馮治棋，左顯維，劉一丹，韓根亮，李工農(nóng)

(1. 甘肅省科學(xué)院傳感技術(shù)研究所，蘭州 730000； 2. 甘肅省傳感器與傳感技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 蘭州 730000)

0 引 言

功能化的磁性納米團(tuán)簇不僅具有大比表面積、高磁響應(yīng)和超順磁性的優(yōu)點(diǎn)[1-3]，還具備了和各種靶向抗體、多肽等生物分子偶聯(lián)的特點(diǎn)[4-6]。在生物分離、共振成像、靶向載藥、磁熱療、疾病的分子診斷、酶檢測(cè)、藥物篩選[7-10]等領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用前景。因?yàn)樗瑫r(shí)具備了富集和放大檢測(cè)信號(hào)的作用，因此可以有效捕獲待檢測(cè)生物分子，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)生物分子的超靈敏識(shí)別，正成為特征生物信息高通量獲取的一種重要工具。目前通過(guò)配體鰲合金屬離子偶聯(lián)在磁性納米顆粒表面的方法主要應(yīng)用于蛋白的分離與純化領(lǐng)域[11-14]，在生物分子檢測(cè)領(lǐng)域少有涉及。因此制備高性能的磁性納米功能組裝體并將熒光信號(hào)富集在磁性納米功能組裝體的表面，通過(guò)熒光信號(hào)測(cè)量實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣本中目標(biāo)物的檢測(cè)具有重要意義。

本文以Fe3O4為磁核，表面進(jìn)行SiO2包覆，通過(guò)羧基硅烷化試劑完成羧基化修飾，利用表面聯(lián)接的配體NTA鰲合金屬Ni2+，制備了一種高性能磁性納米功能組裝體(Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni)。將該組裝體與標(biāo)記熒光素的His標(biāo)簽蛋白進(jìn)行特異性反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)了富集與檢測(cè),通過(guò)加入洗脫液，檢測(cè)上清液，解決了磁性納米功能組裝體自身熒光對(duì)生物分子檢測(cè)的干擾問(wèn)題，提供了一個(gè)對(duì)生物分子靈敏檢測(cè)的新平臺(tái)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 主要試劑和儀器

1.1.1 試劑

水合三氯化鐵，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純；水合醋酸鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純；乙二醇，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純；濃氨水，天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純；正硅酸乙酯(TEOS)，上海中泰化學(xué)試劑有限公司，分析純；氯化鎳，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純；N-(三甲氧基硅基丙基)乙二胺三乙酸鈉，45%的水溶液，Sigma-Aldrich；NA,NA-二(羧甲基)-L-賴氨酸水合物(NTA)，Sigma-Aldrich，分析純；N-羥基丁二酰亞胺(NHS)，Sigma-Aldrich，分析純；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，Sigma-Aldrich，分析純；無(wú)水乙醇，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，分析純；實(shí)驗(yàn)用水均為去離子水。

1.1.2 儀器

SCIENTZ-IID型超聲波細(xì)胞破碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；SCIENTZ-12N型冷凍干燥機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；BEXUS670型傅里葉變換紅外光譜(美國(guó)尼高力(Nicolet)公司)；IRIS-ER/S型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(美國(guó)TJA公司)；FS5型瞬態(tài)、穩(wěn)態(tài)熒光光譜儀(英國(guó)愛(ài)丁堡公司)；NanoZSE型納米粒度及Zeta電位儀(英國(guó)馬爾文公司)；JEM-2010型透射電子顯微鏡(日本電子公司)；Inc8604型振動(dòng)樣品磁強(qiáng)計(jì)(美國(guó)LakeShore公司)；ZDJ-5B-D型自動(dòng)滴定儀(上海雷磁)。

1.2 磁性納米功能組裝體制備

圖1為Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni磁性納米功能組裝體的制備示意圖，具體步驟如下。

圖1 Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的制備Fig 1 The Formation of Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni

1.2.1 Fe3O4納米團(tuán)簇的制備

稱取0.34gFeCl3·6H2O，0.9gNaAc·3H2O溶于60 mL的乙二醇中，室溫?cái)嚢?，使固體完全溶解，得到混合溶液；將混合液加入100 mL聚四氟乙烯內(nèi)嵌的不銹鋼高溫反應(yīng)釜中，于180 ℃下反應(yīng)8h，冷卻后使用乙醇和去離子水各洗滌3次，外部磁場(chǎng)分離，冷凍干燥，得到Fe3O4納米團(tuán)簇。

