劉莉麗

一、材料與方法

1.儀器與試劑。Agilent 1290高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司），Agilent G6460三重串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）。黃芪甲苷對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110781-200613；市售百消丹美齡丸（鄭州百消丹藥業(yè)有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，超純水。

2.色譜及質(zhì)譜條件。①色譜條件：Agilent SB-C18色譜柱（2.1×50mm，1.8μm）；乙腈-水（35∶65）為流動(dòng)相，流速為0.2mL/min；柱溫為室溫；進(jìn)樣量5μL。②質(zhì)譜條件：采用電噴霧正電離源模式（ESI+），掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；霧化氣壓力35psi；干燥氣流速9L/min，干燥氣溫度350℃；毛細(xì)管電壓4000V；黃芪甲苷定量離子質(zhì)荷比（m/z）807.3/202.9，定性離子質(zhì)荷比（m/z）807.3/627.1；定性離子和定量離子對(duì)應(yīng)的碰撞能量壓分別為65V、60V，碎裂電壓均為115V。

3.對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備。精密稱取10mg對(duì)照品置于100mL容量瓶中，使用甲醇作為溶劑，溶解樣品并稀釋至刻度（濃度為100μg/mL），搖勻備用。

4.供試品溶液的制備。稱取0.5g樣品于20mL容量瓶中，用甲醇作為溶劑，溶解樣品并稀釋至刻度，搖勻后超聲處理30min，放冷至室溫；用中性三氧化二鋁柱（AgelaCleanert Alumina-N-SPE∶1000mg/3mL）除去雜質(zhì)，精密吸取10mL濾液，置于平行蒸發(fā)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?mL，經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過濾備用。

二、實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

1.線性關(guān)系考察試驗(yàn)。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、1.00mL、10mL，分別置于10mL容量瓶中，甲醇作溶劑，稀釋至刻度后搖勻，超聲處理30min，放冷至室溫，得到對(duì)照品待測(cè)液。精密吸取對(duì)照品待測(cè)液，上機(jī)進(jìn)樣測(cè)定，記錄測(cè)得峰面積。橫坐標(biāo)為濃度（X），縱坐標(biāo)為峰面積值（Y），得到線性回歸方程y=527.05x-25.44（r=0.9991），表明黃芪甲苷在1μg/mL-100μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.方法學(xué)考察。①精密度試驗(yàn)：精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)備液，上機(jī)測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)其峰面積，RSD=1.40%，表明精密度較好。②穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批樣品適量，按供試品溶液的制備方法制成樣品溶液，分別在樣品溶液制備后的0h、2h、4h、8h、12h進(jìn)樣測(cè)定其峰面積，RSD=1.51%，表明使用該方法樣品在12h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。③重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，按供試品溶液的制備方法制成6份樣品溶液，上機(jī)測(cè)定，記錄黃芪甲苷的峰面積，RSD=1.65%，表明該方法重現(xiàn)性良好。④加樣回收率試驗(yàn)：稱取0.5g樣品9份，每3份分別精密加入黃芪甲苷對(duì)照品儲(chǔ)備液20μL、40μL、60μL制成三個(gè)濃度梯度試樣，按供試品溶液的制備方法制備溶液，上機(jī)測(cè)定，記錄測(cè)定峰面積，結(jié)果回收率的平均值為93.00%、RSD值為1.62%，表明樣品加樣回收率良好。⑤樣品測(cè)定：取樣品3份，按供試品溶液的制備方法和配置樣品溶液的方法制備實(shí)驗(yàn)用供試品溶液，上機(jī)測(cè)定，計(jì)算黃芪甲苷的含量，結(jié)果平均含量為8.559μg/g，RSD為1.52%。

本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)百消丹美齡丸中的黃芪甲苷進(jìn)行了測(cè)定，該方法具有提取效率高、前處理快速、靈敏度高、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可以很好地應(yīng)用于百消丹美齡丸中黃芪甲苷含量的分析檢測(cè)。