王靜，張秀花，任仲麗，閆世生，盛春雷

(菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，山東 菏澤)

0 引言

養(yǎng)陰清肺丸由地黃、麥冬、玄參、川貝母、白芍、牡丹皮、薄荷、甘草八種中藥組成。主要作用為補(bǔ)益劑，具有養(yǎng)陰潤燥，清肺利咽之功效，主治陰虛肺燥，咽喉干痛，干咳少痰或痰中帶血[2]。本品屬純中藥制劑，副作用小，價(jià)格便宜，市場需求量大，越來越受到病患的關(guān)注。作者在2019 年風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測樣品檢驗(yàn)過程中，通過全國四家藥品生產(chǎn)企業(yè)提供的微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)資料發(fā)現(xiàn)，四家企業(yè)的方法適用性試驗(yàn)均存在差異；在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)室參照其提供方法適用性試驗(yàn)對(duì)30 批次樣品進(jìn)行了檢驗(yàn)，并對(duì)其檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析微生物污染程度。

1 試驗(yàn)材料

1.1 樣品

1.1.1 北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠

大蜜丸14 批次：批號(hào)分別為18010482 兩批次、18010204、18010480、18010483、18010364、18010367、18010494、18010135、18010360、18010476、17016020、18010487、18010162。

水蜜丸11 批次：批號(hào)分別為17035535 三批次、17035131兩 批 次、17035536 兩 批 次、17035537、17035290、17035132、17035288。

1.1.2 山西華康藥業(yè)股份有限公司

水蜜丸3 批次，批號(hào)分別為20190202、20181202、20181201。

1.1.3 呼倫貝爾松鹿制藥有限公司

大蜜丸1 批次，批號(hào)為181213。

1.1.4 頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)赤峰丹龍藥業(yè)有限公司

大蜜丸1 批次，批號(hào)為1705052。

1.2 培養(yǎng)基與稀釋液

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：190518)、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：190625)、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(批號(hào)：190712)、PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液(批號(hào)：190520)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：170925)、麥康凱液體培養(yǎng)基(批號(hào)：171205)腸道菌增菌液(批號(hào)：180222)、紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：180627)木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)：170804)等均由北京陸橋技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 儀器

電子天平(HZT-A600，福州華志科學(xué)儀器有限公司)、高壓蒸汽滅菌器(MLS-3781L-PC，三洋工業(yè)株式會(huì)社)、生物安全柜(Class ⅡBSC，新加坡ESCD 公司)、細(xì)菌濁度分析儀(WGZ-2XJ，上海盺瑞儀器儀表有限公司)、電熱恒溫培養(yǎng)箱(DHP-420，北京市永光明醫(yī)療儀器廠)、生化培養(yǎng)箱(SPX-150B，上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

2 方法

2.1 供試液制備

取供試品10g，加pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100mL，勻 漿，制 成1：10 供 試 液；取 上 述 供 試 液1mL 加 至9mLpH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，制成1：100 的供試液，依法制成1：1000 的供試液。

2.2 需氧菌計(jì)數(shù)、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)

2.2.1 常規(guī)法

取1：10 供試液，依相應(yīng)微生物計(jì)數(shù)法操作。

2.2.2 增加稀釋液法

取1：10 供試液2mL，加pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至10mL，制成1：50 供試液，依相應(yīng)微生物計(jì)數(shù)法操作。

2.3 控制菌檢查

2.3.1 耐膽鹽革蘭陰性菌

2.3.1.1 常規(guī)法

分別取2.1 中1：10、1：100、1：1000 供試液各1mL 加入10mL腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查方法檢查。

2.3.1.2 增加培養(yǎng)基體積法

分別取2.1 中1：10、1：100、1：1000 供試液各1mL 加入50mL腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查方法檢查。

2.3.2 大腸埃希菌

常規(guī)法 取2.1 中1：10 供試液10mL，接種至100mL 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查方法檢查。

2.3.3 沙門菌

2.3.3.1 常規(guī)法

取供試品10g，接種至100mL 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，勻漿，依相應(yīng)控制菌檢查方法檢查。

2.3.3.2 增加培養(yǎng)基體積法

取供試品10g，接種至200mL 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，勻漿，依相應(yīng)控制菌檢查方法檢查。

2.4 四家生產(chǎn)企業(yè)提供微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)及結(jié)果。

2.5 30 批次樣品微生物限度檢驗(yàn)結(jié)果。

3 討論

3.1 微生物限度檢查法

系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法[3]，其檢驗(yàn)項(xiàng)目包括微生物計(jì)數(shù)及控制菌檢查。從表1、表2可看出，因原料產(chǎn)地、批次、輔料及生產(chǎn)工藝存在一定差異，不同企業(yè)的方法適用性試驗(yàn)不同，不能固定沿用同一種微生物限度檢查法，而應(yīng)該通過方法適用性試驗(yàn)確定其可行性及可靠性[4]。

表1 四家生產(chǎn)企業(yè)提供的微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)

表2 四家生產(chǎn)企業(yè)提供需氧菌、霉菌和酵母菌回收比值

表3 30 批次樣品微生物計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表4 30 批次樣品致病菌檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3.2 從表3 可以看出，大蜜丸需氧菌總數(shù)檢出率為37.5%，霉菌和酵母菌總數(shù)檢出率為31.2%；水蜜丸需氧菌總數(shù)檢出率為21.4%，霉菌和酵母菌總數(shù)檢出率為14.3%；從表4 可以看出，耐膽鹽革蘭陰性菌均小于10cfu/g，大腸埃希菌和沙門菌均未檢出。由此可以看出，同一品種大蜜丸較水蜜丸微生物污染程度高。

3.3 綜合分析

3.3.1 樣品中微生物生長所需營養(yǎng)成分

針對(duì)我院30 批次檢驗(yàn)報(bào)告分析：大蜜丸平均水分11.9%，水蜜丸平均水分7.3%，大蜜丸比水蜜丸水分高4.6%；標(biāo)準(zhǔn)制法中大蜜丸加煉蜜量為70～90g，水蜜丸加入煉蜜量為20～40g[5]，大蜜丸煉蜜加入量是水蜜丸的2.5～3.5 倍，煉蜜中最主要的成分是糖類；水分和糖類是微生物生長中不可缺少的營養(yǎng)成分[6]，因此大蜜丸比水蜜丸更容易滋生微生物。

3.3.2 中藥材質(zhì)量

中藥材中凡含糖類、粘液質(zhì)、淀粉、蛋白質(zhì)及油類藥材易發(fā)霉[7]，而樣品制備過程中所用麥冬、甘草、薄荷均屬于此類中藥材，為引起霉菌過高的重要因素，因此生產(chǎn)企業(yè)在選用此類中藥材時(shí)要嚴(yán)格把控質(zhì)量，確保藥品安全可靠。