1.2.2 Fe3O4@SiO2納米顆粒的制備

稱取0.025 gFe3O4納米團(tuán)簇(1.2.1)，加入12mL去離子水，20 mL乙醇，超聲10 min，在冰水浴的條件下，加入2 mL濃氨水，0.05 mL正硅酸乙酯，超聲40 min；外部磁分離，用去離子水洗滌3次，冷凍干燥，得到Fe3O4@SiO2。

1.2.3 Fe3O4@SiO2@COOH磁性納米顆粒分散液的制備

稱取0.05g Fe3O4@SiO2(1.2.2)，置于100 mL三頸瓶中，加入40 mL乙醇，室溫機(jī)械攪拌，加入N-(三甲氧基硅基丙基)乙二胺三乙酸鈉1 mL，通氮?dú)獾臈l件下，于80℃下反應(yīng)8h；外部磁分離，去離子水清洗三次，得到Fe3O4@SiO2@COOH磁性納米顆粒的分散液。

1.2.4 Fe3O4@SiO2@COOH@NTA磁性納米顆粒分散液的制備

取含0.03 g Fe3O4@SiO2@COOH磁性納米顆粒的分散液(1.2.3)，加入4 mL去離子水，加入40 mg EDC和40 mg NHS，混勻攪拌2 h，加入4 mg NA,NA-二(羧甲基)-L-賴氨酸水合物，室溫下反應(yīng)36 h；外部磁分離，加入4 mL去離子水，清洗3次，得到Fe3O4@SiO2@COOH@NTA磁性納米顆粒的分散液。

1.2.5 Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni磁性納米功能組裝體分散液的制備

取Fe3O4@SiO2@COOH@NTA磁性納米顆粒的分散液(1.2.4)，外部磁分離后，分別加入4mL(0.1、0.5、1M)NiCl2水溶液，混合反應(yīng)2h；外部磁分離，加入去離子水，清洗3次，最后分散于0.3 mL去離子水中。

1.3 蛋白檢測(cè)

圖2為磁性納米功能組裝體提取與檢測(cè)的原理圖，取制備Fe3O4@SiO2@ COOH@NTA-Ni磁性納米功能組裝體的分散液8.65 μL。加入一定量5 μM熒光標(biāo)記的具有His標(biāo)簽的蛋白，再加入PBS緩沖溶液，使總體積為600 μL，體系His標(biāo)簽的蛋白的濃度分別為(200、500、800 nM、1、2、3、4 μM)，反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后，PBS緩沖溶液清洗3次，加入600 μL咪唑洗脫液(PBS，250mM咪唑，PH8.0)，反應(yīng)1 h，外部磁分離后，留上清液在激發(fā)波長(zhǎng)490 nm、狹縫1 nm；發(fā)射波長(zhǎng)520 nm、狹縫0.5 nm下進(jìn)行熒光檢測(cè)。

圖2 磁性納米功能組裝體檢測(cè)原理圖Fig 2 Detection schematic of magnetic nano-assembly structure

2 結(jié)果與討論

2.1 TEM分析

圖3為(a)Fe3O4、(b)Fe3O4@SiO2、(c) Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni@蛋白的TEM照片。從圖1可得，(a) Fe3O4形貌是由極小的納米晶組成球形團(tuán)簇，粒徑約為200 nm且分散性良好；(b)是在圖(a) Fe3O4的基礎(chǔ)上包覆了一層SiO2，可以看到有明顯的包覆層，粒徑約為220nm且分散性良好；(c)是在(b)的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)層層化學(xué)修飾，最終形成Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的磁性納米功能組裝體，并利用該組裝體與His標(biāo)簽蛋白進(jìn)行特異性結(jié)合得到的TEM圖。由圖可得，通過(guò)層層修飾后，粒徑增大到300 nm，且表面有凸起，表現(xiàn)出一定的粗糙度，初步證明其修飾成功，并且分散性良好。

圖3 (a)Fe3O4(b)Fe3O4@SiO2(c)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni@蛋白的TEM照片F(xiàn)ig 3 TEM image of Fe3O4, Fe3O4@SiO2 and Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni@Protein

