鄔元娟 張樹秋 王文博 李鴛鴦

摘要：為了解市售生豬肉中金黃色葡萄球菌的污染及耐藥性狀況，于2019年從濟南、壽光、德州、兗州、臨沂、濟寧6地市采集生豬肉（后腿肉）樣品共計300份，對其金黃色葡萄球菌污染狀況進行檢測分析。結(jié)果表明，300份樣品中，金黃色葡萄球菌檢出率為13.0%（38/300）;進一步進行金黃色葡萄球菌對9種抗生素的藥敏試驗，結(jié)果表明，豬肉樣品中的金黃色葡萄球菌對紅霉素、四環(huán)素有較高耐藥性，且多數(shù)為多重耐藥菌株。綜上，市售豬肉產(chǎn)品中金黃色葡萄球菌污染情況仍比較嚴重，建議相關(guān)部門進一步加強豬肉產(chǎn)品市場監(jiān)管，采取針對性風(fēng)險監(jiān)測預(yù)警措施。

關(guān)鍵詞：生豬肉;金黃色葡萄球菌;污染狀況;耐藥性

中圖分類號：S851.34+7 ?文獻標(biāo)識號：A ?文章編號：1001-4942（2020）02-0140-04

Abstract To investigate the contamination situation of Staphylococcus aureus in raw pork sold on the markets and its drug resistance in Shandong Province， 300 raw pork samples were collected from Jinan， Shouguang， Dezhou， Yanzhou， Linyi and Jining in 2019. The results showed that Staphylococcus aureus was found in 38 samples， which accounting for 13.0% （38/300）. The susceptibility test of the Staphylococcus aureus strains to 9 types of antibiotics was conducted and the results were as follows. The Staphylococcus aureus strains isolated from raw pork had higher resistance to erythromycin and tetracycline， and most strains had multidrug resistance. In conclusion， the contamination of Staphylococcus aureus in raw pork sold on the markets in Shandong Province was more serious， so it was recommended that relevant governmental departments and agencies should further strengthen the market supervision and take actions for risk monitoring and early warning.

Keywords Raw pork; Staphylococcus aureus; Contamination situation; Drug resistance

近年來，世界各國食品安全事件頻繁發(fā)生，食品安全問題成為全世界共同關(guān)注的問題[1]。據(jù)WHO統(tǒng)計，全世界每年患有腹瀉病的人群中約有70%是由于食用了受微生物污染的食品[2]。隨著人們生活水平的提高，豬肉產(chǎn)品已經(jīng)成為百姓餐桌上最為常見的食品，因此食源性致病菌污染造成的豬肉產(chǎn)品食品安全問題不斷出現(xiàn)，越來越受到大家的關(guān)注[3]。金黃色葡萄球菌是污染豬肉的主要食源性致病菌之一，食用攜帶有金黃色葡萄球菌的豬肉，會帶來很大的食品安全隱患[4]。我國規(guī)定絕大多數(shù)食品中不能有金黃色葡萄球菌檢出，但據(jù)報道仍有大量動物源食品中檢出金黃色葡萄球菌[5-8]。

本試驗于2019年從濟南、壽光、德州、兗州、臨沂、濟寧6地市采集生豬肉樣品，檢測其金黃色葡萄球菌，并對檢測出的金黃色葡萄球菌進行抗生素藥敏試驗，以期為選擇有效抗菌藥、防止抗生素濫用及研究食源性致病菌提供可靠依據(jù)，為完善豬肉制品致病菌防治體系奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2019年6—8月在濟南市、壽光市、德州市、兗州市、臨沂市、濟寧市的超市和農(nóng)貿(mào)市場，采用隨機抽樣的方式，每個地市抽取50份生豬后腿肉，共計300份。每份豬肉樣品為500～1 000 g，無菌袋封裝后冷藏條件下4 h內(nèi)送達實驗室進行檢測。采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。

1.2 主要試劑及設(shè)備

金黃色葡萄球菌所用增菌液、分離培養(yǎng)基及顯色培養(yǎng)基均購自廣東環(huán)凱生物科技有限公司，所有試劑及生化檢定卡均在有效期內(nèi)。生化培養(yǎng)箱購自上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司，質(zhì)控菌株均由廣東省食品微生物安全工程技術(shù)研究開發(fā)中心提供，金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌株編號ATCC25922。苯唑西林、慶大霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、克林霉素、紅霉素、磺胺異惡唑、多西環(huán)素、四環(huán)素藥敏板，均購自上海星佰生物技術(shù)有限公司。

