摘 要：目的：對(duì)比分析愛(ài)科來(lái)醫(yī)療科技（平湖）有限公司與日本東曹株式會(huì)社分別研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑，評(píng)估其臨床上的一致性。方法：研究納入天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院、天津市第二人民醫(yī)院的臨床樣本共計(jì)269例，針對(duì)同一患者身上采集的全血及溶血樣本，同時(shí)用兩種分析系統(tǒng)檢測(cè)糖化血紅蛋白（HbA1c）含量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：針對(duì)268例全血樣本，卡方檢驗(yàn)結(jié)果為0.375，Kappa值為0.962，做散點(diǎn)圖分析其線性相關(guān)性系數(shù)r2為0.997;針對(duì)265例溶血樣本，卡方檢驗(yàn)結(jié)果為0.063，Kappa值為0.962，做散點(diǎn)圖分析其線性相關(guān)性系數(shù)r2為0.998。分析：兩種全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑在檢測(cè)同一全血或溶血樣本時(shí)，檢測(cè)結(jié)果顯著相關(guān)，證明對(duì)于同一受試者的不同類型（靜脈全血、血清、血漿）樣本檢測(cè)有較高一致性。

關(guān)鍵詞：全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀;HbA1c;糖化血紅蛋白;一致性評(píng)價(jià)

當(dāng)今社會(huì)，糖尿病已成為困擾人類的一大頑疾。人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物是糖化血紅蛋白，血紅蛋白的糖化發(fā)生在紅細(xì)胞壽命的120天內(nèi)，所以糖化血紅蛋白（HbA1c）常反映數(shù)周至數(shù)月的平均血糖水平，它不受采血時(shí)間、禁食或使用胰島素的影響。因此，HbA1c被認(rèn)為是判斷糖尿病長(zhǎng)期控制情況的良好參數(shù)，同時(shí)還是糖尿病首選診斷指標(biāo)[1]。HbA1c的檢測(cè)結(jié)果能客觀反映患者近6-8周的血糖代謝水平，是目前國(guó)際上公認(rèn)的可反映糖尿病患者長(zhǎng)期血糖控制狀況的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在臨床上被廣泛應(yīng)用[2]。

目前HbA1c常規(guī)測(cè)定方法有高效液相色譜（HPLC）法、親和層析法、免疫法、電泳法、酶法等。愛(ài)科來(lái)醫(yī)療科技（平湖）有限公司研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀，是一臺(tái)國(guó)產(chǎn)儀器，能檢測(cè)穩(wěn)定型HbA1c、HbF，平均48秒檢測(cè)一個(gè)樣本，其基本原理是通過(guò)反向陽(yáng)離子交換層析柱法檢測(cè)血液中的HbA1c，稀釋后的血液樣本送到層析柱，層析柱根據(jù)高效液相色譜法（HPLC）將樣本分離為多種血紅蛋白成分，通過(guò)雙波長(zhǎng)比色法檢測(cè)從層析柱洗脫的各成分，血液在波長(zhǎng)420nm附近時(shí)有一個(gè)特征性吸收峰，吸收強(qiáng)度隨血紅蛋白濃度增高而增強(qiáng)，而在波長(zhǎng)500nm附近時(shí)，峰高就不會(huì)再特異地發(fā)生改變，可消除背景影響，再利用微型計(jì)算及處理所得結(jié)果，從而獲得峰鑒別和含量。在浙江省醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院進(jìn)行的注冊(cè)檢驗(yàn)中，用糖化血紅蛋白成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（高、低）作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，分析儀測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差在±8%范圍內(nèi);檢測(cè)樣本濃度為4.0%—6.5%（20.2mmol/mol—47.5 mmol/mol）的樣本，分析儀重復(fù)測(cè)量結(jié)果變異系數(shù)CV均不大于3.0%;在分析儀檢測(cè)范圍3%—20%范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果的線性相關(guān)系數(shù)r不小于0.9900;攜帶污染率不大于3.0%;開(kāi)機(jī)穩(wěn)定后8h內(nèi)，檢測(cè)同一正常樣本結(jié)果的相對(duì)偏差不超過(guò)±3.0%。以上幾點(diǎn)證明其在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)擁有良好性能。

