金津，張文軍，袁恒杰

（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院藥劑科，天津300052）

鹽酸氨溴索（ambroxol hydrochloride）為溴己新在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物，化學(xué)名稱為反式-4-[（2-氨基-3，5-二溴芐基）氨基]環(huán)己醇鹽酸鹽，是目前臨床常用的黏痰溶解藥。其活性強(qiáng)于溴己新，能明顯改善排痰和呼吸的狀況[1-2]，適用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的急性、慢性肺部疾病，手術(shù)后肺部并發(fā)癥和嬰兒呼吸窘迫綜合征?，F(xiàn)已經(jīng)研究證實(shí)，氨溴索能減少自由基的生成、產(chǎn)生抗氧化作用[3-5]；對(duì)慢性阻塞性肺病、支氣管肺炎、毛細(xì)支氣管炎均有較好的效果[6-12]；對(duì)肺組織損傷有保護(hù)作用[13-15]；與多種抗生素有協(xié)同作用[16-18]。全腸外營(yíng)養(yǎng)液（total parenteral nutrition,TPN）是將人體所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按一定比例混合的液體制劑，近年來已經(jīng)成為臨床廣泛采用的有效改善患者營(yíng)養(yǎng)狀況的一種治療方法，是危重患者搶救中不可缺少藥物治療。TPN 主要用于手術(shù)前后不能進(jìn)食等無法經(jīng)口進(jìn)食的患者，通過靜脈輸注提供每天所需的能量和營(yíng)養(yǎng)成分，補(bǔ)足丟失的體液，維持心血管系統(tǒng)的通路進(jìn)行藥物治療[19]。在臨床應(yīng)用當(dāng)中，如果能夠?qū)PN 作為鹽酸氨溴索的載體，可以避免二次輸液和減少輸入的液體總量。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床TPN 配方及用量，加入鹽酸氨溴索后，用高效液相色譜法測(cè)定24 h 內(nèi)鹽酸氨溴索在TPN 中的含量變化，以確定其在TPN 中的配伍穩(wěn)定性，為臨床用藥安全提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器 1100 高效液相色譜工作系統(tǒng)（美國(guó)Agilent 公司）；TGL-16G 高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；FA2204B 電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑 鹽酸氨溴索對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100599-201604）；鹽酸氨溴索注射液（Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co.，批號(hào)：825297，規(guī)格：2 mL：15 mg）；10%葡萄糖注射液（華仁藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：F1803008，規(guī)格：500 mL：50 g）；復(fù)方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）（費(fèi)森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號(hào)：80MC049，規(guī)格：250 mL：21.25 g）；中/長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液（C8-24Ve）（貝朗醫(yī)療有限公司分裝，批號(hào)：183248081，規(guī)格：250 mL）；濃氯化鈉注射液（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號(hào)：WL171207，規(guī)格：10 mL：1 g）；多種微量元素注射液（Ⅱ）（費(fèi)森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號(hào)：80LM561，規(guī)格：10 mL)；硫酸鎂注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1610251，規(guī)格：10 mL：2.5 g)；葡萄糖酸鈣注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1804021，規(guī)格：10 mL：1 g)；注射用水溶性維生素（費(fèi)森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號(hào)：80LD558，規(guī)格：467 mg）；脂溶性維生素注射液（Ⅱ）（費(fèi)森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號(hào)：80MC50901，規(guī)格：10 mL）；10%氯化鉀注射液（中國(guó)大冢制藥有限公司，批號(hào)：0811152，規(guī)格：10mL：1.0 g）；50%葡萄糖注射液（中國(guó)大冢制藥有限公司，批號(hào)：8B90J3，規(guī)格：20 mL：10 g）；胰島素注射液（江蘇萬邦生化醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號(hào)：21803211，規(guī)格：10 mL：400 U）；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基（生物梅里埃公司，批號(hào)：1006939510，規(guī)格：90 mm）。

