賈光輝

（內(nèi)蒙古自治區(qū)烏蘭察布市中心醫(yī)院普外科，內(nèi)蒙古 烏蘭察布 012000）

近年來，研究發(fā)現(xiàn)[1]，結(jié)直腸癌的發(fā)生與抑癌基因和癌基因的表達失調(diào)密切相關(guān)。Runx3基因為RunX家族中的一員，研究發(fā)現(xiàn)[2]，Runx3可調(diào)控胃上皮細胞的增殖，參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。最新的研究表明[3]，Runx3的表達缺失也可導(dǎo)致癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。C-myx癌基因是一種DNA結(jié)合蛋白，研究證實，其異常表達與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。目前有關(guān)Runx3與C-myx在結(jié)直腸癌中的表達情況的報道較少。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月～12月我院普外科結(jié)直腸癌手術(shù)標本66例，患者術(shù)前均未接受過抗癌治療。66例患者中，女30例，男36例，年齡30～86歲，平均（61.2±3.8）歲，其中直腸癌34例，結(jié)腸32例；黏液癌11例，腺癌55例；分化程度：低分化7例，中分化53例，高分化6例；Dukes分期：A期11例，B期26例，C期28例，D期1例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。癌組織取自腫瘤中心部位（非壞死區(qū)），另選擇經(jīng)病理確認為正常組織，距腫瘤處≧5 cm的腸管近端切緣。將手術(shù)標本術(shù)后病理，癌旁正常組織放入液氮中冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 Runx3與C-myc的檢測

用Western印跡法檢測，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗100 mg組織樣品2次，將組織用剪刀剪成小塊，放入組織勻漿器中，與1 mL裂解液充分混勻，之后4℃離心30 min。取上清10 μL進行蛋白定量，之后取30μg總蛋白電泳分離，并轉(zhuǎn)印至聚偏氟乙烯膜上。之后的3h內(nèi)以5%脫脂奶粉封閉，Tris鹽酸緩沖液（TBST）洗膜2次。用抗-Runx3抗體（1:1000稀釋），抗C-myc抗體（1:1000稀釋），內(nèi)滲抗-GAP-DH抗體（1:1000稀釋）4℃孵育過夜。TBST洗膜4次，再用羊抗兔抗體（1:4000稀釋）孵育1 h，之后洗膜。增強化學(xué)發(fā)光法顯色，壓片，灰度值以Quantity On灰度軟件分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS18.0軟件分析及處理數(shù)據(jù)，以（±s）表示計量資料，組間比較以t檢驗，多個計量資料比較以方差檢驗，二指標相關(guān)性用線性相關(guān)分析，以P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Runx3蛋白和C-myc蛋白在癌組織及癌旁組織中的比較

Runx3蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達較癌旁組織下調(diào)，C-myc蛋白均在癌組織中的表達較癌旁組織明顯上調(diào)，差異有顯著性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 Runx3蛋白和C-myc蛋白在癌組織及癌旁組織中的比較（±s）

表1 Runx3蛋白和C-myc蛋白在癌組織及癌旁組織中的比較（±s）

組織 Runx3蛋白 C-myc蛋白癌組織 1.07±0.49 2.23±0.61癌旁組織 2.06±0.22 1.36±0.36 t-14.974 9.979 P＜0.05 ＜0.05

2.2 結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)與Runx3和C-myc蛋白表達

Runx3表達與腫瘤腔內(nèi)直徑、組織類型、浸潤深度有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；C-myc患者與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期、病理分化、浸潤深度有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)與Runx3和C-myc蛋白表達（±s）

