◎王珊 許海燕 侯敏娜 劉艷紅 王青

絞股藍(lán)為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物絞股藍(lán)（Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino 的干燥全草，又名五葉參、七葉參，有“南方人參”和“第二人參”的美譽(yù)，是一種新的藥食兩用植物資源。絞股藍(lán)具有清熱解毒、化痰止咳、益氣健脾、養(yǎng)陰生津、養(yǎng)心安神等功效。絞股藍(lán)的主要活性成分為皂苷類、黃酮類、多糖、氨基酸和微量元素等成分類。研究發(fā)現(xiàn)，絞股藍(lán)皂苷是主要活性成分之一，具有保護(hù)心腦血管、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、降血糖、調(diào)血脂、保肝、抗氧化、抗?jié)円约翱顾ダ系榷喾N活性。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)具有較好的抗氧化活性，廣泛的應(yīng)用于保健食品和化妝品，因此比較評價不同采收期的絞股藍(lán)抗氧化活性強(qiáng)弱對于后期擴(kuò)大絞股藍(lán)的開發(fā)性研究具有重要的意義。

一、材料

T6-新世紀(jì)紫外分光光度計（北京普析通用股份有限公司）；十萬分之一電子天平（METTLER-XP-205，深圳市盛美儀器有限公司）。

DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，購于：日本東京化成工業(yè)株式社會）；ABTS（2，2'氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6）銨鹽購于：日本東京化成工業(yè)株式社會）；TPTZ（2，4，6– 三吡–啶基 1，3，5-三嗪購于：日本東京化成工業(yè)株式社會）。

絞股藍(lán)樣品均為2019 年從道地產(chǎn)區(qū)直接收集，經(jīng)陜西國際商貿(mào)學(xué)院雷國蓮教授鑒定為為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物絞股藍(lán)（Gynostemma pentaphyllum（Thumb.）Makino 的干燥全草。

二、方法

1.工作液的配制。

準(zhǔn)確稱取DPPH 適量，用無水乙醇溶解并配制成200 μmol L-1的工作液，置于4℃?zhèn)溆茫吹谩?/p>

準(zhǔn)確稱取適量ABTS 和過硫酸鉀用水溶劑并配置成濃度分別為7 mmol L-1和2.45 mmol L-1的備用溶液，再將兩者等體積混勻，于室溫下避光放置15 h，即得ABTS 儲備液。使用前用甲醇稀釋至光密度為0.7±0.003 得ABTS 工作液。

準(zhǔn)確稱取適量醋酸鈉、TPTZ 及FeCL3.6H2O，用水溶解并配置成濃度分別為0.3 mmol L-1、10 mmol L-1及20 mmol L-1，再將三者按照為10：1：1 體積比混勻，即得TPTZ 工作液，該溶液要現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.供試品的配置。

分別稱取5、6、7、8、9 五個不同采收期絞股藍(lán)藥材干燥粉末（過20 目篩）約1g，加石油醚適量，超聲處理兩次每次30 min，棄去石油醚，加60%乙醇50 mL，超聲處理兩次，每次45min，過濾，合并濾液，蒸干即得不同采收期絞股藍(lán)醇提取物。

稱取不同采收期絞股藍(lán)的醇提取物約0.2 mg（平行三份），精密稱定，加25 mL 60%乙醇，超聲處理30 min，所得溶液用60%乙醇稀釋至一系列濃度，備用。

3.樣品的測定。

（1）DPPH 實(shí)驗(yàn) 取3ml 供試品溶液與3 ml 200 μmol L-1DPPH 工作液于室溫反應(yīng)40 min，并于517 nm 處測定吸光度，重復(fù)測定3 次。根據(jù)清除率的計算公式計算DPPH 清除率。

清除率（%）=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%（a），公式中，Ai表示3ml DPPH 溶液與3 mL 供試品溶液的吸光度；Aj表示3 mL 無水乙醇溶液與3mL 供試品溶液的吸光度；A0為3 ml DPPH 溶液與3mL空白試劑的吸光度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以清除DPPH 自由基的IC50值表示樣品的抗氧化活性。

（2）ABTS 實(shí)驗(yàn) 取0.5 mL 供試品溶液與3 mL ABTS 工作液混勻，于室溫下反應(yīng)40 min，并于734 nm 下測定吸光度，重復(fù)測定3 次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)公式（a）計算ABTS 清除率，同時實(shí)驗(yàn)結(jié)果以清除ABTS 自由基的IC50值表示樣品的抗氧化活性。

（3）FRAP 實(shí)驗(yàn) 取0.5 mL 供試品溶液與3 mL FRAP 工作液混勻，反應(yīng)60min，在734 nm 處測定吸光度，重復(fù)測定3 次，以FeSO4為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程，樣品的抗氧化能力用FRAP 值表示：1FRAP 單位相當(dāng)于1 mmol L-1FeSO4。

三、結(jié)果與討論

通過對不同采收期絞股藍(lán)醇提取物的抗氧化活性研究發(fā)現(xiàn)，不同采收期對絞股藍(lán)抗氧化的活性影響較大。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在三種體外抗氧化模型的檢測中5 個采收期的絞股藍(lán)醇提取物的抗氧化活性結(jié)果基本相似，其中7 月份采收的絞股藍(lán)的抗氧化活性最好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1、2 和3 所示。該研究對絞股藍(lán)的產(chǎn)地采收加工和絞股藍(lán)的進(jìn)一步開發(fā)性研究提供一定的理論依據(jù)。

表1 不同采收期絞股藍(lán)醇提取物清除DPPH 活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 不同采收期絞股藍(lán)醇提取物清除ABTS 活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 不同采收期絞股藍(lán)醇提取物清除FRAP 活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果