薛 萍，宗曼合，鄭永波，楊小虎，楊 程

（1.平?jīng)鍪袆游镆卟☆A防控制中心，甘肅平?jīng)?744000；2.平?jīng)鍪嗅轻紖^(qū)香蓮鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，甘肅平?jīng)?744000）

布魯氏菌病（brucellosis，以下簡稱布病）是由布魯氏菌（Brucella）引起的一種人獸共患變態(tài)反應性傳染病[1]。布魯氏菌屬有6 個種，其中羊種布魯氏菌侵入性最強[2]，主要侵害宿主的生殖系統(tǒng)和關(guān)節(jié)等器官，也是引起人感染的主要菌型。布病全球流行給畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康帶來極大危害[3]，因此我國將其列為二類動物傳染病，并列入《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》重點防控疫病目錄[4]。該病主要經(jīng)消化道、皮膚黏膜和呼吸道等途徑侵入機體而發(fā)病，引起生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)的嚴重損害[5]。

目前，我國對布病實施分區(qū)防控策略。《2009－2015 年布魯氏菌病結(jié)核病防治規(guī)劃大綱》要求，在布病未控制區(qū)（疫區(qū)）實施以免疫為主的防控措施。目前，我國使用的布魯氏菌疫苗主要有M5、Rev-1、S19、S2 毒株，均為弱毒疫苗。M5、Rev-1、S19 毒株優(yōu)點是免疫期長、抗體反應強烈，其中M5 有效免疫期長達5 年，Rev-1、S19 毒株可達3 年，但缺點是免疫方式要求較高，須注射或點眼免疫，操作復雜，不適合大批量同時免疫，且存在較高的工作人員感染風險，對孕畜也不安全。而S2 毒株活疫苗口服免疫，簡單方便，有助于提高免疫密度，雖然抗體反應弱，但通過加大免疫劑量或加強免疫，也可提高免疫保護率[6]。

近年來，甘肅省平?jīng)鍪胁疾∫咔楸容^平穩(wěn)，但偶有反彈勢頭。為保障人民群眾身體健康和養(yǎng)羊業(yè)持續(xù)發(fā)展，該市決定在全市布病流行較為嚴重的縣（區(qū)），對易感羊只采用布氏菌病活疫苗S2 株口服免疫。為充分了解該疫苗整群口服免疫的安全性和免疫效果，在免疫工作全面開展前，選擇了2個行政村開展了小范圍免疫試驗。

1 材料

1.1 試驗動物

在平?jīng)鍪腥A亭縣策底鎮(zhèn)、崆峒區(qū)崆峒鎮(zhèn)，各選1 個行政村，以所選2 個行政村散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的264 只未免疫羊作為試驗羊，進行布魯氏菌（S2 株）活疫苗口服免疫試驗。所有試驗羊只在口服免疫試驗前，采集血清，用虎紅平板凝集試驗（RBT）、試管凝集試驗（SAT）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法進行檢測，全部為陰性。

1.2 疫苗與試劑

試驗用布魯氏菌S2 株活疫苗（批號5393060），購自金宇保靈生物藥品有限公司。布病虎紅平板凝集試驗（RBT）抗原（批號201603）、試管凝集試驗（SAT）抗原（批號201603）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（批號201608），均購自哈藥集團生物疫苗有限公司。

2 方法

2.1 試驗分組與免疫

按照Ding 等[7]介紹的方法進行試驗分組與口服免疫，用專用投藥槍進行灌服。將264 只羊，按月齡不同分為2 組（表1）：3 月齡以上組（包括懷孕母羊），在疫苗使用說明書使用劑量基礎(chǔ)上，加倍劑量灌服免疫，即每只口服活菌100×2 億，用生理鹽水稀釋至4 mL；3 月齡及以下組，按說明書正常劑量免疫，即每只口服活菌100 億，用生理鹽水稀釋至2 mL。

表1 試驗羊只分組 單位：只

2.2 臨床觀察與抗體檢測

對264 只試驗羊口服免疫布魯氏菌活疫苗后進行連續(xù)臨床觀察，記錄免疫羊只出現(xiàn)的不良反應；分別在免疫30、60、180、210 d 后，采集羊血，分離血清并詳細編號登記，同時采用RBT+SAT垂直檢測和 ELISA 檢測方法，進行免疫抗體跟蹤檢測，然后對兩種檢測結(jié)果進行比較分析。RBT+SAT 垂直檢測，即先用RBT 初檢，陽性的再用SAT 復檢，全為陽性的判定為陽性。

