■魏佳鈺 魏時來* 馬 娟 馬 彪 董炳旭 豆黑龍

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅蘭州730070；2.甘肅省康樂縣新華牧業(yè)有限責(zé)任公司，甘肅康樂731500）

隨著現(xiàn)代社會的快速發(fā)展，人們接觸到的一些食品添加劑、輻射、農(nóng)藥、酒精等以及吸入的少量氧氣，都會使人體的氧自由基增多，而過多的氧自由基會使細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸變成另一種對人體有害的自由基——脂質(zhì)過氧化物[1]，脂質(zhì)過氧化物又會產(chǎn)生新的自由基，新的自由基進(jìn)而危害其他細(xì)胞膜，這樣的惡性循環(huán)會使機(jī)體內(nèi)的氧自由基不斷增多，從而影響人體健康。谷胱甘肽過氧化物酶是人體內(nèi)抗氧自由基最重要的一種酶，而硒作為谷胱甘肽過氧化物酶活性中心的重要組成成分，當(dāng)它缺乏時，其酶的活性就會下降，抗氧化能力減弱，無法發(fā)揮清除氧自由基的作用，各種疾病就會隨之而產(chǎn)生。硒屬于微量營養(yǎng)元素，在人和動物體內(nèi)具有重要的抗氧化作用。硒在食物、飼料和土壤的分布極其不均衡，具有明顯的地域性，全世界有40 多個國家缺硒[2]，我國也在其中，我國有近2/3的地區(qū)缺硒[3]，從東北到西南，分布著一條廣闊的缺硒地帶，甘肅省在內(nèi)的很多省份位列其中，由于環(huán)境和土壤缺硒，致使該地區(qū)的動、植物也缺硒。人體內(nèi)的硒主要來源于食物，故該地區(qū)的人也會缺硒，缺乏者會患有克山病、白內(nèi)障、心腦血管、癌癥等疾病[4]。因此，關(guān)于硒的作用機(jī)理與合理補硒已然成為了研究熱點。隨著補硒產(chǎn)品的增多，許多安全問題也隨之而來，因為過度攝入硒，會導(dǎo)致人體硒中毒[5]。目前研發(fā)的富硒產(chǎn)品，主要有富硒茶葉、富硒大米、富硒牛奶等[6-8]。相較于其他富硒產(chǎn)品，雞蛋作為我國傳統(tǒng)且重要的一類食物源，其營養(yǎng)豐富且物美價廉，硒又可通過蛋氨酸整合到雞蛋蛋白中，蛋氨酸硒屬于有機(jī)硒，吸收率比較高，毒性低，且人們每天食入雞蛋的量比較穩(wěn)定，故富硒雞蛋可作為一種良好的補硒產(chǎn)品。家禽飼糧中能夠添加的硒源，主要有無機(jī)硒（亞硒酸鈉）與有機(jī)硒（酵母硒）。近年來，關(guān)于無機(jī)硒與有機(jī)硒在蛋雞飼養(yǎng)試驗中的相關(guān)報道較多，人們發(fā)現(xiàn)，相較于亞硒酸鈉，酵母硒具有更高的吸收率[9-11]、生物活性強(qiáng)[12-13]、毒性低[14-15]與環(huán)境污染小等特點，因此，無機(jī)硒已逐漸被有機(jī)硒所代替，許多國家已禁止在飼料中添加無機(jī)硒[16]。鑒于此，本試驗通過在飼糧中添加不同水平的酵母硒，通過較長時間的飼喂，研究酵母硒在雞蛋中的沉積規(guī)律及對蛋品質(zhì)的影響，為人體安全合理補硒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗地點與試驗雞只

本研究動物試驗選擇在甘肅省康樂縣新華牧業(yè)有限責(zé)任公司雞場進(jìn)行。選用本場生產(chǎn)用299 日齡的正大褐產(chǎn)蛋雞450 只，隨機(jī)分為5 個組，分別為A、B、C、D、E組，每組90只雞，分3個重復(fù)（如A1、A2、A3等），每個重復(fù)30 只雞。試驗雞位于雞舍中間，雞籠為三層階梯式，每個重復(fù)10個籠，每籠3只雞，為便于操作，選擇中、下兩層，每層5個籠。