1.3 色譜條件 色譜柱：TIANHE?Kromasil C18色譜柱（200mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈：0.001 2 mol/L的磷酸二氫銨溶液（60：40；pH=6.98）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：248 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。

1.4 溶液的制備

1.4.1 鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取鹽酸氨溴索對(duì)照品20 mg，置于10 mL 的量瓶中，用流動(dòng)相稀釋定容，即得2 mg/mL 的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液，置4℃冰箱保存。

1.4.2 配伍液的制備 （1）空白營(yíng)養(yǎng)液：按無菌操作規(guī)程配制。將濃氯化鈉注射液50 mL、10%氯化鉀注射液30 mL、硫酸鎂注射液5 mL、葡萄糖酸鈣注射液10 mL、多種微量元素注射液（Ⅱ）10 mL 加入500 mL 復(fù)方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）中；抽取胰島素注射液0.6 mL、50%葡萄糖注射液200 mL 加入10%葡萄糖注射液1 000 mL 中；取脂溶性維生素注射液10 mL，將1 支注射用水溶性維生素溶解后加入250 mL 脂肪乳中；將含電解質(zhì)和微量元素的復(fù)方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）、含胰島素的葡萄糖注射液及含維生素的脂肪乳注射液注入營(yíng)養(yǎng)袋中，混勻，即得。（2）含鹽酸氨溴索營(yíng)養(yǎng)液：取鹽酸氨溴索注射液2 支加入10%葡萄糖注射液1 000 mL 中，其余溶液的配制方法同空白營(yíng)養(yǎng)液，即得。

1.5 樣品預(yù)處理 精密移取1 mL 的樣品溶液于5 mL 的量瓶中，用流動(dòng)相定容，搖勻后，3 000 r/min離心5 min，取上清液。

1.6 專屬性試驗(yàn) 取“1.4.1 項(xiàng)下”配制的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋10 倍，得200 μg/mL的對(duì)照液。分別吸取200 μg/mL 的對(duì)照液、空白營(yíng)養(yǎng)液及配伍液各 20 μL 進(jìn)樣，按“1.3 色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定并記錄色譜圖。

1.7 線性關(guān)系考察 精密移取1 mL 的“1.4.1 項(xiàng)下”的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液于5 mL 的量瓶中，用流動(dòng)相定容，倍半稀釋，配成濃度分別為400、200、100、50、25、12.5、6.25 μg/mL 的系列對(duì)照液，按“1.3 色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸。

1.8 精密度試驗(yàn) 取低、中、高3 種濃度的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 mL，按“1.3 色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，于同一天內(nèi)每個(gè)濃度進(jìn)樣6 次及連續(xù)6 d每個(gè)濃度進(jìn)樣1 次，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），以考察日內(nèi)、日間精密度。

1.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“1.4.1 項(xiàng)下”的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別于 0、2、4、6、8、10、24 h 時(shí)進(jìn)樣，按“1.3 色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.10 重復(fù)性試驗(yàn) 按“1.4.2 項(xiàng)下”方法，平行配制配伍液6 份，分別按“1.5 樣品預(yù)處理”項(xiàng)下方法處理，按“1.3 色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.11 回收率試驗(yàn) 取低、中、高3 種濃度的鹽酸氨溴索對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 mL，分別按“1.5 樣品預(yù)處理”項(xiàng)下方法處理，按“1.3 色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度進(jìn)樣5 次，記錄峰面積，計(jì)算回收率。

1.12 配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)

1.12.1 微生物限度檢查 取現(xiàn)配的配伍液，分別于 0、2、4、6、8、10、24 h 時(shí)用一次性無菌接種環(huán)取樣，采用棋盤劃線法接種于血瓊脂培養(yǎng)基上，置于35℃溫箱中孵育過夜，肉眼觀察是否有菌落發(fā)育[20]。

1.12.2 外觀變化 取現(xiàn)配的空白營(yíng)養(yǎng)液及配伍液，在室溫下放置，分別于 0、2、4、6、8、10、24 h 時(shí)對(duì)外觀進(jìn)行比對(duì)觀察，是否均勻，有無分層、渾濁、沉淀等變化。

