王偉 張瓏 荊文 李銀芳 趙新建 閆付蘭 鄧林清

男性性功能障礙(SD)是男性群體常見的性疾病之一，具有較高發(fā)病率，對(duì)患者身心健康和生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴(yán)重影響[1,2]。SD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚未闡明。有研究表明，血管內(nèi)皮功能障礙在SD發(fā)生及進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[3]。我們前期研究采用枸櫞酸西地那非聯(lián)合星狀神經(jīng)節(jié)阻滯(SGB)治療SD取得了令人滿意的臨床療效。結(jié)果顯示，聯(lián)合治療能夠顯著改善SD患者勃起功能、精子質(zhì)量及性生活質(zhì)量，并降低復(fù)發(fā)率，但其治療機(jī)制尚不清楚[4]。本研究觀察枸櫞酸西地那非聯(lián)合SGB對(duì)SD患者血管內(nèi)皮功能的影響，并從炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激方面探討其治療機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年6月至2012年10月我院收治的SD患者104例，隨機(jī)分為對(duì)照組和研究組，每組52例。對(duì)照組：年齡23～67歲，平均年齡(40.38±6.22)歲；病程0.5～12年，平均(3.24±0.98)年；輕度32例，中度15例，重度5例。研究組：年齡22～65歲，平均年齡(39.45±6.13)歲；病程0.5～12年，平均(3.16±0.95)年；輕度30例，中度18例，重度4例。2組基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者陰莖勃起困難，性功能異常，符合SD診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②病程>3個(gè)月；③患者自愿加入本研究，且簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前3個(gè)月內(nèi)接受過相關(guān)治療；②合并心、肝、肺、腎等重要臟器功能障礙者；③引起SD的器質(zhì)性疾病患者，如生殖器畸形、糖尿病、高血壓等；④藥物、酗酒、吸毒等其他原因引起的SD患者；⑤對(duì)本研究藥物過敏者；⑥依從性差者。

1.3 治療方法 對(duì)照組給予枸櫞酸西地那非治療，50 mg 性生活前1 h口服，1～3次/周，后期可視藥效調(diào)整劑量，療程4周。研究組在口服枸櫞酸西地那非基礎(chǔ)上給予SGB治療。方法如下：患者取仰臥位，頸前部肌肉保持松弛狀態(tài)，皮膚常規(guī)消毒后將患者頸總動(dòng)脈、胸鎖乳突肌推向外側(cè)，選擇第六頸椎橫突處垂直進(jìn)針穿刺，直至觸及骨質(zhì)，回抽后確保無腦脊液、血液流出，注入2% 利多卡因3 ml+0.9%氯化鈉溶液5 ml，隔日1次，共治療15次。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 標(biāo)本采集:抽取患者空腹靜脈血10 ml，置于2個(gè)EDTA抗凝管中(5 ml/管)，一管常規(guī)離心后分離血清，另一管采用Ficoll密度梯度離心法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)。

1.4.2 性激素:采用電化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定總睪酮(TT)、游離睪酮(FT)、性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)含量。

1.4.3 血管內(nèi)皮功能:采用硝酸還原酶法測(cè)定一氧化氮(NO)含量；放射免疫法測(cè)定內(nèi)皮素(ET-1)含量；血管彩超測(cè)定肱動(dòng)脈血流介導(dǎo)的血管舒張功能(FMD)。

1.4.4 炎性因子:采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)含量。

1.4.5 氧化應(yīng)激:采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量。

1.4.6 SIRT1 mRNA:采用Real time-PCR測(cè)定沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(SIRT1)mRNA表達(dá)。Trizol提取PBMCs總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第1鏈， ABI 7500型熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，根據(jù)各樣本測(cè)得的Ct值，以2△△Ct表示各樣本相對(duì)表達(dá)量。

1.4.7 SIRT1蛋白:采用Western blot測(cè)定SIRT1蛋白表達(dá)。提取PBMCs總蛋白， 10% SDSPAGE電泳分離，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，10%脫脂奶粉封閉2 h，分別加入特異性一抗、二抗，TBST洗膜3次。ECL化學(xué)發(fā)光法顯色、定影，設(shè)GAPDH為內(nèi)參照基因。