1.2 試驗設(shè)計

試驗設(shè)5 個組：A 組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，低硒，水平為0.30 mg/kg（硒源為亞硒酸鈉）；B、C、D、E組飼喂試驗飼糧，B 組中硒，硒水平為0.80 mg/kg（在基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上添加酵母硒0.50 mg/kg）；C 組高硒，硒水平為1.30 mg/kg（在基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上添加酵母硒1.00 mg/kg）；D 組在C 組基礎(chǔ)上，添加中草藥0.2%（當(dāng)歸∶黨參=1∶1）；E 組在前期（0～30 d）試驗飼糧同C 組，后期（31～170 d），將A 組料和C 組料以7 d 為周期，交替投喂，即從第31 d 開始的第1 周，先投喂C 料，次周換至A料，以此交替飼喂。

蛋樣的采集：在試驗第30、72、121、170 d，采集蛋樣，于每個重復(fù)的中、下兩層，分別隨機(jī)撿取大小中等、色澤正常的雞蛋3 枚，共6 枚，用于測定蛋硒含量和蛋品質(zhì)等指標(biāo)。

1.3 試驗用硒源與基礎(chǔ)飼糧

試驗用酵母硒，購自山東某公司。硒含量為2 000 mg/kg?；A(chǔ)飼糧硒含量為0.3 mg/kg，屬無機(jī)硒亞硒酸鈉，由某公司提供?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 測定用儀器與試劑

儀器：熒光分光光度計（F-380），蛋形指數(shù)測定器，卵殼強(qiáng)度計，蛋品測定臺，比色扇，蛋殼厚度測定計，電熱板，pH計，水浴鍋。

試劑：硝酸，高氯酸，鹽酸，氨水，EDTA 混合液[EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）溶液（0.2 mol/l）、鹽酸羥胺溶液（100 g/l）、甲酚紅指示劑（0.2 mol/l）]，DAN（2，3-二氨基萘）試劑（1 g/l）、環(huán)己烷。

1.4.2 蛋樣處理與蛋硒含量測定

蛋樣處理：分別于試驗第30、72、121、170 d時，對每個重復(fù)的6 枚蛋樣，在測定蛋品質(zhì)后，將蛋內(nèi)容物（蛋黃與蛋清）無損傾入大燒杯，用攪蛋器充分?jǐn)嚢杈鶆蚝螅盅b于多支5 ml的離心管，編號，在-20 ℃冰箱中保存，用于測定全蛋硒的含量。

蛋硒含量測定：采用熒光分光光度法[17]，把蛋內(nèi)容物于室溫解凍后，準(zhǔn)確稱取約2 g（精確至0.001 g）樣品，置于錐形瓶中，加入20 ml 硝酸-高氯酸混合酸（9+1），蓋上瓶塞，室溫消化過夜。次日于電熱板上加熱消化，當(dāng)溶液變?yōu)榍辶翢o色，并伴有白煙產(chǎn)生時，再繼續(xù)加熱消化至剩余體積為2 ml左右。待冷卻后，加入EDTA 混合液20 ml，用氨水溶液及鹽酸溶液調(diào)至淡紅橙色（pH值1.5～2.0），再次冷卻后，在暗室中進(jìn)行后續(xù)操作：加DAN試劑（1 g/l）3 ml，混勻后，置沸水中浴熱5 min，取出冷卻后，加環(huán)己烷3 ml，振搖萃取4 min，將全部溶液移入分液漏斗，待分層后，小心將環(huán)己烷層（上層）用移液槍吸入至帶蓋試管中，用熒光分光光度計測取峰值。

1.4.3 蛋品質(zhì)測定

蛋重：用托盤天平測定。

蛋形指數(shù)：用蛋形指數(shù)測定器，測定蛋長徑、短徑，以長徑/短徑表示。

蛋殼強(qiáng)度：用卵殼強(qiáng)度計測定。

蛋殼厚度：用蛋殼厚度儀測量雞蛋大頭、中間、小頭部位的蛋殼厚度，以均值表示。

蛋黃高度、蛋白高度、血斑、蛋黃色澤：打破蛋后，將蛋黃蛋白小心輕緩傾于蛋品測定臺上，觀察記錄血斑情況，用比色扇比對記錄蛋黃色澤，從間隔相等的3 個位置測定蛋白高度，以均值表示，從最高處測量蛋黃高度。

哈氏單位=100×log（H-1.7×W0.37+7.6）

式中：H——蛋白高度（mm）；

W——蛋重（g）。

1.5 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均用Excel 2007軟件統(tǒng)計整理后，采用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析和Duncan's 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 飼糧硒水平對雞蛋硒含量的影響(見表2)

