王瑾茜　胡國(guó)恒　藺曉源　劉侃

〔摘要〕 目的 探討益氣活血方對(duì)氣虛血瘀型冠心病模型大鼠的影響。方法 32只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、益氣活血方組和芪參益氣滴丸組，每組8只。除空白組外，各組均采用“游泳力竭+控制飲食+結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支”制備病證結(jié)合氣虛血瘀型冠心病動(dòng)物模型，時(shí)間均為11 d。造模結(jié)束后，分別灌胃予以相應(yīng)干預(yù)14 d。采集大鼠心電圖，進(jìn)行Morris 水迷宮、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)并HE染色、Masson染色，并采用ELISA檢測(cè)血漿纖溶酶原激活物抑制劑-1（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）、血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、組織型纖溶酶原激活劑（tissue-type plasminogenactivator，t-PA）的含量。結(jié)果 與空白組比較，模型組心電圖ST段抬高;Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)潛伏期延長(zhǎng)（P<0.01），穿臺(tái)次數(shù)顯著減少（P<0.01）;曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平得分、垂直得分減少（P<0.05），中心活動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)（P<0.05），角落活動(dòng)時(shí)間、周邊活動(dòng)時(shí)間均減少，焦慮程度降低（P<0.05或P<0.01）;心肌細(xì)胞排列較紊亂，在梗死灶周圍出現(xiàn)核破裂，血漿中PAI-1、vWF水平明顯增高（P<0.05或P<0.01），t-PA水平明顯降低（P<0.05）。與模型組比較，益氣活血方組心電圖ST段恢復(fù)正常;Morris水迷宮潛伏期顯著縮短（P<0.01），穿臺(tái)次數(shù)顯著增加（P<0.01）;曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中心活動(dòng)時(shí)間減少（P<0.05），角落活動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)（P<0.05），焦慮程度增高（P<0.05）;梗死灶周圍心肌細(xì)胞排列整齊，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)降低（P<0.05）;血漿中PAI-1、vWF水平均降低（P<0.05或P<0.01），t-PA水平增高（P<0.05）。結(jié)論 病證結(jié)合動(dòng)物模型更能滿足中西醫(yī)結(jié)合研究的需要;益氣活血方能有效修復(fù)氣虛血瘀型冠心病模型大鼠心肌細(xì)胞損傷并改善記憶力減退、健忘、疲勞及反應(yīng)遲鈍的癥狀，且改善高凝狀態(tài)的機(jī)制與調(diào)節(jié)vWF、PAI-1、t-PA水平有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 益氣活血方;氣虛血瘀;冠心病;記憶能力;血漿纖溶酶原激活物抑制劑;血管性假血友病因子;組織型纖溶酶原激活劑

〔中圖分類號(hào)〕R285.5;R256.22? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.05.004