2.2 紅外分析

圖4是Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni制備過(guò)程中，各中間體的傅里葉變換紅外(FT-IR)光譜圖，其中d曲線是最終得到的磁性納米功能組裝體?？梢钥吹?90cm-1出現(xiàn)的峰是Fe-O鍵的伸縮振動(dòng)峰[15]，是Fe3O4的特征峰，1084 cm-1處出現(xiàn)Si-O的反伸縮振動(dòng)峰，795 cm-1處出現(xiàn)Si-O的對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰，955 cm-1處出現(xiàn)了Si-OH的彎曲振動(dòng)峰，說(shuō)明具有明顯SiO2的包覆層；3 378 cm-1附近出現(xiàn)的峰是O-H鍵的伸縮振動(dòng)峰[16]。1 385 cm-1出現(xiàn)的峰對(duì)應(yīng)是C-N鍵的伸縮振動(dòng)峰，這是由于NTA結(jié)構(gòu)中存在C-N鍵，1 624 cm-1處出現(xiàn)-COO-中C=O的伸縮振動(dòng)峰且圖2(d)比圖2(c)的強(qiáng)度更強(qiáng)[17]，這是因?yàn)镹TA中帶有3個(gè)羧基，從而使其增強(qiáng)。以上數(shù)據(jù)從結(jié)構(gòu)上均表明磁性納米組裝體的成功制備。

圖4 (a)Fe3O4(b)Fe3O4@SiO2(c)Fe3O4@SiO2@COOH(d)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的傅里葉變換紅外(FT-IR)光圖譜Fig 4 FT-IR spectra of Fe3O4, Fe3O4@SiO2, Fe3O4@SiO2@COOH and Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni

2.3 Zeta電位分析

圖5是Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni制備過(guò)程中，各中間體的Zeta電位圖，從中可以看到(1)Fe3O4的Zeta電位是38mv，這是由于Fe3O4的制備過(guò)程中醋酸鈉不僅起到了反應(yīng)助劑的作用，同時(shí)NaAc中的羧酸基團(tuán)與顆粒表面優(yōu)先結(jié)合，而使在顆粒的外表面為帶正電荷的鈉離子[18]；(2)Fe3O4@SiO2的Zeta電位-31 mV，二氧化硅的零電荷點(diǎn)為pH=2.5，若pH<2.5則帶正電，反之，pH>2.5就帶負(fù)電；其依據(jù)在于SiO2在水中水解得到H2SiO3，然后硅酸電離，H+進(jìn)入到溶液中，剩下的HSiO3負(fù)離子附著在SiO2的表面，使得SiO2在水中顯負(fù)電性；(3)Fe3O4@SiO2@COOH的Zeta電位為-39 mV，羧基本身帶負(fù)電，SiO2表面羧基修飾后，負(fù)電性明顯增強(qiáng)；(4)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA的Zeta電位為-29 mV，相對(duì)于Fe3O4@SiO2@COOH的Zeta電位偏正，這是由于NTA結(jié)構(gòu)中N存在孤對(duì)電子所引起；(5)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的Zeta電位是-25 mV，由于引入了Ni2+，使其電位向正方向移動(dòng)。

圖5 (1)Fe3O4(2)Fe3O4@SiO2(3)Fe3O4@SiO2@COOH(4)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA (5)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的Zeta電位圖Fig 5 Zeta potential of Fe3O4, Fe3O4@SiO2, Fe3O4@SiO2@COOH, Fe3O4@ SiO2@COOH@NTA and Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni in water

2.4 羧基密度測(cè)定

此外，我們也對(duì)羧基的含量進(jìn)行了計(jì)算：分別做出電導(dǎo)率下降和上升階段斜率a和b，再做一條平行于橫坐標(biāo)，經(jīng)過(guò)電導(dǎo)率最低點(diǎn)的直線c。它們相交所形成的AB線段在橫坐標(biāo)上對(duì)應(yīng)的體積就是NaOH消耗的體積V。

圖6 Fe3O4@SiO2@COOH電導(dǎo)滴定圖Fig 6 Conductometric titration curves of Fe3O4@SiO2@COOH

根據(jù)公式：-COOH=NV/m[19]，N表示滴定液NaOH的濃度，V表示消耗的體積，m表示所測(cè)試的羧基化磁性顆粒的質(zhì)量，計(jì)算得到Fe3O4@SiO2@COOH的羧基含量可達(dá)到0.5 μmol/mg。

2.5 氯化鎳濃度對(duì)Ni2+含量的影響

表1為不同氯化鎳濃度下，離子濃度對(duì)于NTA鰲合Ni2+含量的影響，采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜(ICP)測(cè)定Ni2+含量。由表1可知，NTA對(duì)于Ni2+的鰲合量與加入氯化鎳溶液的濃度有極大的關(guān)系，1 g組裝體中Ni2+的最高鰲合量可達(dá)8.693×10-5mol。

