來(lái)源，具有廣闊的應(yīng)用前景[7-9]。 Prasad 等[10]對(duì)肉桂中的總酚類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行了體內(nèi)和體外的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明:肉桂中的總酚類(lèi)物質(zhì)具有良好的抗腫瘤活性。 Li 等[11]研究表明肉桂中含有黃烷醇等活性多酚類(lèi)抗氧化物質(zhì)，具有增強(qiáng)胰島素的功能。 鐘益寧等[12]通過(guò)測(cè)定肉桂多酚對(duì)4 種菌的體外抗菌活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn):肉桂多酚具有較強(qiáng)的體外抗菌作用。 曾華君等[13]利用細(xì)胞分子生物學(xué)的手段證明肉桂黃酮成分能有效抑制6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞損傷(帕金森模型)，其作用機(jī)制在于肉桂黃酮中含有的多個(gè)酚羥基具有較高的還原性，因此能有效抑制細(xì)胞膜脂質(zhì)氧化。 林款等[14]對(duì)分離得到的肉桂黃酮進(jìn)行體外抗氧化測(cè)試，研究表明:肉桂黃酮顯示出較好的抗氧化效果，效果接近陽(yáng)性對(duì)照Vc。 由此可見(jiàn)，肉桂多酚及黃酮在治療心血管疾病、糖尿病等方面具一定的藥用價(jià)值;在開(kāi)發(fā)食品天然防腐抗菌劑及抗氧化劑等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。 然而，肉桂提取精油后的殘?jiān)](méi)有得到充分的利用，對(duì)不同部位肉桂蒸油剩余物(CR)化學(xué)成分的抗氧化活性比較研究也未見(jiàn)報(bào)道。 因此，本研究以桂皮蒸油剩余物(BR)、桂葉蒸油剩余物(LR)、桂枝蒸油剩余物(TR)為原料，經(jīng)過(guò)醇提取和大孔樹(shù)脂純化處理，測(cè)定多酚和黃酮含量，并測(cè)定其總抗氧化能力、DPPH·和·OH 的清除能力，旨在深入探索不同部位CR 的抗氧化活性，以期為肉桂資源的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 原料、試劑與儀器

干燥的肉桂葉、肉桂枝、肉桂皮，廣西庚源香料有限責(zé)任公司，粉碎后過(guò)0.25 mm 篩備用。 AB-8 大孔樹(shù)脂，購(gòu)自河北寶恩樹(shù)脂科技有限公司;蘆丁(HPLC 純度＞98%)，購(gòu)自成都德思特生物科技有限公司;沒(méi)食子酸(HPLC 純度＞98%)、福林酚試劑，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;總抗氧化能力(TAOC)測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所;無(wú)水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、碳酸鈉、抗壞血酸(Vc)、1，2-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、水楊酸鈉、硫酸亞鐵和雙氧水，均為市售分析純。

UV-1800 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，島津LC-20A 高效液相色譜儀，配有CBM-20A 系統(tǒng)控制器、LC-20AT 泵、SIL-20A 自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20A 柱溫箱、SPD-M20A UV-VIS 檢測(cè)器，日本島津公司;LD-UPW-V超純水制備儀;DZF-6020 真空干燥箱。

1.2 肉桂蒸油剩余物活性成分的制備

1.2.1提取取干燥的肉桂葉、肉桂枝和肉桂皮分別粉碎、過(guò)篩，轉(zhuǎn)移到水蒸氣蒸餾裝置中，按照料液比1 ∶50(g ∶mL)加入蒸餾水，于100 ℃恒溫水浴加熱3 h，采用抽濾方式分離。 肉桂蒸油剩余物(CR)按照料液比1∶50(g∶mL)進(jìn)行超聲波乙醇提取30 min，采用抽濾方式分離。 將2 次濾液合并后減壓濃縮至原有體積的1/50，2 ～8 ℃冷藏備用。 取2 mL 真空干燥后得到粗提物，用于含量測(cè)定。