表2 飼糧中添加不同水平酵母硒對蛋硒含量的影響(μg/g)

由表2可知，在30、72、121、170 d四個試驗期，B、C、D組蛋硒含量均極顯著高于對照組A（P＜0.01）。E組蛋硒含量，在30、121 d時，極顯著高于對照組A（P＜0.01），而在72、170 d時，與對照組A無顯著性差異（P＞0.05）。

B、C、D、E 四個試驗組之間，C、D 組30、72 d 的蛋硒含量均極顯著的高于B組（P＜0.01）。C組在30、72、121 d，與B組無顯著差異（P＞0.05）。D組在121 d時，顯著高于B、C組（P＜0.05）。E組30 d時極顯著高于B組（P＜0.01），而72、121、170 d時，均極顯著低于B、C、D組（P＜0.01）。其他組間均無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 飼糧硒水平對雞蛋品質(zhì)的影響(見表3)

由表3可知，試驗期170 d時，A、B組的蛋重顯著高于C組（P＜0.05）。121 d時，C組的蛋形指數(shù)顯著高于A 組（P＜0.05）。72 d 時，B、C、E 組的蛋殼厚度顯著高于D 組（P＜0.05），C 組的蛋黃高度顯著低于其他各組（P＜0.05），D 組的血斑數(shù)量顯著高于A、C 組（P＜0.05）。30 d 時，D 組的蛋黃色澤顯著高于其他各組（P＜0.05），而B、C、E 組的血斑數(shù)量顯著低于A 組（P＜0.05）。其他組間各指標(biāo)在各試驗期均無顯著差異（P＞0.05）。

表3 飼糧中添加不同水平酵母硒對蛋品質(zhì)的影響

3 討論

3.1 飼糧硒水平對雞蛋硒含量的影響

Pancl等（2011）[18]、Utterback等（2005）[19]研究發(fā)現(xiàn)，添加酵母硒后，可以顯著增加雞蛋中的硒含量（P＜0.05），蛋硒含量隨酵母硒添加量的增加而顯著增加。齊志國等（2019）[20]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.5 mg/kg酵母硒時，可提高北京油雞全蛋硒含量。周建軍等（2018）[21]報道，蛋雞飼糧中添加0.3 mg/kg酵母硒可顯著提高蛋硒含量。本研究表明，在試驗期第30、第72 d，隨著飼糧酵母硒添加水平的提高，雞蛋硒含量也會隨之而明顯增加，這與他們的研究結(jié)論相一致。然而，在試驗期第30、72、121 d，B 組（硒水平0.8 mg/kg，其中酵母硒0.5 mg/kg）和C 組（硒水平1.3 mg/kg，其中酵母硒1.0 mg/kg）雞蛋硒含量，雖然與對照組（硒水平0.3 mg/kg，無機(jī)硒）相比，有明顯升高，但C組的蛋硒含量并未比B 組顯著提高，表明長期投喂高硒飼糧（酵母硒）后，硒在雞蛋中沒有富集效應(yīng)，這也可能是因為產(chǎn)蛋后期（420日齡以后，試驗開始日齡為299），機(jī)體臟器衰弱，對于飼糧高硒向雞蛋的轉(zhuǎn)移能力下降，不能夠繼續(xù)提高所致，具體原因尚未見資料報道，有待進(jìn)一步研究探討。

在30、72、121 d，D 組（硒水平同C 組+0.2%中草藥）蛋硒含量與C 組差異不顯著（P＞0.05），表明在飼糧高硒（硒水平1.3 mg/kg，其中酵母硒1.0 mg/kg）下，添加0.2%中草藥（當(dāng)歸∶黨參=1∶1）對蛋硒含量無顯著影響。此方面也未見文獻(xiàn)報道。