1.3 豬肉樣品中金黃色葡萄球菌檢測方法

參照《食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗》（GB 4789.10—2016）[9]檢測豬肉樣品中的金黃色葡萄球菌，檢測過程嚴格按照《國家食源性致病菌監(jiān)測工作手冊》中質(zhì)量控制操作程序進行，并以標(biāo)準(zhǔn)菌株為對照菌株進行質(zhì)控。

1.4 藥敏試驗

1.4.1 藥敏板濃度 苯唑西林（OX），0.125～8 μg/mL;慶大霉素（GEN），0.06～32 μg/mL;復(fù)方新諾明（T/S），0.03/0.59～64/304 μg/mL;環(huán)丙沙星（CFX），0.06～32 μg/mL;克林霉素（CLN），0.03～16 μg/mL;紅霉素（EM），0.03～16 μg/mL;磺胺異惡唑（G），16～512 μg/mL;多西環(huán)素（DOX），0.03～16 μg/mL;四環(huán)素（TET），0.03～16 μg/mL。

1.4.2 試驗方法 將保存于-80℃的金黃色葡萄球菌（參考GB 4789.10—2016檢測方法分離純化后，收集到腦心浸出液甘油管中保存）取出復(fù)蘇，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂板上，挑取菌落數(shù)個置于接種水（DEMINERALIZED WATER）中，用0.5麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷?取上述菌液60 μL，加入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，混勻;吸取稀釋菌液，加入藥敏板中，毎孔100 μL;將板條放入恒溫培養(yǎng)箱中36℃培養(yǎng)16～24 h，自培養(yǎng)箱中取出板條，判讀各個孔的陰陽性結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬肉樣品中金黃色葡萄球菌檢出總體情況

試驗結(jié)果顯示，300份樣品中， 有38份檢出金黃色葡萄球菌，檢出率為13.0%（38/300）。對分離自這38份樣品的菌株分別進行編號（1～38），用于后續(xù)試驗。

2.2 金黃色葡萄球菌藥物敏感性試驗結(jié)果

按照臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）的《M100S抗微生物藥物敏感性試驗的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)（26th Edtion）》對分離自豬肉樣品的38株金黃色葡萄球菌進行藥敏試驗，結(jié)果見表1?？梢钥闯?，除3、9、18號菌株外，其余菌株均對一種或多種抗生素產(chǎn)生耐藥性，其中12、14、27、30號菌株均對6種抗生素產(chǎn)生耐藥性。

2.2.1 耐藥率 由表2可以看出，38株金黃色葡萄球菌菌株對紅霉素和四環(huán)素的耐藥率最高，其次為克林霉素，均超過60%;對磺胺異惡唑和慶大霉素的耐藥率也較高，分別為36.8%、44.7%;對多西環(huán)素和復(fù)方新諾明的耐藥率較低，分別為5.3%和7.9%。

2.2.2 耐藥譜 38株金黃色葡萄球菌中有3株為敏感菌（表1），其余菌株均為耐藥菌，其耐藥譜見表3。有3株菌耐一種抗生素，6株菌耐兩種抗生素，8株菌耐三種抗生素，10株菌耐四種抗生素，4株菌耐五種抗生素，4株菌耐六種抗生素。

其中，耐藥譜為磺胺異惡唑+四環(huán)素兩種抗生素及克林霉素+紅霉素+磺胺異惡唑+慶大霉素四種抗生素的菌株檢出率最高，各有4株;其次為耐克林霉素+紅霉素+環(huán)丙沙星+四環(huán)素的，有3株菌。

3 討論與結(jié)論

金黃色葡萄球菌是人畜共患病菌，可引起食物中毒，在美國被列為第五位致病因子[10]。隨著抗生素在畜牧業(yè)中的大量使用，金黃色葡萄球菌對抗生素的耐藥水平越來越高，耐藥譜越來越廣，多重耐藥現(xiàn)象越來越嚴重[11-14]。豬肉是我國居民生活中的主要肉類食品，2017年山東省監(jiān)測的360份市售畜禽蛋產(chǎn)品中，豬肉中食源性致病菌的檢出率很高，直接影響消費者的健康。

本研究從山東省6地市采集了300份生豬肉樣品，其中38份檢出金黃色葡萄球菌，檢出率為13.0%。38株菌對紅霉素和四環(huán)素的耐藥率最高，均為65.8%。38株金黃色葡萄球菌中僅有3株為敏感菌，其余均對一種、兩種或多種抗生素耐藥，其中，耐一種抗生素的有3株，耐兩種抗生素的有6株，耐三種抗生素的有8株，耐四種抗生素的有10株，耐五種抗生素的有4株，耐六種抗生素的有4株。