市面上的全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀一般都具有良好的實(shí)驗(yàn)室精密度和室內(nèi)重復(fù)性，但臨床結(jié)果可能各不相同。本臨床研究旨在觀察、評(píng)價(jià)愛(ài)科來(lái)醫(yī)療科技（平湖）有限公司與日本東曹株式會(huì)社分別研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑，評(píng)估其臨床結(jié)果上的一致性，同時(shí)判斷國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口分析系統(tǒng)間的差距，以期更好的服務(wù)于臨床科室。

1.材料與方法

1.1材料

1.1.1樣本

按照試驗(yàn)方案要求，在天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院、天津市第二人民醫(yī)院兩家臨床單位試驗(yàn)總樣本數(shù)不低于240例全血樣本及其同樣的溶血樣本。樣本均來(lái)自于2017年2月至5月，兩家機(jī)構(gòu)的臨床科室檢驗(yàn)剩余樣本。

入選標(biāo)準(zhǔn)：年齡在18歲以上，性別不限，隨機(jī)入組;不得使用碘醋酸抗凝劑的血液樣本，可以使用肝素、EDTA-2Na、EDTA-2K、EDTA-3K、NaF等抗凝劑;全血狀態(tài)下2-8℃冷藏保存3-4日，不使用去除血漿的樣本。

排除標(biāo)準(zhǔn)：樣本信息不全或樣本量不足以完成全部試驗(yàn)的;微生物污染的樣本;不符合樣本采集和處理要求的樣本。

剔除標(biāo)準(zhǔn)：絕對(duì)偏倚分析和相對(duì)偏倚分析均超出限定（參照NCCLS-EP9-A2要求）[3]。

1.1.2試驗(yàn)設(shè)備

愛(ài)科來(lái)醫(yī)療科技（平湖）有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀（型號(hào)：HA-8180）（注冊(cè)證編號(hào)：浙械注準(zhǔn)20172401149），配套試劑為：糖化血紅蛋白分析用洗脫液ELUENT 80A、ELUENT 80B、80H等。

日本東曹株式會(huì)社生產(chǎn)的Tosoh Automated Glycohemoglobin Analyzer （全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀）（型號(hào)：HLC-723G8）（注冊(cè)證編號(hào)：國(guó)食藥監(jiān)械（進(jìn)）字2014第2402004號(hào)），配套試劑為：洗脫緩沖液G8-第1液、G8-第2液、G8-第3液、溶血-洗凈液等;

1.2試驗(yàn)倫理及方法

該臨床試驗(yàn)分別通過(guò)天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)、天津市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究倫理委員會(huì)倫理審查。選取檢驗(yàn)科剩余血液樣本，同時(shí)在兩臺(tái)分析系統(tǒng)上檢測(cè)HbA1c，以HbA1c≥6.5%作為診斷糖尿病的判斷依據(jù)，收集數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本臨床試驗(yàn)由兩家機(jī)構(gòu)主要研究者負(fù)責(zé)，與愛(ài)科來(lái)醫(yī)療科技（平湖）有限公司共同制定臨床試驗(yàn)方案。按照要求，人員培訓(xùn)完成后，開(kāi)始進(jìn)行驗(yàn)證。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行，符合說(shuō)明書結(jié)果判定條件的情況時(shí)，待測(cè)樣本結(jié)果成立。出現(xiàn)和預(yù)期結(jié)果不相符時(shí)，立即停止試驗(yàn)，待查明原因后，繼續(xù)進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)束，由專人進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、整理、核對(duì)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)匯總并通過(guò)SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件按照定性結(jié)果及定量結(jié)果，分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其中定性結(jié)果分析計(jì)算卡方（McNemar檢驗(yàn)）值、Kappa值，定量結(jié)果分析計(jì)算線性相關(guān)性。

將以下幾點(diǎn)作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：卡方分析（McNemar檢驗(yàn)）大于0.05、kappa值大于0.75、線性相關(guān)分析r2>0.95，以此來(lái)評(píng)價(jià)兩個(gè)分析系統(tǒng)間的臨床一致性。同時(shí)，以臨床試驗(yàn)過(guò)程中是否出現(xiàn)不良事件作為安全性評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.結(jié)果

