曹付龍

（山東省東營市利津縣疾病預(yù)防控制中心 山東東營 257400）

1 前言

布魯氏桿菌病多由細菌侵入引起，在人類、動物群體中廣泛存在[1]?；疾r，會出現(xiàn)長期發(fā)熱、多汗的癥狀，同時，部分患者還有關(guān)節(jié)疼痛、肝脾腫大等問題，嚴(yán)重威脅著人們的身體健康和生命安全[2]。臨床中，開展人間布魯氏菌檢測對于傳染病預(yù)防和治療極為關(guān)鍵。本文從利津縣2006 年1 月—2020 年1月虎紅平板凝集試驗陽性血清中選取1 500 份，對比虎紅平板凝集試驗（RBPT）法與布病試管凝集試驗（SAT）法在該疾病中檢測中的差異性。

2 材料和方法

2.1 材料

試驗樣本血清由利津縣疾病預(yù)防控制中心提供。從利津縣2006 年1 月—2020 年1 月虎紅平板凝集試驗陽性血清中選取1 500 份，患者男女比例1.87∶1，年齡分布以40～64 歲年齡組的青壯年為主，占比82.3%。

2.2 方法

采用RBPT 法及SAT 法2 種檢測方式。

2.2.1 RBPT 法檢測

（1）準(zhǔn)備實驗器材及試劑：清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片；微量加樣器或0.1 mL 吸管；牙簽或細鐵絲；虎紅平板凝集抗原；被檢血清等材料。

（2）具體操作步驟：在玻片中加入0.03 mL 被檢血清，隨后混入0.03 mL 虎紅平板凝集抗原，通過牙簽混合均勻后，設(shè)置陰陽對照組，并于5 min 內(nèi)完成試驗結(jié)果判定。

（3）結(jié)果判定：判定被檢血清的凝聚程度。

2.2.2 SAT 檢測

（1）實驗材料：被檢血清、試管凝集抗原；0.5%的石碳酸生理鹽水；吸管、凝集試管、溫箱和試管架等材料設(shè)備。

（2）操作步驟：第一步，進行被檢血清的稀釋處理，采用8～10 mm 口徑的試管盛裝血清，每份血清分5 支試管。各試管稀釋方法為：第一管加2.3 mL石碳酸生理鹽水；第二管不加任何試劑；第三、第四、第五管各加0.5 mL。隨后，選擇1 mL 吸管，吸取被檢血清0.2 mL 置入第一管，待充分混勻后，采用同一吸管，吸取第一管血清樣本滴入第二、三管中，要求滴入規(guī)格均保持在0.5 mL。待第三管混勻后，吸取0.5mL 滴入第四管，將第四管吸出的0.5 mL 混合液丟棄。最終確保從第2～5 管各試管血清稀釋程度分別為 1∶12.5，1∶25，1∶50 和 1∶100。第二步，完成血清稀釋后，開始在各試管中加入抗原，抗原原液稀釋前，以0.5%石碳酸生理鹽水進行稀釋處理，隨后在第2～5管中加入稀釋后抗原，每管加0.5 mL，此時2～5 管中各管血清及抗原混合液總量1 mL，各管血清稀釋度變?yōu)?1∶25，1∶50，1∶100 和 1∶200。需注意的是，第一管不加任何抗原，做血清對照液，在對照劑量控制中，吸出0.5 mL，確保第一管剩余血清1 mL。第三步，設(shè)置血清對照組，要求設(shè)置陰性、陽性2 組對照組，其中陰性對照組加入抗原與被檢血清對照相似；陽性血清釋到原有滴度，再加抗原；抗原對照，適當(dāng)稀釋的抗原加石碳酸鹽水。第四步，進行檢測結(jié)果的具體判定，先制備比濁管，比濁管配置方法為：取本次試驗用的抗原稀釋液5～10 mL，加入等量的0.5%碳酸鹽水作倍比稀釋，隨后按實際需要進行調(diào)整。然后將對照管與比濁管充分振蕩后置37℃溫箱中20～22 h，取出后室溫靜置2 h 開始進行對比。

（3）結(jié)果判定：根據(jù)各管中上層液體的清亮度判定結(jié)果[3]。

2.3 觀察指標(biāo)

對比觀察2 組檢測方式下血清檢測結(jié)果的符合率。

2.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS21.0 對本次研究數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以表示，以t 檢驗，計數(shù)資料以%表示，以χ2檢驗；P＜0.05 表示數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

2 種檢測方式檢查結(jié)果對比詳見表1。由表1 可知，采用RBPT 檢測1 500 份布魯氏菌病血清樣本，“+”350 例；“++”600 例；“+++至++++”550 例，采用SAT 檢測法，918 份陽性。2 種檢測方法“+”陽性檢測符合率為9.7%;“++”陽性檢測符合率58.3%；“+++至++++”陽性檢測符合率97.1%，總陽性符合率為61.2%。從檢測過程來看，RBPT 檢測法檢測效率較高，SAT 檢測精度更加準(zhǔn)確，因此，RBPT 法可作為實驗室檢查初篩實驗。