1.12.3 相對(duì)百分含量變化 取現(xiàn)配的配伍液，在室溫下放置，分別于 0、2、4、6、8、10、24 h 時(shí)采樣，按“1.5 樣品預(yù)處理”項(xiàng)下方法對(duì)樣品進(jìn)行處理，按“1.3色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品進(jìn)樣5 次，記錄峰面積，以0 h 時(shí)的含量為100%，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)鹽酸氨溴索的相對(duì)百分含量。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗(yàn)色譜圖 在“1.3 色譜條件”下，鹽酸氨溴索與空白營(yíng)養(yǎng)液之間可明顯分離，互不干擾，表明采用該色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)專屬性良好，見圖1。

圖1 專屬性試驗(yàn)Fig 1 Specific test

2.2 線性關(guān)系考察結(jié)果 以峰面積（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程為A=5.7667C-10.467（r=0.999 9，n=5）。結(jié)果表明，鹽酸氨溴索濃度在6.25～400 μg/mL 的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)結(jié)果 日內(nèi)精密度試驗(yàn)的RSD 分別為0.40%，0.42%和0.38%（n=6）；日間精密度試驗(yàn)的 RSD 分別為 1.20%，1.19%和 1.22%（n=6），表明精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD 為0.60%，表明鹽酸氨溴索在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 重復(fù)性試驗(yàn)的 RSD 為0.63%，表明本法的重復(fù)性良好。

2.6 回收率試驗(yàn)結(jié)果 回收率試驗(yàn)結(jié)果見表1。結(jié)果表明回收率符合要求。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）Tab 1 Results of recovery test（n=5）

2.7 配伍穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7.1 微生物限度檢查 配伍液在配制24 h 內(nèi)無菌落發(fā)育，符合靜脈用藥標(biāo)準(zhǔn)。

2.7.2 外觀變化 在室溫條件下，空白溶液及配伍液在配制24 h 內(nèi)的外觀均為乳白色液體，未見分層、渾濁和沉淀等變化。

2.7.3 相對(duì)百分含量變化 在室溫條件下，配制24 h 內(nèi)配伍液中鹽酸氨溴索的含量未發(fā)生變化（RSD 為 0.66%），見表 2。

表2 配伍液中鹽酸氨溴索的含量變化（n=5）Tab 2 Content change of ambroxol hydrochloride in the mixture（n=5）

3 討論

鹽酸氨溴索廣泛應(yīng)用于呼吸道疾病的預(yù)防和治療。一些老年患者因肝腎功能不全、心力衰竭等心肺疾病的原因需要控制輸液量，這些患者如伴有肺部疾病需聯(lián)用鹽酸氨溴索與TPN，分別靜脈滴注鹽酸氨溴索和TPN 會(huì)加大輸入體內(nèi)的液體總量并且需要二次輸液，如果能在TPN 中加入鹽酸氨溴索則可解決這一問題。

本研究對(duì)HPLC 法測(cè)定鹽酸氨溴索在TPN 中含量的方法學(xué)進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，鹽酸氨溴索濃度在6.25～400 μg/mL 的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，日內(nèi)精密度和日間精密度良好，回收率符合要求，故該法用于測(cè)定鹽酸氨溴索在TPN 中的含量專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

TPN 中加入鹽酸氨溴索后，在室溫下保存24 h，無菌落發(fā)育，外觀無顯著性變化，且鹽酸氨溴索在TPN 中的含量也未發(fā)生變化，即24 h 內(nèi)室溫條件下鹽酸氨溴索注射液在TPN 中穩(wěn)定。將二者配伍使用，可以減少輸液的次數(shù)和液體的用量，能減輕患者的心臟負(fù)擔(dān)同時(shí)優(yōu)化臨床治療，為臨床使用提供了數(shù)據(jù)支持。