蔡正旺 劉靜

摘要：以絞股藍(lán)（Gynostemma pentaphyllum）莖段為外植體，以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過添加不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，篩選誘導(dǎo)愈傷組織增殖、芽分化以及生根的最適培養(yǎng)基。結(jié)果表明，絞股藍(lán)最適愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS+ 2，4-D 2.O m～L+ NAA 0.01 mg/L，愈傷組織體積增加2.7倍;最適芽分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，平均生芽數(shù)為5.7;最適生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基添加0.1 mg/L NAA，生根率為91%。

關(guān)鍵詞：絞股藍(lán)（Cyno.stemma pentaphyllum）;愈傷組織;增殖;分化

中圖分類號(hào)：Q942.6

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（ 2020） 08-0158-03

D01：10.1408 8/j .cnki.issn0439-8 114.2020.08.036

絞股藍(lán)（Gvno.stemma pentaphyllum）別稱葉膽、七葉參、五葉參、小苦藥等，為多年生宿根植物，隸屬于葫蘆目（ Cucurbitales）葫蘆科（Gucurbitceae）絞股藍(lán)屬（Cynostemma），廣泛分布于亞熱帶和北亞熱帶地區(qū)[1]。絞股藍(lán)具有較高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值，其莖葉中含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素類、有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸、多種皂苷以及多種微量元素等成分[2，3]。目前，人們普遍采用種子繁殖、分株繁殖、扦插繁殖等方法擴(kuò)大資源，但這些方法各有不同的缺點(diǎn)，對(duì)絞股藍(lán)進(jìn)行快速繁殖研究很有必要。研究表明，絞股藍(lán)具有降血脂、降低血糖、抗腫瘤、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)肝臟增強(qiáng)、機(jī)體免疫功能等效果[4-6]。劉世彪等[7]和劉曉燕[8]對(duì)絞股藍(lán)進(jìn)行了快速繁殖研究。

本研究采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，建立了絞股藍(lán)組培快繁體系，對(duì)擴(kuò)大種植、加速絞股藍(lán)的開發(fā)利用、解決絞股藍(lán)資源匱乏等具有現(xiàn)實(shí)意義。通過不同配比植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑篩選出誘導(dǎo)愈傷組織增殖、芽分化及生根的最適培養(yǎng)基，可以縮短絞股藍(lán)育種時(shí)間，起到快速繁殖作用，短期內(nèi)得到品質(zhì)優(yōu)良的絞股藍(lán)種苗，可為大規(guī)模種植絞股藍(lán)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1材料

絞股藍(lán)原材料取自陜西省平利縣，取其幼嫩莖段。

1.2方法

1.2.1 絞股藍(lán)愈傷組織的誘導(dǎo)取長(zhǎng)3-5 cm絞股藍(lán)幼嫩莖段，流水沖洗3-4 h，然后在無(wú)菌條件下用75%乙醇溶液消毒30 s，再用0.1%升汞溶液浸泡7-10 min，最后用無(wú)菌水清洗3-5次，在超凈工作臺(tái)上將滅菌后的莖段切成0.5-1.0 cm，接人培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

以絞股藍(lán)莖段為外植體，培養(yǎng)基采用MS+6-BA l.0 mg/ L+NAA 0.02 mg/L，誘導(dǎo)愈傷組織，每瓶接種3-4個(gè)外植體。接種后置于溫度為（25+2）℃、弱光培養(yǎng)30d。培養(yǎng)基以8 g/L的瓊脂固化，添加3%的蔗糖，pH調(diào)節(jié)至5.8。

1.2.2絞股藍(lán)愈傷組織的增殖將愈傷組織接種于含有不同濃度配比植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（6-BA、NAA、KT、2，4-D）的增殖培養(yǎng)基中（表1），培養(yǎng)條件同上，培養(yǎng)時(shí)間30 d。

1.2.3絞股藍(lán)愈傷組織的芽分化將絞股藍(lán)愈傷組織接種在不同培養(yǎng)基上，每個(gè)處理接種10瓶，每瓶3-4個(gè)外植體，比較不同濃度6-BA、NAA組合（表2）對(duì)愈傷組織芽分化的影響。培養(yǎng)條件同上，30 d后統(tǒng)計(jì)平均分化芽數(shù)，觀察芽的長(zhǎng)勢(shì)。平均分化芽數(shù)=誘導(dǎo)的不定芽總數(shù)/接種愈傷組織總數(shù)。

1.2.4絞股藍(lán)生根壯苗愈傷組織誘導(dǎo)出芽后，待芽長(zhǎng)至3-5 cm時(shí)，挑選生長(zhǎng)狀況一致的苗，接種在不同處理生根培養(yǎng)基中（表3），每個(gè)處理接種10瓶，每瓶3-4個(gè)外植體，培養(yǎng)條件同上。接種30 d時(shí)統(tǒng)計(jì)生根率、根的長(zhǎng)勢(shì)。生根率=生根的芽數(shù)/接種的總芽數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度配比植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)絞股藍(lán)愈傷組織增殖的影響