1.2.2純化取預(yù)處理好的AB-8 大孔樹(shù)脂20 mL，裝入徑高比為1 ∶10 的玻璃層析柱中，加壓使其牢固。 將CR 提取后所得的濃縮液沿壁緩慢加入，上樣量為5 mL，吸附1 h。 以40 mL/h 的流速，用120 mL 水充分洗脫除雜。 依次使用30%、50%和80%的乙醇各120 mL 進(jìn)行洗脫，合并洗脫液(共計(jì)360 mL)，以20 mL 為單位收集，進(jìn)行黃酮和多酚含量測(cè)定以確定合適的洗脫液。 將洗脫液收集，減壓濃縮后真空干燥，得到純化樣品，干燥器內(nèi)儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 活性成分含量測(cè)定

1.3.1CR 提取物中總黃酮 按照文獻(xiàn)[15]方法，精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品5 mg，加入80%乙醇溶液，超聲波溶解，定容，制得1 g/L 的蘆丁對(duì)照品溶液。 精密稱(chēng)取5 mg 純化樣品作為供試品，加入80%乙醇溶液，超聲波溶解，定容，制得1 g/L 的供試品溶液。 精密稱(chēng)取亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉，分別加入蒸餾水溶解，定容，制得5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液和4%氫氧化鈉溶液。

分別準(zhǔn)確移取10、50、100、150、200、250 和300 μL 的蘆丁對(duì)照品溶液，以80%乙醇補(bǔ)充至0.5 mL。加5%亞硝酸鈉溶液0.15 mL，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液0.15 mL，靜置6 min，加4%氫氧化鈉溶液2 mL，加蒸餾水2.2 mL，混勻，靜置3 min。 測(cè)定508 nm 吸收波長(zhǎng)下的吸光度。 以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 準(zhǔn)確移取250 μL 供試品溶液，同上操作，每種供試品平行制備3份，進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定。 取其中一份供試品重復(fù)測(cè)量6 次考察儀器精密度，同時(shí)每隔10 min 測(cè)量一次考察樣品穩(wěn)定性。

1.3.2CR 提取物中總多酚 按照文獻(xiàn)[16]方法，精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品5 mg，加入蒸餾水，超聲波溶解，定容，制得0.112 g/L 的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液。 精密稱(chēng)取5 mg 純化樣品作為供試品，加入蒸餾水，超聲波溶解，定容，制得1 g/L 的供試品溶液。 精密稱(chēng)取碳酸鈉，加入蒸餾水溶解，定容，制得20%碳酸鈉溶液。

分別準(zhǔn)確移取50、100、150、200、250 和300 μL 的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，以蒸餾水補(bǔ)充至3 mL，加入福林酚試劑250 μL，靜置5 min，加入20% Na2CO3溶液0.75 mL，混勻，靜置30 min，測(cè)定763 nm 吸收波長(zhǎng)下的吸光度。 以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 準(zhǔn)確移取250 μL 供試品溶液，同上操作，每種供試品平行制備3 份。 精密度、穩(wěn)定性考察同1.3.1節(jié)操作。

1.3.3HPLC 法同時(shí)測(cè)定CR 提取物的主要化學(xué)成分 分別精密稱(chēng)取兒茶素、原兒茶酸、香豆素、肉桂酸、肉桂醛和o-甲氧基肉桂醛6 種對(duì)照品，用50%甲醇配制成1 g/L 的對(duì)照品母液。 6 種對(duì)照品各取20 μL，混合均勻，補(bǔ)充280 μL 50%甲醇得到各對(duì)照品質(zhì)量濃度為50 mg/L 的混合對(duì)照品母液，梯度稀釋至20、10、4、2、1、0.4 和0.2 mg/L，過(guò)濾膜以供HPLC 測(cè)量分析，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 精密稱(chēng)取純化樣品作為供試品，加入50%甲醇，制得1 g/L 的供試品溶液，過(guò)濾膜以供HPLC測(cè)量分析。 取其中一份供試品重復(fù)測(cè)量6 次考察儀器精密度，同時(shí)每隔8 h 測(cè)量一次考察樣品48 h 內(nèi)穩(wěn)定性。