3 結(jié)果與分析

3.1 臨床觀察

2 個試驗組，即3 月齡以上（包括懷孕羊只）和3 月齡及以下羊只，采用布魯氏菌S2 株活疫苗口服免疫后，均未出現(xiàn)不良反應。

3.2 免疫抗體檢測

3.2.1 總體情況 檢測結(jié)果（表2）顯示：布魯氏菌S2 株活疫苗口服免疫30 d 后，試驗羊只2 種檢測方法檢測的免疫抗體陽性率分別為47.3%和53.8%，隨免疫天數(shù)增加，抗體陽性率不斷遞減，至210 d 時，免疫抗體陽性率分別降至1.5%和2.3%，免疫抗體幾乎消失。

表2 免疫后不同時間、不同方法抗體水平檢測結(jié)果

3.2.2 分組情況 2 組試驗羊的檢測結(jié)果（表3～4）顯示，3 月齡以上羊只不同免疫時間2 種檢測方法的免疫抗體陽性率均略高于3 月齡及以下羊只；對2 種檢測方法的檢測結(jié)果進行單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)差異不顯著（P＞0.05）。

表3 3 月齡以上羊免疫后不同時間、不同方法檢測結(jié)果統(tǒng)計

表4 3 月齡及以下羊免疫后不同時間、不同方法檢測結(jié)果統(tǒng)計

4 討論

布魯氏菌弱毒活疫苗S2 株為光滑型菌株，存在相應的缺陷，易誘導產(chǎn)生S-LPS 抗原“O”鏈特異性抗體，免疫后無法鑒別人工免疫群和自然野毒感染群[8-9]，從而干擾常規(guī)診斷結(jié)果，給臨床確診造成一定困難。

本試驗免疫30 d 后檢測到的平均抗體陽性率為47.3%（RBT+SAT）和53.8%（ELISA），與趙詠中等[10]口服正常劑量得到的最高免疫抗體陽性率基本一致。布魯氏菌弱毒疫苗S2 株抗體反應較弱，因而需加強免疫?？紤]到羊群弱毒疫苗免疫會產(chǎn)生免疫人員感染風險，且補免不僅會加大工作量，也會加大感染風險，為確保免疫效果，本試驗對3月齡以上羊只在常規(guī)免疫劑量基礎(chǔ)上加倍免疫，同時為保證免疫羊群的安全性，對3 月齡及以下羊只采用常規(guī)劑量免疫。試驗結(jié)果表明，2 組試驗羊只均產(chǎn)生了理想的抗體陽性率，且均未發(fā)生不良反應，加倍劑量試驗組免疫抗體略高于常規(guī)劑量免疫組，證明該疫苗試驗劑量對所有月齡羊只包括懷孕羊都是安全有效的。這與樊生平等[11]和申捷等[12]的研究結(jié)果一致。該試驗因所在單位無妊娠診斷設(shè)備，所以在試驗分組時未統(tǒng)計懷孕羊只數(shù)量，但可以確定試驗羊只中存在一定數(shù)量的懷孕母羊，所以說布魯氏菌S2 株弱毒苗加倍劑量口服免疫，對懷孕羊只也是安全的?？傊?，在試驗劑量下，用布魯氏菌活疫苗S2 株口服免疫1 次，即可產(chǎn)生理想的免疫效果，從而降低了免疫工作量和人員感染風險。

本試驗發(fā)現(xiàn)，免疫180 d 后仍有5.7%和7.2的羊只為抗體陽性，免疫210 d 后仍有1.5%和2.5%為抗體陽性，而此時的抗體陽性是感染陽性還是免疫陽性，需進一步探討。

RBT 敏感性較高，但特異性低，易受試驗溫度、凝集時間和檢測人員主觀因素的影響，只能作為初篩；SAT 是國標確診方法，但該方法操作繁瑣、費時，不適于現(xiàn)場檢測，其判定也受主觀因素影響。OIE 規(guī)定ELISA 為布病的國際貿(mào)易確診方法。該方法敏感性和特異性均好，檢測時間比試管凝集更短，適于大批量檢測，由于操作步驟相對簡單，因而減少了人為因素干擾，易標準化和質(zhì)量控制[13]。但相比前兩種方法，ELISA 檢測成本較高。這幾種檢測方法都有各自的局限性，其敏感性和特異性會因樣本量的不同而有所差異[14-16]。

本試驗只是小范圍的免疫試驗，而免疫效果和安全性受多種因素影響，因此需要開展S2 疫苗口服免疫的大規(guī)模田間試驗。不同地區(qū)可根據(jù)本地實際，先進行小范圍試點，然后逐步推廣使用。

5 結(jié)論

試驗表明：布魯氏菌S2 株活疫苗正常劑量免疫3 月齡及以下羊只、加倍劑量免疫3 月齡以上羊只（包括懷孕母羊）均安全有效，一次免疫即可產(chǎn)生理想的免疫保護效果，可先行試點，逐步推廣應用。