2 結(jié)果

2.1 2組性激素比較 2組治療后TT、FT、SHBG均較治療前顯著提高(P<0.05)，且研究組TT、FT、SHBG變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

組別TT(nmol/L)TSI(nmol/U)SHBG(nmol/L)對(duì)照組 治療前8.97±0.951.23±0.1510.62±1.64 治療后12.35±1.58*2.30±0.34*14.99±2.02*研究組 治療前8.92±0.921.26±0.1811.01±1.56 治療后18.44±2.57*#3.48±0.49*#19.65±2.30*#

注：與治療前比較,*P<0.05；與對(duì)照組比較,#P<0.05

2.2 2組血管內(nèi)皮功能比較 2組治療后NO、FMD均較治療前顯著提高，ET-1均較治療前顯著降低(P<0.05)，且研究組NO、ET-1、FMD變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

組別NO(μmol/L)ET-1(ng/L)FMD對(duì)照組 治療前50.11±6.6368.76±8.457.56±0.89 治療后73.62±9.41*46.68±5.36*9.93±1.13*研究組 治療前51.06±7.2370.24±9.346.99±0.74 治療后98.89±10.09*#25.47±3.66*#13.00±1.80*#

注：與治療前比較,*P<0.05；與對(duì)照組比較,#P<0.05

2.3 2組炎性因子比較 2組治療后IL-6、TNF-α、hs-CRP均較治療前顯著降低(P<0.05)，且研究組IL-6、TNF-α、hs-CRP變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)。見表3。

組別IL-6(ng/L)TNF-α(mg/L)hs-CRP(mg/L)對(duì)照組 治療前14.15±2.145.20±0.633.25±0.46 治療后10.64±1.56*3.79±0.56*2.49±0.37*研究組 治療前13.56±1.895.23±0.583.20±0.50 治療后6.03±0.75*#2.12±0.34*#1.52±0.22*#

注：與治療前比較,*P<0.05；與對(duì)照組比較,#P<0.05

2.4 2組氧化應(yīng)激比較 2組治療后MDA均較治療前顯著降低，SOD、GSH-Px均較治療前顯著提高(P<0.05)，且研究組MDA、SOD、GSH-Px變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)。見表4。

2.5 2組SIRT1表達(dá)比較 2組治療后SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)均較治療前顯著提高(P<0.05)，且研究組SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)。見表5。

組別MDA(μmol/L)SOD(KU/L)GSH-Px(U)對(duì)照組 治療前12.43±1.6749.65±5.6878.43±8.32 治療后8.88±1.12*61.57±7.31*94.89±10.76*研究組 治療前11.98±1.5652.13±6.2380.34±9.51 治療后5.02±0.67*#80.87±9.43*#124.57±15.67*#

注：與治療前比較,*P<0.05；與對(duì)照組比較,#P<0.05

組別SIRT1 mRNASIRT1蛋白對(duì)照組 治療前0.98±0.120.89±0.10 治療后1.25±0.18*1.18±0.15*研究組 治療前0.95±0.160.91±0.12 治療后1.57±0.23*#1.47±0.20*#

注：與治療前比較,*P<0.05；與對(duì)照組比較,#P<0.05

3 討論

有報(bào)道提出，我國(guó)乃至全球范圍內(nèi)SD患病率逐年上升，SD在40～70歲的男性群體中患病率高達(dá)52%左右[6,7]。該病主要是由于陰莖勃起障礙、射精障礙、性欲障礙等原因?qū)е聼o法完成滿意的性生活，不僅影響患者身心健康，也給其家庭生活帶來困擾[8]。 迄今為止，SD尚無系統(tǒng)性治療措施，藥物治療效果欠佳。

目前，口服枸櫞酸西地那非是臨床治療SD的首選治療方案，該藥是一種磷酸二酯酶抑制劑，通過抑制其水解活性增加陰莖組織cGMP含量，后者具有促進(jìn)陰莖平滑肌松弛作用并增加海綿體血液充盈量，從而改善陰莖勃起功能和射精功能[9]。星狀神經(jīng)節(jié)阻滯(SGB)是目前應(yīng)用于疼痛性和非疼痛性疾病的一種微創(chuàng)治療手段，可通過調(diào)節(jié)性激素分泌和交感神經(jīng)活性、增加NO含量等作用促進(jìn)SD患者射精功能恢復(fù)[10,11]。我們前期研究采用枸櫞酸西地那非聯(lián)合SGB治療SD患者，結(jié)果顯示聯(lián)合治療組療效優(yōu)于單用枸櫞酸西地那非治療組。但是，聯(lián)合治療組發(fā)揮藥理作用的可能機(jī)制仍未闡明。