HPLC 條件:Inertsustain C18柱(4.6 mm ×150 mm，5μm);流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液(A)和乙腈(B)。 洗脫梯度:0 ～2 min 10% B;2 ～10 min 10% ～20% B; 10 ～30 min 20% ～60% B; 30 ～32 min 60% ～10% B;32 ～37 min 10% B。

1.4 抗氧化能力測(cè)定

1.4.1總抗氧化能力按照文獻(xiàn)[17]方法，采用總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)定試劑盒測(cè)定供試品和對(duì)照品總抗氧化能力，使用蒸餾水分別配制不同質(zhì)量濃度的純化樣品和抗壞血酸(Vc)溶液，質(zhì)量濃度為10 ～2 000 mg/L，按照T-AOC 測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。 在520 nm 測(cè)定樣品吸光度(A1)和空白對(duì)照品吸光度(A2)，根據(jù)式(1)計(jì)算總抗氧化能力(η總)。

(1)

式中:N—反應(yīng)體系稀釋倍數(shù)(反應(yīng)液總量/取樣量);n—樣品測(cè)試前稀釋倍數(shù)。

在37 ℃時(shí)，每分鐘每毫升樣品使反應(yīng)體系的吸光度值每增加0.01 時(shí)，為一個(gè)總抗氧化能力單位。

1.4.2DPPH·清除能力按照文獻(xiàn)[18]方法，取不同質(zhì)量濃度的供試品和對(duì)照品溶液(或蒸餾水)0.5 mL，質(zhì)量濃度10 ～2 000 mg/L，加入0.5 mL DPPH 乙醇(或乙醇)溶液，混勻，室溫放置30 min，以Vc 溶液作為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定517 nm 處的吸光度。 根據(jù)式(2)計(jì)算DPPH·清除率。

(2)

式中:η—自由基清除率，%;A′1—樣品吸光度;A′2—樣品本底吸光度;A′3—空白吸光度。

1.4.3·OH 清除能力 按照文獻(xiàn)[19]方法，取2 mmol/L 水楊酸鈉/乙醇溶液0.2 mL，加入9 mmol/L硫酸亞鐵溶液(或蒸餾水)0.2 mL，分別加入0.6 mL 不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品和供試品(或蒸餾水)0.6 mL，最后加入6 mmol/L 雙氧水0.2 mL，37 ℃反應(yīng)1 h，以Vc 溶液作為陽(yáng)性對(duì)照，在510 nm 下測(cè)定吸光度。 根據(jù)式(2)計(jì)算·OH 清除率。

1.5 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean±SD 表示，平行實(shí)驗(yàn)≥3 次，并使用SPSS19.0 軟件進(jìn)行方差分析和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 黃酮與多酚含量測(cè)定的方法學(xué)考察

2.1.1黃酮含量測(cè)定以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 為顯色劑，采用UV 分光光度計(jì)測(cè)定樣品中總黃酮的含量。 方法學(xué)考察包括線性、精密度和穩(wěn)定性。 以蘆丁為對(duì)照品繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明:在質(zhì)量濃度1.28 ～38.34 mg/L 范圍內(nèi)，溶液質(zhì)量濃度與508 nm 處的吸光度的線性關(guān)系良好，回歸方程為y=9.941 7x-0.007 5，R2=0.991 3。 使用任意一份樣品重復(fù)測(cè)量6 次，吸光度在0.218 69 ～0.218 96 之間，相對(duì)平均偏差(RSD)為0.05%，表明儀器精密度良好。 將同一份樣品每隔10 min 測(cè)量一次，考察了樣品50 min 以內(nèi)的穩(wěn)定性，6 次測(cè)定的吸光度在0.208 16 ～0.218 72 之間，RSD 值為1.73%，表明顯色反應(yīng)后溶液能在50 min 內(nèi)保持穩(wěn)定。 由此可知，總黃酮含量測(cè)定方法的線性、精密度和穩(wěn)定性良好。