觀察發(fā)現(xiàn)愈傷組織多為淡綠色、淡黃色，質(zhì)地較為致密（圖la），部分愈傷組織體積增長(zhǎng)不明顯，不定芽生長(zhǎng)較為旺盛（圖lb）。結(jié)果（表4）表明，不同濃度配比的6-BA、NAA、2，4-D、KT對(duì)絞股藍(lán)愈傷組織的增殖有較大的影響。細(xì)胞分裂素含量高的培養(yǎng)基，愈傷組織體積增長(zhǎng)明顯，細(xì)胞分裂素含量低的培養(yǎng)基，如處理3與處理4，愈傷組織幾乎沒有增殖，NAA濃度為0.01-0.05 mg/L時(shí)，愈傷組織增殖明顯;6-BA、2，4-D、KT濃度為2 mg/L時(shí)，愈傷組織增殖明顯。在8種培養(yǎng)基中，處理7愈傷組織增殖倍數(shù)最大，愈傷組織淡黃色或白色，質(zhì)地致密，生長(zhǎng)旺盛，平均體積增長(zhǎng)倍數(shù)為2.7。

2.2不同濃度配比植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)絞股藍(lán)愈傷組織芽分化的影響

將增殖的愈傷組織接種于分化培養(yǎng)基中，部分愈傷組織分化的芽數(shù)較多，翠綠，有個(gè)別分化芽生長(zhǎng)旺盛（圖2a）。部分愈傷組織只長(zhǎng)出0.5-1.0 cm長(zhǎng)較細(xì)的根，無(wú)不定芽長(zhǎng)出（圖2b）。結(jié)果（表5）表明，不同濃度配比的6-BA、NAA對(duì)絞股藍(lán)愈傷組織的芽分化有較大的影響。6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí)，平均生芽數(shù)較高;6-BA濃度為3.0 mg/L時(shí)，平均生芽數(shù)較低;6-BA濃度為1.0 mg/L時(shí)無(wú)不定芽長(zhǎng)出，僅長(zhǎng)出大量0.5-1.0 cm長(zhǎng)的根。處理2培養(yǎng)基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L平均分化芽數(shù)最多。

2.3不同濃度配比植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)絞股藍(lán)生根的影響

將絞股藍(lán)愈傷組織根分化良好的幼苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，17 d后開始生根，30d后部分根較粗且長(zhǎng)，生有較多根毛（圖3a），有的根細(xì)而長(zhǎng)（圖3b），也有幼苗沒有生根。結(jié)果（表6）表明，MS、1/2 MS和1/4 MS基本培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)不定芽生根，但生根率和根的長(zhǎng)勢(shì)有差異，其中MS培養(yǎng)基添加0.1 mg/LNAA誘導(dǎo)的根長(zhǎng)勢(shì)旺盛，苗長(zhǎng)勢(shì)良好，生根率達(dá)到9l%。

3小結(jié)與討論

絞股藍(lán)愈傷組織增殖最適培養(yǎng)基為MS+2，4-D 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L。2，4-D對(duì)絞股藍(lán)愈傷組織增殖的作用較好，能形成質(zhì)地較為致密的愈傷組織。6-BA和KT對(duì)絞股藍(lán)愈傷組織的增殖都有積極作用。絞股藍(lán)愈傷組織芽分化的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。劉世彪等[7]研究表明莖尖愈傷組織叢生芽分化最適培養(yǎng)基為MS+BA l.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，武蕓等[9]研究認(rèn)為愈傷組織芽分化的適宜培養(yǎng)基MS+BA l.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。絞股藍(lán)幼苗生根最適培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基添加較低濃度的NAA，生長(zhǎng)素濃度過高不利于根的生長(zhǎng)。武蕓等[9]的研究發(fā)現(xiàn)恩五葉蜜甜味絞股藍(lán)生根的最適培養(yǎng)基是1/2 MS+NAA l.0mg/L+PPP3330.2 mg/L。劉世彪等[10]研究認(rèn)為廣西絞股藍(lán)最適的生根培養(yǎng)基為MS+NAA 0.2 mg/L。

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基金項(xiàng)目：安康學(xué)院高層次人才啟動(dòng)項(xiàng)目（AYQDZR2叭212）

作者簡(jiǎn)介：蔡正旺（1977-），男，陜西安康人，講師，碩士，主要從事生物資源及植物科學(xué)等有關(guān)的教學(xué)及科研T作，（電話）13772223205（電子信箱）707083838@qq.com。