2.1全血樣本

臨床試驗(yàn)兩家臨床單位共入組270例全血樣本，其中代謝病醫(yī)院有一樣本信息記錄不清晰導(dǎo)致原始結(jié)果不可信，予以排除;天津第二人民醫(yī)院一例樣本檢測(cè)時(shí)系統(tǒng)傳輸問(wèn)題導(dǎo)致全血結(jié)果不可信，予以排除。故共有268例全血樣本入組。

2.1.1定性結(jié)果分析

2.1.1.1卡方檢驗(yàn)（McNemar檢驗(yàn)）

卡方檢驗(yàn)中的McNemar檢驗(yàn)，p=0.375，>0.05，表明假設(shè)H0成立，兩種分析系統(tǒng)在檢測(cè)HbA1c含量時(shí)，結(jié)果沒(méi)有差異。

2.1.1.2 KAPPA檢驗(yàn)

KAPPA檢驗(yàn)結(jié)果為0.962，>0.75，兩種分析系統(tǒng)在檢測(cè)HbA1c含量時(shí)，結(jié)果高度一致。

2.1.2定量結(jié)果分析

2.1.2.1 線性相關(guān)性

通過(guò)作散點(diǎn)圖，計(jì)算得線性回歸的方程為：Y=0.974X+0.041，相關(guān)系數(shù)r2為0.997。

2.2溶血樣本

臨床試驗(yàn)兩家臨床單位共入組270例溶血樣本，另外有一例以伯樂(lè)高值質(zhì)控品配制的溶血樣本，共271例樣本。其中代謝病醫(yī)院有1樣本信息記錄不清晰導(dǎo)致原始結(jié)果不可信，予以排除;天津市第二人民醫(yī)院5例樣本檢測(cè)時(shí)儀器故障導(dǎo)致溶血結(jié)果未檢出，予以剔除。故共有265例溶血樣本入組。

2.2.1定性結(jié)果分析

2.2.1.1卡方檢驗(yàn)（McNemar檢驗(yàn)）

卡方檢驗(yàn)中的McNemar檢驗(yàn)，p=0.063，>0.05，表明假設(shè)H0成立，兩種分析系統(tǒng)在檢測(cè)HbA1c含量時(shí)，結(jié)果沒(méi)有差異。

2.2.1.2 KAPPA檢驗(yàn)

KAPPA檢驗(yàn)結(jié)果為0.962，>0.75，兩種分析系統(tǒng)在檢測(cè)HbA1c含量時(shí)，結(jié)果高度一致。

2.2.2定量結(jié)果分析

2.2.2.1 線性相關(guān)性

通過(guò)作散點(diǎn)圖，計(jì)算得線性回歸的方程為：Y=0.984X+0.143，相關(guān)系數(shù)r2為0.998。

3.討論

本次臨床試驗(yàn)實(shí)際完成樣本共計(jì)為270例。經(jīng)過(guò)樣本分析，排除或剔除了不合格樣本后，全血樣本、溶血樣本經(jīng)過(guò)兩個(gè)分析系統(tǒng)間的試驗(yàn)結(jié)果比較，兩者的檢測(cè)結(jié)果一致性很好。其結(jié)果總結(jié)如下：

通過(guò)本臨床試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，可以看到兩種全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀在檢測(cè)HbA1c含量時(shí)，具有較高的一致性，且臨床試驗(yàn)期間未出現(xiàn)不良事件和其他安全性事件。由此可以看到，以以上兩款為代表的國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口分析系統(tǒng)在檢測(cè)HbA1c含量時(shí)結(jié)果高度一致，可為臨床科室選擇該種分析系統(tǒng)提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] ?中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì).中國(guó)2型糖尿病防治指南（2010年版）[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志，2011，3（6）：54-109.

[2] ?宋銀丹，段勇.糖化血紅蛋白檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化的研究進(jìn)展[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，31（2）：108-110.

[3] Clinic and Laboratory Standards Institute.Method comparison and bias estimation using patient sample;approverd guideline，EP9-A[S].Wanye，PA，USA：CLSI，1995.

作者簡(jiǎn)介：

吳玲麗（1993.04），性別：女，民族：漢族，籍貫（精確到市）：浙江省嘉興市，當(dāng)前職務(wù)：科員，當(dāng)前職稱：助理工程師，學(xué)歷：本科，研究方向：生物醫(yī)學(xué)工程.