2.1.2多酚含量測(cè)定以福林酚比色法測(cè)定樣品中總多酚的含量，并對(duì)多酚含量的測(cè)定進(jìn)行方法學(xué)考察。 以沒(méi)食子酸為對(duì)照品繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明:在質(zhì)量濃度1.40 ～8.40 mg/L 范圍內(nèi)，溶液質(zhì)量濃度與763 nm 處的吸光度線性關(guān)系良好，回歸方程為y=86.822x+0.012 8，R2=0.999 9。 6 次重復(fù)測(cè)量的吸光度在0.510 14 ～0.510 61 之間，RSD 值為0.04%。 50 min 溶液穩(wěn)定性測(cè)定的吸光度在0.509 84 ～0.515 58 之間，RSD 值為0.44%，表明顯色反應(yīng)后溶液能在50 min 內(nèi)保持穩(wěn)定。 由此可見(jiàn)，總多酚含量測(cè)定方法的線性、精密度和穩(wěn)定性良好。

2.2 CR 提取物活性成分的提取、純化及含量測(cè)定

2.2.1活性成分的提取與純化肉桂在水蒸氣蒸餾法提取過(guò)程中許多非揮發(fā)性的成分會(huì)溶解到水中，因此保留了水蒸氣蒸餾提取過(guò)程的水提液。 雖然多酚類(lèi)和黃酮類(lèi)成分中的黃酮苷極性較大，易溶于水，但是槲皮素、山奈酚等黃酮類(lèi)以及部分多酚類(lèi)成分在有機(jī)溶劑中的溶解度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)水溶液。 為了對(duì)CR的化學(xué)成分提取更加全面，本研究將CR 與水提液分離之后，以乙醇為提取溶劑，采用超聲波輔助提取法對(duì)CR 進(jìn)行二次提取。

將提取液合并、濃縮、真空干燥之后所得樣品中多酚和黃酮含量普遍偏低，兩次提取之后，LR、TR 和BR 粗提物中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4.31%、15.05%和8.53%;LR 粗提物中多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于定量限，在TR 和BR 粗提取物中多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為8.24%和7.16%。 由此可見(jiàn)，CR 的不同部位經(jīng)水提和醇提之后，提取物中存在黃酮和多酚類(lèi)成分，但是含量較低。 已有文獻(xiàn)報(bào)道肉桂的主要活性成分為黃酮和多酚，為了提高粗提物中活性成分的含量，選擇AB-8 大孔樹(shù)脂對(duì)粗提物中的黃酮和多酚進(jìn)行純化。 為了對(duì)活性成分進(jìn)行特異性洗脫，依次用30%、 50%和80%的乙醇溶液各120 mL 進(jìn)行洗脫，將不同階段收集到的洗脫液真空干燥之后分別測(cè)定多酚和黃酮含量，繪制洗脫曲線，結(jié)果見(jiàn)圖1。 由圖1 可知，30%乙醇溶液對(duì)黃酮和多酚類(lèi)成分幾乎沒(méi)有洗脫能力，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)提高到80%時(shí)，對(duì)黃酮和多酚的洗脫能力最強(qiáng)，之后的洗脫液中幾乎沒(méi)有黃酮和多酚類(lèi)成分，因此選用80%的乙醇作為洗脫溶劑。

2.2.2純化前后黃酮和多酚含量變化采用大孔樹(shù)脂對(duì)提取液充分吸附之后，使用80%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫液真空濃縮干燥得到的樣品中黃酮和多酚的含量顯著提高(見(jiàn)表1)。 以LR 為原料，純化之后提取物中黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)從4.31%提高到18.50%，多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)從低于定量限提高到2.60%。 以TR 為原料，黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)從15.05%提高到53.94%，多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)從8.24%提高到37.56%。 以BR 為原料，黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)從8.53%提高到44.48%，多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)從7.16%提高到28.16%。 3 種原料的提取物中黃酮均高于多酚;兩者總含量在3 種原料的提取物差異較大，在TR 和BR 提取物中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過(guò)50%，分別為91.49%、72.64%，在LR 提取物中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21.10%。

圖1 AB-8 樹(shù)脂對(duì)黃酮和多酚的洗脫曲線Fig. 1 The elution curves of flavonoid and polyphenol by AB-8 resin

表1 肉桂蒸油剩余物的提取物中黃酮和多酚的含量Table 1 The contents of flavonoid and polyphenol extracted from cinnamon distillation residue