E組的設(shè)置，是為了探討飼糧高硒與低硒交替長期投喂，對蛋硒含量的影響。E 組和C 組試驗雞在試驗初的30 d，都采食C料（硒水平1.3 mg/kg，其中酵母硒1.0 mg/kg）。于30 d 后，E 組開始以7 d 為周期，進(jìn)行A 料與C 料交替飼喂，即30～72 d 期間的末周為A 料，72～121 d期間的末周為C 料，121～170 d期間的末周為A料?？傮w上可以看出，E組交替長期飼喂以后，蛋硒含量隨試驗期的延長而明顯下降。具體分析，試驗期的前30 d，由于一直投喂C 料，蛋硒含量（0.616 μg/g）較高，而第72 d 和第170 d 的蛋硒含量（相應(yīng)為0.319 和0.331 μg/g），明顯降低了，幾乎為前期的一半，與對照組A相近，表明在交替投喂情況下，投喂7 d A料時的蛋硒含量恢復(fù)到了對照組水平。第121 d 的蛋硒為0.542 μg/g，這是在交替投喂情況下，投喂7 d C料時的蛋硒含量，雖然比投喂7 d A料的蛋硒含量有所提高，但并未恢復(fù)到試驗期30 d 的水平，進(jìn)一步表明交替投喂會導(dǎo)致蛋硒含量的下降，這也提示，交替投喂時，飼糧高硒（酵母硒）在雞蛋中更沒有富集效應(yīng)。杜立武（2015）[22]試驗表明，飼喂酵母硒一周后即可達(dá)到富硒雞蛋的要求，黃璇等（2017）[23]發(fā)現(xiàn)，在停喂添加硒飼糧的第9 d，各試驗組蛋硒含量均衰減至接近對照組水平。本研究與以上研究結(jié)果相一致，但未見其他高硒與低硒交替飼用的文獻(xiàn)報道。

硒屬于微量營養(yǎng)元素，在人和動物體內(nèi)具有重要的抗氧化作用。谷胱甘肽過氧化物酶的活性中心是一種含硒氨基酸——硒半胱氨酸[15]，硒直接影響谷胱甘肽過氧化物酶的活性，由于谷胱甘肽過氧化物酶可以清除體內(nèi)多余氧自由基，可降低氧自由基對機(jī)體組織的氧化破壞作用。硒可以保護(hù)細(xì)胞膜，使臟器不受破壞；減少血栓形成，防止心腦血管疾?。灰种撇《镜膹?fù)制和增殖，防癌抗癌；預(yù)防衰老，延長壽命。故中國營養(yǎng)學(xué)會推薦成年人每日硒攝入量應(yīng)為50～250 μg，每天不要超過500 μg[16]。而我國是缺硒大國，土壤含硒量一般只有0.5～2.0 mg/kg，有的地區(qū)更低，平均為0.2 mg/kg[17]，硒由動、植物體進(jìn)入人體時，是達(dá)不到需求標(biāo)準(zhǔn)的。據(jù)調(diào)查，在我國膳食結(jié)構(gòu)中，成年人每日硒攝入量在20～30 μg之間，達(dá)不到健康倡導(dǎo)值，故對于我國人群，進(jìn)行合理、有效的補硒是十分必要的。

從本研究結(jié)果分析，投喂試驗飼糧30 d 以上，飼糧硒中等水平的B 組（硒含量0.8 mg/kg，其中酵母硒0.5 mg/kg）的蛋硒含量為0.567 μg/g，投喂高硒飼糧的C、D組（硒含量1.3 mg/kg，其中酵母硒1.0 mg/kg）的蛋硒含量分別達(dá)到0.616 μg/g 和0.613 μg/g。按照一般雞蛋的重量60 g計算，投喂B組飼糧的一枚雞蛋中含硒約為34 μg，而投喂C、D 組飼糧的一枚雞蛋中含硒約為37 μg，考慮到成年人每日從其他食物攝入硒20～30 μg，那么成人每天額外補充1 枚富硒雞蛋，就可以達(dá)到中國營養(yǎng)學(xué)會推薦硒攝入量（50～250 μg）的下限標(biāo)準(zhǔn)，可滿足人體的基本需求，若成人每天額外補充2～5枚富硒雞蛋，硒攝入總量也在推薦量的范圍之內(nèi)，更未超過500 μg的高限，而不會導(dǎo)致中毒。由此可推出，在本試驗條件下，產(chǎn)蛋雞飼糧中，硒水平達(dá)到0.8～1.3 mg/kg（酵母硒0.5～1.0 mg/kg，亞硒酸鈉硒0.3 mg/kg），所生產(chǎn)的富硒雞蛋，就能夠滿足一般人對硒的需要，可以達(dá)到補硒的目的。從本試驗數(shù)據(jù)可看出，高硒飼糧并未在較長的試驗期內(nèi)導(dǎo)致蛋硒的富集效應(yīng)，故長期投喂高硒飼糧，對人體健康不存在潛在的危險。在飼養(yǎng)試驗期間，各試驗組與對照組相比，雞只均無異常和死亡現(xiàn)象，表明本研究條件下，高硒（硒水平1.3 mg/kg，其中酵母硒1.0 mg/kg）并未導(dǎo)致產(chǎn)蛋雞體出現(xiàn)中毒等不良現(xiàn)象，這從動物健康角度，進(jìn)一步說明了本試驗補硒的安全性。一般情況下，飼料無機(jī)硒（亞硒酸鈉）達(dá)到2～5 mg/kg 時，可出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，另根據(jù)大量文獻(xiàn)報道，酵母硒的毒性是比較小的，屬于補硒的良好來源。