本試驗中分離出的金黃色葡萄球菌菌株對紅霉素和四環(huán)素的耐藥率最高，是由于四環(huán)素、紅霉素價格低廉，抗菌譜廣，被廣泛用作防治動物疾病的飼料添加劑[15];對多西霉素和復(fù)方新諾明的敏感率較高，這為以后選擇有效抗菌藥、減少抗生素濫用提供了指導(dǎo)，可為完善豬肉產(chǎn)品致病菌防治體系奠定基礎(chǔ)。

本次抽檢豬肉樣品的金黃色葡萄球菌檢出率較高，多重耐藥性也較高，可能是因為夏季病菌繁殖快，交叉污染的概率高，且目前抗生素在畜禽養(yǎng)殖中廣泛使用，長時間不合理地使用抗生素極易導(dǎo)致致病菌的耐藥性增強、耐藥譜擴大。因此，有關(guān)部門需要進一步加強豬的飼養(yǎng)、屠宰、加工及銷售各環(huán)節(jié)的監(jiān)管，降低由此引發(fā)的食源性疾病的發(fā)生率。

參 考 文 獻：

[1] Rebmond E C， Griffith C J. Consumer perceptions of food safety risk， control and responsibility [J]. Appetite， 2004， 43 （3）： 309-313.

[2] Food Standards Agency. The FSA foodborne disease strategy 2010-15 （England） [S]. London： Food Standards Agency， 2011.

[3] 鄔元娟， 張樹秋， 王文博， 等. 山東省市售畜禽蛋產(chǎn)品中食源性致病菌污染狀況分析[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2018， 50（7）： 38-41.

[4] 聶青， 石磊， 周臣青， 等. 生豬養(yǎng)殖場環(huán)境及屠宰加工環(huán)節(jié)金黃色葡萄球菌污染及耐藥譜狀況[J]. 現(xiàn)代食品科技， 2016， 32（2）： 289-295.

[5] 李建兵， 張璟， 胡曉寧. 2011～2014年甘肅省嘉峪關(guān)市即食食品金黃色葡萄球菌污染調(diào)查[J].疾病預(yù)防控制通報， 2016， 31（2）： 78-80.

[6] 牛恒彩， 舒高林， 林國榮， 等. 80株食源性金黃色葡萄球菌藥敏結(jié)果分析[J]. 中國衛(wèi)生檢驗檢疫， 2016， 26（5）： 2259-2261.

[7] 王璇， 王娉， 葛毅強， 等. 北京市售速凍調(diào)理生制品中金黃色葡萄球菌PFGE分型與耐藥性研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗檢疫， 2017， 46（3）： 455-460.

[8] 陳國利， 吳亞英， 吳越， 等.烏魯木齊地區(qū)食品中金黃色葡萄球菌的污染狀況調(diào)查[J]. 醫(yī)學(xué)動物防制， 2015， 31（12）： 1334-1336.

[9] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會， 國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗：GB 4789.10—2016 [S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016-12-23.

[10] Scallan E， Hoekstra R M， Angulo F J， et al. Foodborne illness acquired in the United States major pathogens [J]. Emerg. Infect. Dis.， 2011， 17（1）： 7-15.

[11] 葉玲青， 陳戴堯， 馬群飛， 等. 福建地區(qū)豬源葡萄球菌耐藥性分析及耐藥基因檢測[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇， 2017， 23（4）： 271-273.

[12] 樊潤， 吳聰明， 李德喜， 等. 河南省豬源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥性及分子分型研究[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)， 2014， 44（12）： 1223-1230.

[13] 李兵兵， 劉靚， 李雙姝， 等. 淮安市禽畜肉中金黃色葡萄球菌污染及其病原學(xué)特征分析[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志， 2019， 31（3）： 217-221.

[14] 李兵兵， 劉純成， 邢亞東， 等. 淮安市233份畜禽肉及152份淡水龍蝦中致病菌分布狀況及耐藥性分析[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2016， 43（17）： 3134-3138.

[15] 鄭春芳， 雷元順， 于桂陽. 湖南省永州市豬肉中四環(huán)素類藥物殘留的現(xiàn)狀分析[J]. 中國豬業(yè)， 2013， 8（7）： 61-63.