表1不同NiCl2濃度下Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni中Ni2+的含量

Table1Ni2+ContentinFe3O4@SiO2@COOH@NTA-NiatdifferentconcentrationsofNiCl2

序號(hào)氯化鎳濃度1 g組裝體Ni2+含量1 g組裝體Ni2+含量10.1M1.294×10-3g2.19×10-5mol20.5M3.461×10-3g5.86×10-5mol31M5.129×10-3g8.693×10-5mol

2.6 磁性能測(cè)試

圖7是Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni磁性納米功能組裝體及各中間體的磁滯回線，從圖中可知，F(xiàn)e3O4、Fe3O4@SiO2、Fe3O4@SiO2@COOH和Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的飽和磁化強(qiáng)度分別為：65、45、43和40 A·m2/kg。隨著非磁性物質(zhì)包覆的增加，飽和磁化強(qiáng)度逐漸降低，但由于團(tuán)簇的存在，通過(guò)層層包覆后磁化強(qiáng)度降低幅度并不明顯，依然具有較好的磁性。此外，不存在明顯的滯后環(huán)，幾乎無(wú)剩磁現(xiàn)象，表現(xiàn)出良好的超順磁性。這就保證了磁性納米功能組裝體在溶液中的快速磁分離。

圖7 (a)Fe3O4(b)Fe3O4@SiO2(c)Fe3O4@SiO2@COOH (d)Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni的磁滯回線圖Fig 7 Hysteresis loops of Fe3O4, Fe3O4@SiO2, Fe3O4@SiO2@COOH and Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni

2.7 Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni磁性納米功能組裝體熒光檢測(cè)蛋白

圖8是磁性納米功能組裝體(前驅(qū)體)與His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗2次，分別測(cè)量得到的熒光光譜圖。從圖中可以看到，清洗一次(b)和清洗兩次(c)熒光強(qiáng)度幾乎不變，說(shuō)明經(jīng)過(guò)兩次清洗后，前驅(qū)體表面已經(jīng)沒(méi)有非特異性吸附的His標(biāo)簽蛋白。同時(shí)，前驅(qū)體(a)和清洗一次(b)、清洗兩次(c)的熒光強(qiáng)度雖然有所變化，但是出峰位置都在516和600 nm，而我們?cè)O(shè)計(jì)的熒光素會(huì)在530 nm附近出現(xiàn)，所以猜測(cè)516和600 nm出現(xiàn)的是前驅(qū)體的峰，為了驗(yàn)證，我們做了對(duì)比實(shí)驗(yàn)，圖9是磁性納米功能組裝體(前驅(qū)體)與非His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗2次，分別測(cè)量得到的熒光光譜圖，與圖8相比，圖9出峰位置和熒光強(qiáng)度都沒(méi)有變化。因此，我們認(rèn)為前軀體本身激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光掩蔽了蛋白上熒光素激發(fā)產(chǎn)生的熒光，直接利用前驅(qū)體檢測(cè)熒光時(shí)會(huì)對(duì)檢測(cè)物產(chǎn)生干擾。鑒于此，我們利用洗脫液對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行清洗，然后對(duì)清洗后的上清液進(jìn)行測(cè)量。

圖8 (a)前驅(qū)體，(b)前驅(qū)體與His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗1次，(c)前驅(qū)體與His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗2次的熒光光譜圖Fig 8 Fluorescence spectra picture of precursor, precursor reacted with histidine-tagged proteins after washed once and precursor reacted with histidine-tagged proteins after washed twice

圖10是前驅(qū)體與His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗所得上清液：(a)清洗1次，(b)清洗2次，(c)加入洗脫液。清洗一次后上清具有一定的熒光強(qiáng)度，且出峰位置在530 nm附近，經(jīng)過(guò)第二次清洗，上清液的熒光強(qiáng)度為零，加入洗脫液后上清液在530 nm出現(xiàn)一個(gè)較強(qiáng)的熒光峰。這是由于清洗多次以后，前驅(qū)體表面的非特異性吸附逐漸被清洗，使得上清液的熒光強(qiáng)度逐漸降低并最終將為零。而加入洗脫液后，上清液具有一定的熒光強(qiáng)度，是由于表面特異性吸附的蛋白被剝離進(jìn)入上清液。圖11是前驅(qū)體與非His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗所得上清液：(a)清洗1次，(b)清洗2次，(c)加入洗脫液。通過(guò)對(duì)比圖10發(fā)現(xiàn)清洗二次后上清液熒光強(qiáng)度均為零，而加入洗脫液后兩者有明顯的區(qū)別，圖10中c曲線在530 nm附近出現(xiàn)一個(gè)較強(qiáng)的熒光峰，而同時(shí)圖11中c曲線的熒光強(qiáng)度依然為零。這就說(shuō)明我們制備的磁性納米功能組裝體實(shí)現(xiàn)了特異性連接His標(biāo)簽蛋白。

