徐娜 欒竹青 劉志敏

摘 要：實(shí)驗(yàn)利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的檢測方法（LV-MS）進(jìn)行檢測，樣品經(jīng)水超聲提取，亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液去除蛋白等雜質(zhì)后，用甲醇和水作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，資生堂MGⅡC18色譜柱（5 μm，100 mm×2.1 mm）分離，電噴霧負(fù)離子模式電離，以395/359為定量離子，395/36為定性離子，進(jìn)行定性定量分析，方法定量限為0.5mg/kg。

關(guān)鍵詞：醬腌菜；三氯蔗糖；液相色譜質(zhì)譜；聯(lián)用法

1 引言

三氯蔗糖（Sucralose）是以蔗糖為原料的新型甜味劑[1-2]，由于食用后不會引起血糖波動的特點(diǎn)[3-4]，深受糖尿病患者青睞；同時它也不受溫度環(huán)境的影響[5-6]，具有高穩(wěn)定性，商家比較喜歡，在乳制品、水果罐頭、醬油、酒類、堅(jiān)果類以及醬腌菜等食品中均有添加。但它畢竟是一種添加劑，少量添加能改善食品的口感，增加人們的食欲，但如果添加太多，會對味覺造成刺激，因此國家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014中對不同食品中的三氯蔗糖添加量規(guī)定了最大使用量，實(shí)驗(yàn)主要研究了醬腌菜中三氯蔗糖的含量，標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定其最大使用量為0.25g/kg。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 材料與儀器

實(shí)驗(yàn)試劑：乙腈（德國默克），色譜純；亞鐵氰化鉀（天津市恒興化學(xué)制造有限公司）分析純；乙酸鋅（天津市恒興化學(xué)制造有限公司）分析純；標(biāo)準(zhǔn)品（DR公司），純度99%。

實(shí)驗(yàn)儀器：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（Thermo TSQ Quantum），配有電噴霧離子源；分析天平（美國奧豪斯）；冷凍離心機(jī)（美國貝克曼）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

標(biāo)準(zhǔn)品溶液：稱取10mg（精確至0.001mg）三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品置于100mL容量瓶中，先用少量水溶解，再用水定容至刻度，混勻，配成100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別量取50、100、200、400、600 μL與1000 μL的標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL容量瓶中，加水定容至刻度，配成0.5、1、2、4、6 mg/L和10 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2.3 樣品的處理

準(zhǔn)確稱取均勻樣品1.0g（精確至0.01g）于50mL刻度離心管中，加10mL水渦旋混勻，于超聲波中超聲30min，冷卻，加亞鐵氰化鉀及硫酸鋅各1mL（蛋白質(zhì)多的樣品），8000r/min離心5min，取上清液過0.22μm濾膜，上機(jī)檢測。

2.4 色譜質(zhì)譜條件

液相條件：C18色譜柱，流動相為水和甲醇，流速0.3 mL/min，梯度洗脫。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，負(fù)離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測，噴霧電壓、鞘氣、輔助氣、毛細(xì)管傳輸溫度以及碰撞能量調(diào)節(jié)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到最佳。

3 結(jié)果

3.1 色譜質(zhì)譜條件的優(yōu)化

流動相優(yōu)化如下：色譜柱為C18，100mm×2.1mm×5μm或相當(dāng)，柱溫30℃；流動相：水與甲醇的具體比例見表1，流速0.3mL/min。

3.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源ESI。掃描模式：負(fù)離子掃描。檢測方式：多反應(yīng)檢測（MRM）。如表2選擇兩對定性離子395/359，395/36.0，其中定量離子為395/359，采集時間分別為100ms，碰撞能量分別為14ev和51ev，其相應(yīng)及靈敏度滿足要求。噴霧電壓：3500V。鞘氣30，輔助氣10，毛細(xì)管傳輸溫度350℃。

3.3 三氯蔗糖的標(biāo)準(zhǔn)譜圖

三氯蔗糖的標(biāo)準(zhǔn)圖譜見圖1。

3.4 線性方程

配置混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，濃度為0、0.5、1、2、4、6 mg/L以及10mg/L。分別以選定的定量離子峰面積與濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，三氯蔗糖在0～10mg/L范圍內(nèi)呈良好線性，r2均大于0.99。

3.5 回收率試驗(yàn)

取同一批陰性樣品，加入適量的混合標(biāo)準(zhǔn)液，加標(biāo)量為0.5、1.0、2.0 mg/kg 和5.0mg/kg，每個濃度做6個平行，求其平均回收率，并計(jì)算批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果如表3所示。

4 討論

4.1 方法

目前三氯蔗糖的檢測方法多為分光光度法和液相色譜法（配示差和蒸發(fā)光散射檢測器），但該方法的前處理較麻煩，靈敏度不高，因此選用液相色譜質(zhì)譜的方法進(jìn)行檢測。

4.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

取100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品用蠕動泵的方式直接進(jìn)入質(zhì)譜檢測，由于化合物本身含有較活潑的羥基，在負(fù)離子源模式下的響應(yīng)值及穩(wěn)定性要高于正離子源模式，因此選用負(fù)離子源模式；調(diào)試離子源的噴霧電壓，查看化合物Q1離子圖的響應(yīng)，發(fā)現(xiàn)化合物在噴霧電壓3500V的條件下，Q1的響應(yīng)最高，因此設(shè)定噴霧電壓3500V，根據(jù)化合物的響應(yīng)選取合適的氣流量；在Q3的模式下選取響應(yīng)值較高、較穩(wěn)定的2個子離子，在MRM模式下，選取各子離子響應(yīng)最高最穩(wěn)定的碰撞能量，因此根據(jù)選好的各參數(shù)設(shè)定該方法的質(zhì)譜條件。

4.3 液相條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)過程中選用了甲醇和1‰甲酸水、甲醇和水、乙腈和水、乙腈和1‰甲酸水為流動相，分別進(jìn)行了等度和梯度洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇和水梯度洗脫該化合物峰形和響應(yīng)最好，最穩(wěn)定，因此選用甲醇和水為流動相，進(jìn)行梯度洗脫。

4.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)過程中從不同的超市和市場抽取了20份醬腌菜進(jìn)行三氯蔗糖檢測，結(jié)果如表4所示。

從檢測數(shù)據(jù)分析，三氯蔗糖含量最低的是魚酸菜14.2mg/kg，含量最高的是山地蘿卜214mg/kg，但是這些醬腌菜中三氯蔗糖的含量均符合GB2760-2014標(biāo)準(zhǔn)要求，可放心食用。

參考文獻(xiàn)

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通訊作者：徐娜（1980—），女，山東煙臺人，本科，工程師。研究方向：食品檢測。