陰莖勃起是神經(jīng)、血管、內(nèi)分泌等多種因素共同參與的復(fù)雜過程。研究顯示，SD患者血清性激素含量顯著降低，與陰莖勃起功能障礙密切相關(guān)[12]。血管內(nèi)皮功能異常是各種原因?qū)е耂D的共同病理機(jī)制之一[13,14]。血管內(nèi)皮功能異常將導(dǎo)致陰莖組織微循環(huán)障礙、海綿體平滑肌收縮及陰莖血流量減少，從而抑制陰莖勃起功能。因此，改善血管內(nèi)皮功能被認(rèn)為是治療SD的重要靶點(diǎn)之一。NO、FMD、ET-1是反映血管內(nèi)皮功能的主要指標(biāo)，其中NO是血管平滑肌細(xì)胞分泌的小分子物質(zhì)，可促進(jìn)血管平滑肌舒張；FMD是評(píng)估血管內(nèi)皮舒張程度的常用指標(biāo)；ET-1是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，能夠拮抗NO的舒血管作用，從而發(fā)揮強(qiáng)烈的血管收縮作用。本研究結(jié)果顯示，治療后，2組TT、FT、SHBG、NO、FMD均較治療前顯著提高，ET-1均較治療前顯著降低(P<0.05)，且研究組以上指標(biāo)變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)。說明枸櫞酸西地那非聯(lián)合SGB能夠發(fā)揮協(xié)同作用，顯著提高SD患者血清性激素含量，改善血管內(nèi)皮功能，療效優(yōu)于單獨(dú)枸櫞酸西地那非治療。

研究證實(shí)，血管內(nèi)皮功能異常與炎性反應(yīng)、氧化損傷、細(xì)胞凋亡等多種因素有關(guān)。其中炎性因子參與陰莖勃起過程，其分泌過多直接導(dǎo)致SD發(fā)生發(fā)展。IL-6、TNF-α、hs-CRP是機(jī)體重要的炎性因子，檢測(cè)其含量可作為SD發(fā)病的預(yù)測(cè)因子[15]。氧化應(yīng)激在SD患者血管內(nèi)皮損傷中同樣發(fā)揮重要作用。其中MDA是反映氧化應(yīng)激損傷程度的主要指標(biāo)，而SOD、GSH-Px是機(jī)體發(fā)揮抗氧化作用的酶。本研究結(jié)果顯示，治療后，2組SOD、GSH-Px均較治療前顯著提高，IL-6、TNF-α、hs-CRP、MDA均較治療前顯著降低(P<0.05)，且研究組以上指標(biāo)變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)，提示枸櫞酸西地那非聯(lián)合SGB能夠有效抑制SD患者機(jī)體炎性因子分泌和氧化應(yīng)激，從而改善血管內(nèi)皮功能。

SIRT1是一種NAD依賴性去乙酰酶，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白和非組蛋白表達(dá)等作用，參與包括能量代謝、凋亡等生理和病理過程[16]。有研究表明，SIRT1能夠激活eNOS，促進(jìn)NO的合成和釋放，從而導(dǎo)致血管舒張[17]。本研究結(jié)果顯示，治療后，2組SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)均較治療前顯著提高(P<0.05)，且研究組SIRT1 mRNA和蛋白表達(dá)變化幅度大于對(duì)照組(P<0.05)，提示枸櫞酸西地那非聯(lián)合SGB治療SD能夠通過上調(diào)SIRT1表達(dá)發(fā)揮抗炎、抗氧化及血管內(nèi)皮保護(hù)作用。

綜上所述，枸櫞酸西地那非聯(lián)合SGB能夠顯著提高SD患者機(jī)體性激素含量，并改善血管內(nèi)皮功能，其機(jī)制與調(diào)節(jié)SIRT1表達(dá)，從而抑制炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激有關(guān)。以SIRT1為靶點(diǎn)有可能為SD治療提供新思路和新方法。