〔Abstract〕 Objective To explore the effects of Yiqi Huoxue Formula on the model rats of coronary heart disease with Qi deficiency and blood stasis. Methods A total of 32 SD rats were randomly divided into a blank group， a model group， a Yiqi Huoxue Formula group and a Qishen Yiqi dropping pill group， with 8 rats in each group. Except for the blank group， each group used "swimming exhaustion + diet control + ligation of left anterior descending branch of coronary artery" to prepare the animal model of coronary heart disease combined with Qi deficiency and blood stasis syndrome， and the duration was 11 days. At the end of modeling， the drugs were given by gavage for 14 days. ECG of rats were obtained. Morris water maze， open field test， HE staining and Masson staining were performed. The contents of plasminogen activator inhibitor （PAI-1）， von Willebrand factor （vWF）， tissue plasminogen activator （t-PA） were measured by ELISA. Results Compared with the blank group， ST segment of ECG in the model group was elevated; in the Morris water maze experiment， the latency was prolonged （P<0.01）， and the number of platform penetration was significantly shortened （P<0.01）; For the open field experiment， the horizontal score and vertical score were decreased （P<0.05）， and the central activity time was prolonged （P<0.05）. The corner activity time， the peripheral activity time， and the degree of anxiety were decreased （P<0.05 or P<0.01）; the arrangement of myocardial cells was more disordered， with nuclear rupture around the infarct. In the plasma， the expression of PAI-1， vWF were significantly increased （P<0.05 or P<0.01） and t-PA was decreased （P<0.05）. Compared with the model group， ST segment of ECG in Yiqi Huoxue Formula group returned to normal， and the latency of Morris water maze was significantly shortened （P<0.01）. The times of platform penetration was significantly prolonged （P<0.01）， and the central activity time of open field experiment was decreased （P<0.05）. The activity time of corner was prolonged （P<0.05）， and the anxiety degree was increased （P<0.05）. The arrangement of myocardial cells around the infarct was orderly， and the apoptosis index of myocardial cells was decreased （P<0.05）. The PAI-1 and vWF levels in plasma were decreased （P<0.05 or P<0.01）. The level of t-PA increased （P<0.05）. Conclusion The animal model of the combination of disease and syndrome can better meet the needs of the study of the combination of traditional Chinese and western medicine. Yiqi Huoxue Formula can effectively repair the myocardial cell injury of the model of coronary heart disease of Qi deficiency and blood stasis， improve the symptoms of memory loss， forgetfulness， fatigue and slow response， and the mechanism of improving the hypercoagulable state is related to the regulation of vWF， PAI-1 and t-PA levels.

〔Keywords〕 Yiqi Huoxue Formula; Qi deficiency and blood stasis; coronary heart disease; memory ability; plasminogen activator inhibitor; von Willebrand factor; tissue plasminogen activator

冠心?。╟oronary artery heart disease， CHD）是指因冠狀動(dòng)脈阻塞等原因?qū)е滦呐K的血液灌注減少，從而引起心肌缺血缺氧、能量代謝失常的一種病理狀態(tài)[1]。世界衛(wèi)生組織WHO最新報(bào)道，因心血管疾病引發(fā)的死亡率占全球死亡人數(shù)的30%[2]，CHD在中醫(yī)學(xué)歸屬“胸痹”“心痛”“真心痛”等的范疇，氣虛血瘀證為CHD最常見證型[3]。益氣活血方是湖南省名老中醫(yī)胡國(guó)恒教授的經(jīng)驗(yàn)方，臨床治療CHD療效顯著[4]。本研究中，我們采用“游泳力竭+控制飲食+結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支”制備氣虛血瘀型CHD病證結(jié)合動(dòng)物模型，觀察了益氣活血方對(duì)模型大鼠行為學(xué)、心電圖、病理形態(tài)學(xué)、血漿纖溶酶原激活物抑制劑-1（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）、血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、組織型纖溶酶原激活劑（tissue-type plasminogenactivator，t-PA）水平的影響，以期為益氣活血方治療氣虛血瘀型CHD提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用SPF級(jí)健康雄性SD大鼠，8周齡，體質(zhì)量（280±20） g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（湘）2016-0003，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物房，使用許可證號(hào)為SYXK（湘）2015-0003。

1.2? 藥物與主要試劑

益氣活血方由黃芪30 g，當(dāng)歸12 g，川芎15 g，丹參15 g組成，中藥飲片購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院。取益氣活血方加入處方劑量 10倍水，浸泡30 min后，沸水文火慢煎2次，每次40 min，合并2次藥液，過濾，濃縮至1.6 g/mL，4 ℃冰箱保存;芪參益氣滴丸（天津天力士制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：150208）。

水合氯醛（上海聯(lián)碩生物科技有限公司，批號(hào)：032819）;DAB顯色液（美國(guó)Sigma技術(shù)有限公司，批號(hào)：46658）;注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號(hào)：869037）;PAI-1 ELISA測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：ab142349）、vWF ELISA測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：ab108918）、? t-PA ELISA測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：ab192151）均購(gòu)自于上海艾博抗科技有限公司，蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒（批號(hào)：20150420）、Masson三色法染色試劑盒（批號(hào)：20150424）均購(gòu)自于上海歌凡生物科技有限公司。

