劉菲娜 舒瑾芳 鄔陳婷 王欠欠 邢沅乙 許奇奇 王一

摘 要：櫻花起源于中國，在世界各地都有分布，由于其花色鮮艷美麗，是重要的園林觀賞樹種之一。目前櫻花的繁殖主要以扦插和嫁接為主，生根率比較低，繁育系數(shù)也少，采用組織快繁技術(shù)可以有效克服這些問題。本文研究了草櫻的組培快繁技術(shù)，從外植體的消毒及培養(yǎng)基激素濃度的摸索，最終探索出一種草櫻的組織培養(yǎng)方法，可以提高其繁育系數(shù)，縮短生育周期，可用于大規(guī)模工廠化育苗。

關(guān)鍵詞：櫻花;組培快繁;育苗

櫻花（學(xué)名：Cerasus sp.）是薔薇科櫻屬幾種植物的統(tǒng)稱， 植株花朵鮮艷美麗，是我國園林綠化中優(yōu)秀的觀花樹種[1]。廣泛應(yīng)用于城市街道、小區(qū)、校園和河堤等，綠化效果顯著。盛花期花朵多，花期長，觀賞價(jià)值極高，深受人們喜愛。隨著櫻花在園林綠化建設(shè)中的大量應(yīng)用，市場對(duì)櫻花工程苗的需求越來越大，常規(guī)傳統(tǒng)的育苗方法已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)上的要求。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，利用植物細(xì)胞的全能性進(jìn)行組織快繁培養(yǎng)，可以大大縮短育種周期和提高繁育系數(shù)，而且能保持親本的優(yōu)良性狀，提升櫻花種苗的質(zhì)量，為市場上快速大規(guī)模提供櫻花工程苗成為可能，推動(dòng)我國櫻花產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

1、材料與方法

1.1材料

1.1.1外植體選擇

草櫻是櫻花的一個(gè)品種，它是多年生薔薇科櫻屬植物，種子繁育比較困難，一般組織培養(yǎng)采用草櫻嫩枝繁殖。本實(shí)驗(yàn)材料選以3月上旬的草櫻嫩枝為外植體。

1.1.2主要試劑

實(shí)驗(yàn)所用藥品均為國產(chǎn)試劑（AR級(jí)）。

1.1.3培養(yǎng)基

分誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，前者為： MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 0.1mg/L+白糖30g/L+生物炭3g/L，pH5.8，后者為：1/2MS+IBA 1.0 g/L+白糖30g/L，pH5.8。

1.2方法

1.2.1芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)

剪取帶有腋芽草櫻的嫩枝，用肥皂水清洗后以自來水沖洗1 h，放置于超凈工作臺(tái)上用75%酒精消毒30 s ，10%次氯酸鈉消毒6 min，，無菌水反復(fù)沖洗4次，，再用無菌濾紙吸干水分，最后接種至誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基。每一瓶培養(yǎng)基接種2-3個(gè)嫩枝，放置在組培室中，每半個(gè)月?lián)Q一次培養(yǎng)基，光照強(qiáng)度設(shè)置為2000 lux，溫度設(shè)置為25℃，濕度設(shè)置為80%，光照和黑暗時(shí)間設(shè)定為16 h/ 8 h。

1.2.2生根培養(yǎng)

從嫩枝上將誘導(dǎo)出的幼芽用滅菌刀切下來，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，光照強(qiáng)度設(shè)置為2000 lux，溫度設(shè)置為25℃，濕度設(shè)置為80%，光照和黑暗時(shí)間設(shè)定為16 h/ 8 h。

2、結(jié)果

組培快繁實(shí)驗(yàn)共接種100瓶，污染15瓶，污染率為15%。誘導(dǎo)增殖出芽65瓶，誘導(dǎo)率為65%，死亡20瓶，死亡率為20%。最終成活生根50瓶，生根率為50%。

由于草櫻為多年生長植物，外植體滅菌難度較高。75%酒精和高濃度的次氯酸鈉會(huì)使組織細(xì)胞殺死，采用75%濃度的酒精滅菌30s，結(jié)合10%次氯酸鈉滅菌 6 min，既能殺死細(xì)菌又可以保持細(xì)胞活性，消毒時(shí)間小于5min時(shí)污染率會(huì)顯著提高，而消毒大于8 min 則植物細(xì)胞死亡率明顯提高。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)觀察，將含有腋芽的外植體放在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)15 d 左右開始出現(xiàn)萌動(dòng)，每個(gè)嫩枝都會(huì)展開新葉，30 d左右放在增殖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，到2個(gè)月時(shí)，幼苗的長度可達(dá)到3.0 cm，此時(shí)可以進(jìn)行草櫻的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)[1]。長出約3-5 cm 的幼苗從外植體切下，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。將已經(jīng)生根的幼苗移栽到基質(zhì)中，并蓋上塑料杯保濕在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，1-2周后轉(zhuǎn)移至人工氣候室培養(yǎng)。

3、討論

近年來，隨著園林綠化市場的發(fā)展，人們對(duì)觀花品種的需求量不斷加大，櫻花由于其花色特別受人們喜歡，因此櫻花樹種具有較大的市場潛力。櫻花花色鮮艷，觀賞性極高，開發(fā)其組織培養(yǎng)技術(shù)不但可以保護(hù)櫻花種質(zhì)資源，也為其今后的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)利用提供了可能[2]。

對(duì)于櫻花組織培養(yǎng)研究來說，消毒方法是組培快繁體系建立的關(guān)鍵[3]。本研究中，以帶有腋芽放入多年生嫩莖為外植體，用75%酒精消毒30s 和10%次氯酸鈉消毒6min，污染率明顯減少[4]。篩研究結(jié)果顯示，借助芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基可以誘導(dǎo)出芽，成功率為65%，利用生根培養(yǎng)基生根，生根率為50%。從結(jié)果來看，櫻花誘導(dǎo)率以及生根率總體不高，有很大的提升空間，本研究為櫻花后續(xù)的組織快繁進(jìn)一步研究提供了一定參考。

參考文獻(xiàn)

[1]王文房，李修嶺等. 櫻花花柄的組織培養(yǎng)[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2006， 34（ 22） ： 5839-5841.

[2]龔玉蓮，龔莉紅，杜馥燕，等. 朱櫻花愈傷組織的誘導(dǎo). 廣州教育學(xué)院學(xué)報(bào)[J].2006 （3）：75-77.

[3]李艷敏，孟月娥，趙秀山，等.赤霉素對(duì)櫻花組培苗壯苗及生根的影響[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2012（39增刊）： 2749.

[4]劉國順， 楊麗， 董卉卉， 等. 獨(dú)花蘭組織培養(yǎng)研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2003， 41（2）： 9195-9196.