表2 結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)與Runx3和C-myc蛋白表達（±s）

臨床病理參數(shù) 分類 n Runx3 P C-myc P性別 男 361.01±0.420.2312.28±0.710.542女 301.15±0.52 2.19±0.41年齡 ≧60歲 351.21±0.530.0512.11±0.540.135＜60歲 310.99±0.33 2.33±0.64腫瘤大小 ＜5 cm 451.16±0.330.0012.16±0.640.071≧5 cm 210.88±0.28 2.44±0.41組織類型 腺癌 551.13±0.410.0062.20±0.650.280黏液癌 110.77±0.25 2.43±0.58淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無 401.29±0.440.0001.94±0.330.000有 260.75±0.23 2.69±0.64 A期 111.66±0.181.76±0.25分期B期 261.03±0.15 2.01±0.34 C+D期 290.84±0.33 2.66±0.610.0000.000高分化 61.51±0.251.65±0.21中分化 531.10±0.44 2.19±0.54低分化 70.46±0.15 3.16±0.41浸潤深度 T1+T2 161.59±0.250.0001.83±0.350.002 T3+T4 500.94±0.35 2.35±0.62分化類型0.0010.005

2.3 Runx3和C-myc蛋白表達的相關(guān)性

經(jīng)相關(guān)分析顯示，Runx3和 C-myc的表達呈負相關(guān)（r=-0.410,P=0.002）。

3 討 論

結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個多階段演變，多基因參與的復(fù)雜過程，同時伴隨多種分子事件的發(fā)生，涉及到抑癌基因失活和癌基因激活，導(dǎo)致細胞內(nèi)基因發(fā)生變化，影響細胞的正常生長、凋亡，引發(fā)腫瘤。Runx3是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，其表達下調(diào)主要是由于Runx3啟動子區(qū)域CpG島的甲基化有關(guān)。同時其活性可能也受多種信號通路調(diào)控，其抑癌機制與TGF-β通路密切相關(guān)，而該通路參與結(jié)直腸癌的發(fā)生與發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)[4]，Runx3可能參與TGF-β信號傳導(dǎo)過程，在Runx3蛋白的介導(dǎo)下，TGF-β由胞質(zhì)轉(zhuǎn)入胞核內(nèi)，才能核內(nèi)靶點相結(jié)合，調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄。Runx3表達下降，可引起TGF-β信號失活，導(dǎo)致細胞生長、凋亡異常，從而引發(fā)腫瘤。研究表明[5]，大腸癌中Runx3的表達量較正常黏膜組織明顯要低，且Runx3在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中和低分化組中明顯低于未轉(zhuǎn)移組和中高分化組。本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌中Runx3蛋白表達低于癌旁組織，且臨床分期越晚，病理分化越低，則表達下調(diào)更明顯。

骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs）是TGF-B超家族的成員，具有廣泛的生物學(xué)功能。Runx3是TGF-B/BMP介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的一部分，此通路降低C-myc表達，主要通過以下途徑：（1）C-myc、Runx3基因啟動子的結(jié)合位點，對C-myc表達進行抑制，BMP和Runx3直接下調(diào)C-myc基因啟動子的活性；（2）通過Runx3和BMP基因轉(zhuǎn)錄，對β-連環(huán)素/T-細胞轉(zhuǎn)錄因子（B-catenin/TCF4）的活性進行抑制。BMP可對C-myc基因啟動子進行抑制，從而影響C-myc基因的轉(zhuǎn)錄。研究證實[6]，BMP信號通路通過增加Runx3表達，來下調(diào)C-myc的表達。本研究中結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌組織中，C-Myc表達上調(diào)，Runx3表達下調(diào)，二者的表達呈負相關(guān)，但由于本研究實驗條件的限制，關(guān)于其作用靶點及分子機制仍需進一步研究。

C-myc具有雙向調(diào)節(jié)能力，能介導(dǎo)細胞凋亡和細胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)[7]，C-myc可激活細胞的端粒酶，導(dǎo)致細胞具有無限分裂生殖的潛能，從而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。已有研究證實，在結(jié)直腸癌的發(fā)生中，C-myc起癌基因作用。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，C-myc基因在癌旁組織的表達明顯下降，在結(jié)腸癌組織中高度表達；其表達與結(jié)腸癌的腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，提示C-Myc基因的表達上調(diào)可能與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本文中發(fā)現(xiàn)，在結(jié)直腸癌組織中，C-myc的表達明顯增加，且其表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期、病理分化密切相關(guān)，也進一步證實上述觀點。