1.3? 主要儀器

酶標(biāo)儀（普天新橋技術(shù)有限公司，北京）;ALC-V10型呼吸機(jī)（奧爾科特生物技術(shù)有限公司，上海）;TP-2200B型電子天平（湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開發(fā)有限公司，長(zhǎng)沙）;Z32HK型臺(tái)式冷凍離心機(jī)（Microsystems有限公司，美國(guó)）;XG1D型脈沖真空管滅菌鍋（新華技術(shù)有限公司，山東）;101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（永光明醫(yī)療儀器有限公司，北京）;BL-420型心電圖、Morris 水迷宮（泰盟機(jī)械有限公司，成都）;熒光顯微鏡、RM2125RTS型手動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、BOND-MAX型全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)（徠卡生物有限公司，德國(guó)）。

1.4? 模型制作與分組干預(yù)

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，根據(jù)體質(zhì)量按完全隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為4組：空白組、模型組、益氣活血方組、芪參益氣滴丸組，每組8只。其中模型組、益氣活血方組、芪參益氣滴丸組參照文獻(xiàn)[5]方法制備氣虛血瘀型冠心病動(dòng)物模型：在實(shí)驗(yàn)第1～10天進(jìn)行力竭游泳造模，每次以大鼠沉入水中10 s，以頭不能露出水平面為準(zhǔn)。頻率為1次/d，游泳后撈出，室溫放置讓其水分自然蒸發(fā)。力竭游泳造模同時(shí)開始控制攝食量，大鼠每日攝入正常食量的1/2 飼料，連續(xù)10 d。實(shí)驗(yàn)第11天，模型組、益氣活血方組、芪參益氣滴丸組進(jìn)行高位結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支手術(shù)。具體方法如下：左前胸去毛，順肋間隙方向于胸骨左旁第3～4肋間切開皮膚，長(zhǎng)約1 cm，切開心包，在左心耳前下方用零號(hào)醫(yī)用縫合線結(jié)扎血管縫針，記錄標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖。造模成功標(biāo)志：以心電圖ST段弓背向抬高的改變及左室前壁向外膨脹發(fā)紺、搏動(dòng)減弱為結(jié)扎成功標(biāo)志。術(shù)后每只腹腔注射青霉素8萬U，連續(xù)3 d以抗感染，手術(shù)1 d后，益氣活血方組給予益氣活血方6.48 g/kg灌胃（以70 kg成人生藥劑量72 g/kg換算），芪參益氣滴丸組給予芪參益氣滴丸灌胃0.14 g/kg（以70 kg成人生藥劑量1.5 g/kg換算），空白組、模型組予以等體積蒸餾水灌胃。1次/d，連續(xù)灌胃14 d。

1.5? 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1? 心電圖采集? 以冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎術(shù)后第3天上午8：00為統(tǒng)一觀察時(shí)間點(diǎn)，觀察各組大鼠心電圖變化。

1.5.2? Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)? 給藥第10天開始，將各組大鼠從平臺(tái)正對(duì)象限處頭朝池壁放入水中，自由尋找平臺(tái)，若90 s后不能找到平臺(tái)，引導(dǎo)至平臺(tái)停留15 s。連續(xù)訓(xùn)練4 d，每天1次，訓(xùn)練完成后，第5天上午于采集心電圖前開始正式實(shí)驗(yàn)。自動(dòng)攝像系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)記錄每只動(dòng)物進(jìn)入隱藏平臺(tái)所在象限的時(shí)間（潛伏期）及穿臺(tái)次數(shù)。整個(gè)測(cè)試過程保持絕對(duì)安靜。