2.3 HPLC 測(cè)定主要成分

借助HPLC 對(duì)CR 提取物的多酚、黃酮和其他主要成分進(jìn)行了精確的定量分析。 研究對(duì)象包括原兒茶酸、兒茶素、香豆素、肉桂酸、肉桂醛和o-甲氧基肉桂醛，這些化合物結(jié)構(gòu)中均含有多個(gè)B 環(huán)取代羥基，因此具有一定的還原性[3]。 首先比較了6 種對(duì)照品在220 ～380 nm 波長(zhǎng)下的色譜圖，為了能夠?qū)χ饕煞衷谕徊ㄩL(zhǎng)下檢測(cè)，最終選擇在270 nm 波長(zhǎng)處進(jìn)行紫外檢測(cè)，HPLC 色譜圖見(jiàn)圖2。 通過(guò)比較6 種對(duì)照品的出峰時(shí)間和提取物中主要色譜峰的出峰時(shí)間，確定了CR 提取物中多酚類(lèi)成分有原兒茶酸和兒茶素，對(duì)應(yīng)的出峰時(shí)間分別為7.07 和10.23 min，黃酮和其他成分有香豆素、肉桂酸、肉桂醛和o-甲氧基肉桂醛，出峰時(shí)間分別為21.03、23.41、25.71 和27.85 min。 這6 種成分為CR 提取物中含量較高的成分，可能是蒸油不充分所致，因此在色譜圖中出現(xiàn)了較強(qiáng)的色譜峰，其他多酚和黃酮類(lèi)成分如沒(méi)食子酸、蘆丁等可能由于含量較低，沒(méi)有在色譜圖中明顯出峰。

樣品的HPLC 色譜圖中6 種成分的分離度＞2.0，因此可以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量。 以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制出6 種對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表2。

6 條校正曲線的R2均＞0.999，在相應(yīng)的定量范圍內(nèi)可用于樣品中主要成分的含量計(jì)算。 6 種成分重復(fù)測(cè)量結(jié)果的RSD 值在0.43% ～14.07%之間，均＜15%，表明儀器精密度良好;48 h 內(nèi)6 種成分穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果的RSD 值在0.19% ～13.90%之間，均＜15%，表明待測(cè)溶液能在48 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。 因此，HPLC 測(cè)定方法的線性、精密度和穩(wěn)定性良好，適用于6 種成分的含量測(cè)定。

6 個(gè)主成分的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。 由表2 可以看出:3 種原料對(duì)應(yīng)的提取物中含量最高的成分為香豆素或肉桂酸，屬于黃酮類(lèi)成分。 6 個(gè)主成分在TR、LR 和BR 的提取物中含量差異較大，含量由高到低的順序?yàn)門(mén)R ＞BR ＞LR，這與顯色法測(cè)定提取物中總黃酮和總多酚的結(jié)果一致。

1.原兒茶酸protocatechuic acid;2.兒茶素catechin;3.香豆素coumarin;4.肉桂酸cinnamic acid;5.肉桂醛cinnamic aldehyde;6.o-甲氧基肉桂醛methoxycinnamaldehydea.對(duì)照品contral; b.LR; c.TR; d.BR

表2 HPLC 測(cè)定主成分含量結(jié)果Table 2 The contents of main compounds measured by HPLC

2.4 抗氧化活性

2.4.1總抗氧化能力3 種原料的提取物及Vc 在不同質(zhì)量濃度時(shí)的總抗氧化能力見(jiàn)圖3(a)。 由圖3(a)可見(jiàn)，所有提取物的總抗氧化能力都隨著溶液質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)，與Vc 趨勢(shì)相同。 TR 和BR提取物的總抗氧化能力在質(zhì)量濃度為0.2 g/L 時(shí)達(dá)到最大，分別為8.2 和8.0 U/mL。 TR 和BR 提取物的總抗氧化能力達(dá)到了Vc 的60%以上;LR 的總抗氧化能力相對(duì)較差，約為Vc 總抗氧化能力的40%。