表1 282 份布魯氏菌病血清樣本RBPT 法、SAT 法檢測結(jié)果

4 討論

布魯氏菌病是一種自然疫源性傳染病，該疾病的發(fā)病率及復(fù)發(fā)率極高，并且容易轉(zhuǎn)為慢性疾病，對人畜的危害極大[4]。有研究表明，該疾病在全球范圍內(nèi)均有較廣的發(fā)病率，其中歐洲的疫情較為嚴(yán)重，我國內(nèi)蒙古、甘肅、陜西等西北地區(qū)發(fā)病明顯[5]。布魯氏菌病可由牛、羊、豬感染人所導(dǎo)致，通常情況下，因羊患病而感染的人群較多，尤其是在羊分娩過程中，其會隨分娩體液流出，進而感染人群。從發(fā)病表現(xiàn)來看，布魯氏菌感染人之后，不僅會造成亞臨床的感染，還會帶來較為嚴(yán)重急性或者亞急性感染。當(dāng)發(fā)生感染時，患者多有發(fā)熱表現(xiàn)，且發(fā)熱時間較長，多數(shù)患者發(fā)熱時間維持在2~3 周，隨后體溫恢復(fù)正常。需注意的是，患者體溫變化會呈現(xiàn)波浪形，即體溫恢復(fù)正常后會再次發(fā)熱。伴隨著發(fā)熱表現(xiàn)，部分患者還有明顯的出汗、游走性大關(guān)節(jié)劇烈疼痛、脾腫大以及淋巴結(jié)腫大的表現(xiàn)，給患者帶來較大痛苦。當(dāng)有人患有該疾病時，就容易引發(fā)較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。當(dāng)前環(huán)境下，人們對于畜產(chǎn)品的需求量持續(xù)增加，而在畜產(chǎn)品交易中，活畜交易極為頻繁，部分活畜本身帶有布魯氏菌病，增加了布魯氏菌病感染的概率。相對而言，養(yǎng)殖業(yè)、屠宰業(yè)、畜牧業(yè)、皮毛加工、獸醫(yī)等行業(yè)的人群是布魯氏菌病的易感人群。在發(fā)生感染時，其會通過直接接觸、消化道、呼吸道等途徑進行傳播。在臨床中，正確地預(yù)防和治療布魯氏菌病，可實現(xiàn)疾病的完全控制。從生物學(xué)特點來看，布魯氏菌病對于紫外線、熱、常用化學(xué)消毒劑具有極為敏感的表現(xiàn)。采用陽光直射1～4 h 即可殺死布魯氏菌病病毒，此外，濕熱 100℃ 1～4 min、80℃ 7～19 min、3%的漂白粉澄清液2 min 等手段都能起到殺死布魯氏菌病的作用。要實現(xiàn)布魯氏菌病的有效防治，做好前期檢疫極為關(guān)鍵。然而，在當(dāng)前環(huán)境下，我國畜牧業(yè)養(yǎng)殖多為農(nóng)作物種植者散養(yǎng)，分布范圍廣、規(guī)模小、蓄養(yǎng)種類繁雜，這給整體檢疫工作帶來了較大難度，在檢測過程中，樣本獲取難度大，費時費力[6，7]?；诖耍柽M行檢測方式的不斷優(yōu)化。具體而言，消除布魯氏菌病傳播的根本措施是撲殺患病動物，消滅傳染源。因此，快速檢出陽性患畜并將其撲殺是一種有力措施。

臨床實踐中，針對此類疾病的診斷主要采用血清學(xué)檢驗法，具體而言，平板凝集試驗、虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗等都是較為常見的實驗室檢測方式，此外，采用抗球蛋白試驗、補體結(jié)合試驗等均能有效地檢測出布魯氏菌病。相對而言，RBPT 及SAT 在人間布魯氏菌病檢疫中的應(yīng)用較為常見。RBPT檢測方式的可操作性更強，同時操作過程極為簡單，檢疫人員在較短的時間內(nèi)，即可實現(xiàn)布魯氏菌病的有效檢查?；诖?，其在布魯氏菌病大范圍檢測中應(yīng)用較廣，有效地滿足了布魯氏菌病初步檢疫需要。不可否認的是，該檢測方式在使用中仍存在一定缺陷，如較為常見的特異凝集現(xiàn)象，該現(xiàn)象會使檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性問題，因此，尚需對檢疫方式進行有效優(yōu)化。SAT 是一種高精度的布魯氏菌病檢測方式，其雖然具有較為煩瑣的操作步驟且耗時較長，但仍能確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性[8]?；谶@一優(yōu)勢，SAT 在布魯氏菌病檢疫中的應(yīng)用十分廣泛，并且在實踐中，人們對其方法進行了持續(xù)更新和優(yōu)化。就SAT 檢疫方法本身而言，其包含了傳統(tǒng)試管凝集試驗、改良試管凝集試驗、水浴法試管凝集試驗、微量法凝集試驗等諸多類型。每種方法均有不同側(cè)重點，且檢疫結(jié)果也存在一定差異。相對而言，改良SAT 法的檢出率較高。這是因為在檢疫過程過程中，其通過微量移液器代替習(xí)慣，并進行加樣方式改良，使加液、加樣的精度更高，同時也避免了因血清量較少而無法實驗的問題；此外，移液器可以隨時更換吸頭，減少了洗滌、消毒、干燥等環(huán)節(jié)，既保證了檢疫工作的銜接性，又減少了工作強度，保證了工作效率，有效地減少了SAT 的檢疫誤差。從本文檢測過程來看，RBPT 檢測法檢測效率較高，SAT 檢測精度更加準(zhǔn)確，故而RBPT 法可作為實驗室檢查初篩試驗。

5 結(jié)語

綜上所述，在布魯氏菌病實驗室檢測中，RBPT法具有檢測成本低、操作簡單的特點，同時其反應(yīng)時間較短，4 min 內(nèi)即可對檢測結(jié)果做出迅速判斷，但其檢測精度尚有待提升，故可作為實驗室檢查初篩試驗，不能作為確證試驗。SAT 法檢測過程及耗時較長，但準(zhǔn)確效率高，可作為確證試驗，用于布魯氏菌病的深入分析。臨床中需結(jié)合布病發(fā)病規(guī)模及緩急程度選擇合適的檢測方法。