1.5.3? 曠場(chǎng)分析? 在大鼠末次給藥1 h后進(jìn)行觀察，箱內(nèi)共有5×5大格，規(guī)定中間9格為中心區(qū)域，角落的4格為角落區(qū)域，其余12格為周邊區(qū)域。記錄5 min之內(nèi)各組大鼠在不同區(qū)域的活動(dòng)時(shí)間。計(jì)算水平得分：以大鼠后肢跨入1格為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，記錄大鼠水平穿越格子的次數(shù);垂直得分：以大鼠雙前肢離地為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，記錄大鼠站立的次數(shù)。并計(jì)算焦慮程度。

焦慮程度=（角落活動(dòng)時(shí)間+周邊活動(dòng)時(shí)間）/中心活動(dòng)時(shí)間

1.5.4? HE染色? 各組大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)完成后，用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血后迅速剖開胸腔，取心肌梗死灶組織塊，直徑約0.3 cm左右，4%多聚甲醛中固定，以不同濃度的酒精脫水，二甲苯透明，將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，浸蠟，包埋，切成5 μm厚薄片，以二甲苯脫蠟，入100%、95%、85%、70%酒精，經(jīng)蒸餾水轉(zhuǎn)入染液，蘇木精染液染色，水洗玻片上多余染液，伊紅染液染色5 min。以樹膠封片。在熒光顯微鏡高倍（×40）視野下拍攝，每組隨機(jī)選擇5張，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野。

1.5.5? Masson染色? 各組大鼠取心肌梗死灶組織塊，脫水透明，浸蠟包埋，切成5 μm厚薄片，在每一個(gè)標(biāo)本中各取已制備的薄片1張，應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶所介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記法進(jìn)行標(biāo)記心肌凋亡細(xì)胞核中DNA3-OH的末端，并采用原位熒光法對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記與顯示。在熒光顯微鏡高倍（×40）視野下觀察每張切片標(biāo)本，每組隨機(jī)選擇5張，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，并計(jì)算凋亡指數(shù)。

凋亡指數(shù)=凋亡心肌細(xì)胞核數(shù)/正常心肌細(xì)胞核數(shù)

1.5.6? ELISA法檢測(cè)血漿PAI-1、vWF、t-PA水平? 各組大鼠腹主動(dòng)脈取血，3 mL/只，按1∶1比例加入等體積0.05 mol的HCL，將PAI-1、vWF、t-PA抗原用包被液稀釋至0.5～20 ？滋g/mL，37 ℃恒溫箱孵育4 h，洗板后用5%小牛血清封閉40 min，洗滌后按順序加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液處理過的待檢樣品及陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，37 ℃恒溫箱孵育1 h，洗滌后加入TMB底物溶液避光孵育5 min，終止液終止反應(yīng)后，于20 min內(nèi)放入酶標(biāo)儀檢測(cè)各組光密度（OD）值。

1.6? 統(tǒng)計(jì)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以“x±s”表示，兩組比較，如果滿足正態(tài)及方差齊性，采用成組t檢驗(yàn)，不滿足者采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 益氣活血方對(duì)模型大鼠心電圖的影響

空白組心電圖正常，模型組出現(xiàn)ST段抬高，呈“弓背向上”抬高，為心肌梗死特異性指標(biāo)之一，且QRS波抬高、增寬。益氣活血方組呈T波低平改變，芪參益氣滴丸組呈現(xiàn)T波倒置而ST-T無明顯抬高的心電圖。見圖1。

2.2? Morris水迷宮

與空白組比較，模型組潛伏期延長(zhǎng)（P<0.01），穿臺(tái)次數(shù)顯著減少（P<0.01）;與模型組比較，益氣活血方組、芪參益氣滴丸組潛伏期顯著縮短（P<0.01），穿臺(tái)次數(shù)顯著增加（P<0.01）;而益氣活血方組與芪參益氣滴丸組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1，圖2。