3.2 飼糧硒水平對雞蛋品質(zhì)的影響

蛋重、蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋黃色澤、哈氏單位及蛋黃高度、血斑等是度量蛋品質(zhì)的重要參數(shù)。蛋重是評定蛋等級的重要指標(biāo)，也是品種選育中一項重要性狀；蛋形指數(shù)是描述蛋長短形狀的一個參數(shù)，是觀察雞蛋時最直觀的指標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)為橢圓形；蛋殼強(qiáng)度是指蛋殼耐壓程度的大小，關(guān)系到孵化率以及破殼率；蛋殼厚度與蛋殼強(qiáng)度成正相關(guān)，并與蛋的比重有密切關(guān)系；蛋黃色澤是描述蛋黃顏色的一個參數(shù)，是一項重要的商品指標(biāo)；哈氏單位和蛋黃高度可以衡量蛋的新鮮程度；血斑是排卵時卵巢血管破裂的血滴或輸卵管上皮的脫落物，能一定程度上反映雞只的健康情況。

盧建等（2014）[24]在蛋雞飼糧中添加0.3 mg/kg 的酵母硒與亞硒酸鈉，經(jīng)過56 d的飼喂后，與對照組相比蛋品質(zhì)無顯著差異(P＞0.05)。王順利等(2017)[25]在試驗研究中發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加酵母硒可顯著提高綠殼蛋雞的蛋殼重量、蛋殼強(qiáng)度及蛋殼厚度，但對蛋形指數(shù)無顯著影響。呂莉等（2018）[26]研究表明，日糧添加一定濃度的富硒酵母，能夠改善雞蛋的蛋黃顏色、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼顏色等指標(biāo)。孫慶艷等（2016）[27]研究報道飼糧添加不同水平的硒，對常規(guī)蛋品質(zhì)均無顯著影響，但與對照組相比，添加硒組的蛋殼厚度略有增加。以上研究所選蛋禽品種、生產(chǎn)階段、飼糧硒添加水平以及硒源類型均不相同，可能是研究結(jié)果存在差異的主要原因。

本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加酵母硒對哈氏單位和蛋殼強(qiáng)度等無顯著差異（P＞0.05）。Pavlovic等（2010）[28]研究證明，在蛋雞日糧中添加0.8 mg/kg的酵母硒對蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度等指標(biāo)無顯著改變。Bennett等（2010）[29]發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加硒對蛋雞產(chǎn)蛋品質(zhì)無顯著影響。本試驗研究結(jié)果與以上文獻(xiàn)的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

30、72、121、170 d 四個試驗期飼糧硒水平0.8～1.3 mg/kg（酵母硒0.5～1.0 mg/kg，亞硒酸鈉硒0.3 mg/kg）的雞蛋硒含量均高于飼糧硒水平0.3 mg/kg（亞硒酸鈉）的雞蛋。試驗期72 d（試雞371日齡）以前，飼糧硒水平1.3 mg/kg（酵母硒1.0 mg/kg，亞硒酸鈉硒0.3 mg/kg）的雞蛋硒含量明顯高于飼糧硒水平0.8 mg/kg（酵母硒0.5 mg/kg，亞硒酸鈉硒0.3 mg/kg）的雞蛋。以7 d為周期交替投喂高硒（1.3 mg/kg）和低硒（0.3 mg/kg）飼糧，會降低雞蛋硒含量。高、中、低硒飼糧長期飼用，硒在雞蛋中均無富集效應(yīng)。飼糧硒水平達(dá)到0.8～1.3 mg/kg（酵母硒0.5～1.0 mg/kg，亞硒酸鈉硒0.3 mg/kg），所生產(chǎn)的富硒雞蛋就能夠滿足成人對硒的需要，無潛在毒性。飼糧硒水平（0.3～1.3 mg/kg）、硒源（酵母硒、亞硒酸鈉硒）及0.2%中草藥對雞蛋品質(zhì)均無明顯影響。