圖9 (a)前驅(qū)體，(b)前驅(qū)體與非His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗1次，(c)前驅(qū)體與非His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗2次的熒光光譜圖Fig 9 Fluorescence spectra picture of precursor, precursor reacted with no histidine-tagged proteins after washed once and precursor reacted with no histidine-tagged proteins after washed twice

圖10 前驅(qū)體與His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗所得上清液:(a)清洗1次，(b)清洗2次，(c)加入洗脫液的熒光光譜圖Fig 10 Fluorescence spectra picture of the supernatant obtained after precursor reacting with histidine-tagged proteins: (a) washed once, (b) washed twice, (c) add the eluent

圖11 前驅(qū)體與非His標(biāo)簽蛋白反應(yīng)后清洗所得上清液：(a)清洗1次，(b)清洗2次，(c)加入洗脫液的熒光光譜圖Fig 11 Fluorescence spectra picture of the supernatant obtained after precursor reacting with no histidine-tagged proteins: (a) washed once, (b) washed twice, (c) add the eluent

圖12 不同His標(biāo)簽蛋白濃度時(shí)上清液的熒光光譜圖Fig 12 Fluorescence spectra of supernate in the presence of different concentrations of histidine-tagged proteins

圖13 (a)2μMHis標(biāo)簽蛋白；(b)2μM His標(biāo)簽蛋白與組裝體反應(yīng)后上清液(c)咪唑脫液的熒光光譜圖Fig 13 Fluorescence spectra of 2μM histidine-tagged proteins, supernate obtained after precursor reacting with 2 μM histidine-tagged proteins and eluent containing imidazole

接著我們又研究了磁性納米功能組裝體與不同體系濃度His標(biāo)簽蛋白的反應(yīng)，經(jīng)過(guò)清洗，外部磁分離，加入洗脫液后取上清液測(cè)量。圖12為不同體系濃度下，上清液的熒光光譜圖，從圖中我們可以看到，隨著體系濃度的增加，上清液熒光強(qiáng)度逐漸增加，當(dāng)達(dá)到2 μM時(shí)，熒光強(qiáng)度達(dá)到最強(qiáng)，繼續(xù)增加濃度，發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度反而下降。說(shuō)明當(dāng)體系濃度為2 μM時(shí)，該磁性納米功能組裝體的結(jié)合量最高，濃度過(guò)大即超過(guò)2 μM，會(huì)抑制該磁性功能組裝體與His標(biāo)簽蛋白的結(jié)合。

此外，我們還做了一組對(duì)照實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明這種檢測(cè)新方法的可靠性。圖13是在2μM體系濃度下，純His標(biāo)簽蛋白、反應(yīng)后上清液及咪唑洗脫液的熒光光譜圖。首先咪唑洗脫液的熒光強(qiáng)度為零，對(duì)于熒光檢測(cè)沒(méi)有任何影響，反應(yīng)后的上清液熒光強(qiáng)度較純His標(biāo)簽蛋白有所降低，同時(shí)根據(jù)熒光強(qiáng)度，得到其反應(yīng)效率可達(dá)66.7%。

3 結(jié) 論

(1)利用改進(jìn)的溶劑熱法制備Fe3O4納米團(tuán)簇，以該團(tuán)簇為核，層層包覆制備得到Fe3O4@SiO2@COOH@NTA-Ni磁性納米功能組裝體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該功能組裝體擁有高的飽和磁化強(qiáng)度且保持超順磁性，在水相中具有良好的分散穩(wěn)定性，與His標(biāo)簽蛋白有很強(qiáng)的特異性結(jié)合能力。

(2)研究設(shè)計(jì)了一種新的檢測(cè)方法避免了磁性納米功能組裝體本身熒光對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。通過(guò)各種實(shí)驗(yàn)證明利用洗脫后的上清液檢測(cè)目標(biāo)物的方法可靠性，并且咪唑洗脫液不影響熒光檢測(cè)，同時(shí)可以替換結(jié)合的His標(biāo)簽蛋白，保證了該磁性功能組裝體的多次重復(fù)利用。此外，類似的組裝體主要應(yīng)用于蛋白的分離與提取，而本研究提供了一種可以用于生物分子檢測(cè)的方法，拓展了其在生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用。