2.3? 曠場(chǎng)分析

與空白組比較，模型組水平得分、垂直得分減少（P<0.05），中心活動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)（P<0.05），角落活動(dòng)時(shí)間、周邊活動(dòng)時(shí)間減少，焦慮程度降低（P<0.05或P<0.01）;與模型組比較，益氣活血方組、芪參益氣滴丸組中心活動(dòng)時(shí)間減少（P<0.05），角落活動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)（P<0.05），焦慮程度增高（P<0.05）。見表2。

2.4? 各組大鼠心肌HE染色比較

空白組HE染色可見心肌細(xì)胞整齊、致密、均勻排列，無核固縮甚至碎裂溶解。模型組心肌細(xì)胞排列較紊亂，在梗死灶周圍出現(xiàn)核破裂;心肌細(xì)胞肥大且間隙不清，心肌纖維走行較為紊亂，間質(zhì)可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，心肌間質(zhì)出現(xiàn)。益氣活血方組心肌細(xì)胞排列整齊，在纖維組織中出現(xiàn)核固縮，周圍血管有明顯的藍(lán)色膠原纖維替代心肌組織且排列整齊;芪參益氣滴丸組可見少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)無充血。見圖3。

2.5? 各組大鼠心肌Masson染色比較

Masson染色正常細(xì)胞核染色呈藍(lán)色，肌纖維呈紅色，膠原纖維染色藍(lán)色或綠色。染色涂片可發(fā)現(xiàn)空白組細(xì)胞核分布均勻、輪廓清楚，肌纖維呈紅色且排列整齊;模型組細(xì)胞核排列紊亂、分布不均，肌纖維染色呈深淺不一的黃褐色，已壞死心肌結(jié)構(gòu)模糊不清，可見梗死區(qū)心肌組織膠原細(xì)胞增多;益氣活血方組細(xì)胞核分布均勻，肌纖維呈深褐色且密集排列;芪參益氣滴丸組細(xì)胞核排列整齊，可見梗死區(qū)心肌組織膠原細(xì)胞降解痕跡。見圖4。

與空白組相比，模型組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)增大（P<0.05）;與模型組相比，益氣活血方組、芪參益氣滴丸組細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著減小（P<0.05或P<0.01）。益氣活血方組與芪參益氣滴丸組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表3。

2.6? 益氣活血方對(duì)模型大鼠血漿PAI-1、vWF、t-PA水平的影響

模型組與空白組比較，血漿中PAI-1、vWF表達(dá)明顯增高（P<0.05或P<0.01）、t-PA表達(dá)明顯降低（P<0.05）。經(jīng)過給藥后，益氣活血方組、芪參益氣滴丸組PAI-1、vWF表達(dá)水平降低，而t-PA表達(dá)水平升高，與模型組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。而益氣活血方組與芪參益氣滴丸組比較差異不顯著（P>0.05）。見表4。

3 討論

CHD氣虛血瘀證的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，西醫(yī)主要采用冠狀動(dòng)脈介入治療（percutaneous coronary intervention，PCI）或冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)（coronary artery bypass grafting，CABG），但在六個(gè)月的周期之內(nèi)仍有30%的狹窄率[6]。導(dǎo)師胡國(guó)恒教授臨床使用益氣活血方療效顯著。益氣活血方全方由黃芪、當(dāng)歸、丹參、川芎四藥組成，方中重用黃芪，溫陽(yáng)補(bǔ)氣，氣盛則血行，為君藥;當(dāng)歸“破惡血，養(yǎng)新血”，為臣藥;丹參“破宿血，補(bǔ)新生血”;川芎“血閉者能通，為血中氣藥”。諸藥相互為用，以奏補(bǔ)氣活血之效。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用益氣活血方可促進(jìn)心肌梗死模型大鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、胰島素生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor，IGF）等的表達(dá)，并可提高內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員、增殖、遷移及黏附能力，從而達(dá)到促進(jìn)心肌缺血區(qū)心肌血管新生的目的，進(jìn)而闡明了益氣活血方促血管新生的作用機(jī)制[7-11]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，沿用廖慧玲課題組造模方法（游泳力竭+控制飲食+結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支）復(fù)制氣虛血瘀型CHD病證結(jié)合模型，通過觀察心電圖、動(dòng)物行為學(xué)、心肌病理形態(tài)學(xué)改變以及血漿中PAI-1、t-PA和vWF表達(dá)水平，進(jìn)一步探討益氣活血方對(duì)氣虛血瘀型CHD模型大鼠的影響。