2.4.2DPPH·清除能力如圖3(b)所示，隨著提取物和Vc 質(zhì)量濃度的增加，各種物質(zhì)對(duì)DPPH·的清除率均表現(xiàn)為先增加后趨于穩(wěn)定。 質(zhì)量濃度低于0.1 g/L 時(shí)，Vc、TR 和BR 提取物的DPPH·清除能力隨質(zhì)量濃度的增加而逐漸增加;而LR 提取物的DPPH·清除能力在質(zhì)量濃度低于0.2 g/L 的范圍內(nèi)隨質(zhì)量濃度的增加而逐漸增加。 計(jì)算各物質(zhì)的半數(shù)抑制濃度(IC50)值，結(jié)果表明:Vc、TR、BR 和LR 提取物的IC50值分別為0.012、0.017、0.021 和0.150 g/L。 由此可知，TR 和BR 提取物對(duì)DPPH·的清除效果較好，清除率略低于Vc，與總抗氧化能力的結(jié)果一致。

2.4.3·OH 清除能力 如圖3(c)所示，當(dāng)質(zhì)量濃度低于0.05 g/L 時(shí)，Vc 的·OH 清除率隨質(zhì)量濃度的增加而逐漸增加;當(dāng)質(zhì)量濃度低于0.2 g/L 時(shí)，TR 提取物的·OH 清除率隨質(zhì)量濃度的增加而逐漸增加，其IC50值為0.12 g/L。 當(dāng)·OH 清除率趨于穩(wěn)定時(shí)，TR 提取物對(duì)·OH 的清除率達(dá)到Vc 的80%左右，BR和LR 提取物對(duì)·OH 的清除能力相對(duì)較差，對(duì)·OH 的清除率約為Vc 的40% ～50%。

a.總抗氧化能力total antioxidant capability; b.DPPH·; c.·OH圖3 肉桂蒸油剩余物提取物的體外抗氧化性能Fig. 3 Thein vitroantioxidant properties of extracts from cinnamon distillation residue

3 結(jié) 論

3.1利用顯色反應(yīng)分別建立了肉桂蒸油剩余物(CR)提取物中總黃酮和總多酚的含量測(cè)定方法，不僅操作簡(jiǎn)便快速，而且相對(duì)于鹽酸鎂粉法更加安全可靠。 系統(tǒng)的方法學(xué)考察結(jié)果表明:線性相關(guān)系數(shù)R2均＞0.99，精密度RSD ＜0.05%，穩(wěn)定性RSD ＜2.00%，適用于總黃酮和總多酚的含量測(cè)定。 6 種主成分的HPLC 分析方法線性相關(guān)系數(shù)R2均＞0.999，精密度和穩(wěn)定性RSD ＜15.00%，適用于樣品含量測(cè)定。

3.2利用超聲波輔助乙醇提取法對(duì)CR 進(jìn)行二次提取，并與蒸汽蒸餾提取后的水溶液合并，使用AB-8大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，使樣品中黃酮和多酚的含量提高了2.6 ～4.2 倍。 LR、TR、BR 提取物中總黃酮含量均大于總多酚;黃酮和多酚在TR 和BR 提取物中的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為91.49%、72.64%，在LR 提取物中的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21.10%;3 種原料對(duì)應(yīng)的提取物中含量最高的成分為香豆素或肉桂酸; 6 個(gè)主成分在TR、LR 和BR 提取物中含量差異較大，含量由高到低的順序?yàn)門(mén)R ＞BR ＞LR。

3.33 種原料對(duì)應(yīng)提取物的抗氧化能力與樣品質(zhì)量濃度有較強(qiáng)的相關(guān)性。 TR 和BR 提取物的總抗氧化能力在質(zhì)量濃度為0.2 g/L 時(shí)達(dá)到最大，分別為8.2 和8.0 U/mL;TR、BR 和LR 提取物清除DPPH·的IC50值分別為0.017、0.021 和0.150 g/L，略高于Vc 的0.012 g/L;TR 提取物對(duì)·OH 的清除率達(dá)到Vc 的80%，而B(niǎo)R 和LR 提取物對(duì)·OH 的清除率相對(duì)較差，約為Vc 的40% ～50%。