本研究結(jié)果表明，模型組出現(xiàn)ST段抬高，呈“弓背向上”抬高，為心肌梗死特異性指標(biāo)之一。益氣活血方干預(yù)后，心電圖由T波低平取代ST段抬高表現(xiàn)，提示進(jìn)入恢復(fù)期。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)動(dòng)物記憶水平的重要工具[12]，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組潛伏期均延長(zhǎng)，穿臺(tái)次數(shù)均顯著減少，說明氣虛血瘀型CHD病證結(jié)合模型大鼠可有記憶力減退、健忘表現(xiàn);與模型組比較，益氣活血方組潛伏期顯著縮短，穿臺(tái)次數(shù)顯著增加，說明益氣活血方能改善記憶力減退、健忘癥狀。曠場(chǎng)分析檢測(cè)則主要反映動(dòng)物對(duì)新環(huán)境的探索以及伴隨的情緒變化[13]，在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)模型組中央格時(shí)間延長(zhǎng)、角落活動(dòng)時(shí)間減少、探索行為減少，反映了模型組大鼠對(duì)新環(huán)境的認(rèn)知能力差，對(duì)未知危險(xiǎn)的感知能力下降。益氣活血方干預(yù)后大鼠中心活動(dòng)時(shí)間減少，焦慮程度增高，說明益氣活血方可改善大鼠體力疲勞，反應(yīng)遲鈍。HE染色觀察益氣活血方干預(yù)后心肌細(xì)胞排列整齊，Masson染色觀察發(fā)現(xiàn)益氣活血方組細(xì)胞核分布均勻，肌纖維呈深褐色且密集排列。

vWF被視為內(nèi)皮損傷的標(biāo)記，當(dāng)血液黏度升高或凝血酶異常時(shí)，vWF釋放入血導(dǎo)致血液中vWF異常增高[14];t-PA是體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的生理性激動(dòng)劑，PAI-1是t-PA的抑制劑，是纖溶系統(tǒng)主要的活性抑制物，具有清除纖維蛋白以及溶解血栓的作用[15]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明益氣活血方能提高t-PA的表達(dá)，并降低PAI-1和vWF的表達(dá)，提示益氣活血方能改善血液高凝狀態(tài)。

綜上所述，我們采用廖慧玲課題組造模方法復(fù)制氣虛血瘀型CHD病證結(jié)合模型，造模后通過觀察心電圖、動(dòng)物行為學(xué)、心肌病理形態(tài)學(xué)改變以及血漿中PAI-1、t-PA和vWF表達(dá)水平來評(píng)價(jià)模型，從結(jié)果看，采用這種病因結(jié)合病理多因素復(fù)合制作氣虛血瘀型CHD動(dòng)物模型確實(shí)可行，同時(shí)具備中醫(yī)的證候特征和西醫(yī)的病理學(xué)改變，更能滿足辨證論治原則下開展中醫(yī)藥研究的需要。益氣活血方能使氣虛血瘀型CHD模型大鼠急性期心電圖結(jié)果好轉(zhuǎn)，改善心肌細(xì)胞損傷，記憶力減退、健忘及疲勞、反應(yīng)遲鈍的癥狀，并改善血液高凝狀態(tài)，其機(jī)制可能與抑制vWF、PAI-1及促進(jìn)t-PA釋放有關(guān)。

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（本文編輯? 楊? 瑛）