姜武，詹建勇，商建宏，童健全，吳志剛，陶正明*

(1.浙江省亞熱帶作物研究所，浙江 溫州 325005； 2.淳安縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江 淳安 311701；3.淳安縣中藥材發(fā)展服務(wù)中心，浙江 淳安 311701)

重樓是百合科(Liliaceae)多種植物的統(tǒng)稱，為我國(guó)特有的名貴藥材，2015版《中華人民共和國(guó)藥典》僅收載滇重樓(Parispolyphyllavar.yunnanensis)和七葉一枝花(Parispolyphyllavar.chinensis)為藥材重樓的基原植物[1]。七葉一枝花又名華重樓，主要分布在湖北、湖南、江西、貴州、浙江等長(zhǎng)江中下游地區(qū)[2]。重樓以干燥根莖入藥，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚等功效，民間多用于治療無(wú)名腫毒和毒蛇咬傷[3]。重樓具有廣闊的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景，是云南白藥系列、宮血寧等多種中成藥的主要原料。近年來(lái)需求量逐年增加，現(xiàn)有藥源遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需要，加之主產(chǎn)區(qū)亂采濫挖，忽視對(duì)重樓資源的保護(hù)和繁育，野生種質(zhì)資源遭到嚴(yán)重破壞[4]。重樓是當(dāng)前浙江省林下經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要栽培品種。中藥材種子種苗是決定中藥材質(zhì)量的內(nèi)在因素，是中藥材規(guī)范化生產(chǎn)的保證[5]。重樓近年來(lái)的需求量大，而重樓種子休眠時(shí)間長(zhǎng)，需經(jīng)2冬1夏才能萌發(fā)，且自然萌發(fā)率低，種子從萌發(fā)到入藥需要5～10 a左右，資源再生困難，實(shí)現(xiàn)重樓的快速繁育是當(dāng)前亟須解決的難題。因此，人工打破重樓種子休眠提高萌發(fā)率是實(shí)現(xiàn)重樓大量繁育的關(guān)鍵。本試驗(yàn)以不同濃度赤霉素處理華重樓種子，在120 d內(nèi)統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，并測(cè)定內(nèi)源性赤霉素和脫落酸含量，以期為浙產(chǎn)華重樓種子的萌發(fā)及種子育苗關(guān)鍵技術(shù)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2019年8月份采集成熟浙江產(chǎn)華重樓種子(圖1)，樣品經(jīng)浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院專家鑒定為七葉一枝花。挑選浙產(chǎn)華重樓(七葉一枝花)大小一致、無(wú)病害與損傷的成熟種子為試驗(yàn)材料，處理前統(tǒng)一去除紅色外種皮。

圖1 供試華重樓的種子

1.2 處理設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)7個(gè)赤霉素濃度處理，分別為0(CK)、100、200、300、400、500和600 mg·L-1。具體方法，將去種皮后的種子在(25±2)℃泡水12 h，再用10%稀H2SO4浸泡12 h后用純凈水沖洗干凈。分別于不同赤霉素濃度在(25±2)℃條件下浸種36 h，取出后清水清洗，與3倍體積噴施多菌靈的沙子混合，進(jìn)行變溫處理2～25～4～25 ℃各24 h，然后讓其萌發(fā)。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目

萌發(fā)率。分別于30、40、60、90、120 d調(diào)查各濃度處理的種子萌發(fā)率，標(biāo)準(zhǔn)以長(zhǎng)出胚根為準(zhǔn)。

內(nèi)源性赤霉素和脫落酸。測(cè)定500 mg·L-1赤霉素處理和對(duì)照種子在萌發(fā)0、30、60、90 d的內(nèi)源性赤霉素和脫落酸。采用高效液相色譜法，Agilent Technologies 1200 Series色譜儀，C18色譜柱，柱溫 35 ℃，進(jìn)樣量10 μL，流速0.8 mL·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流動(dòng)相：甲醇∶乙腈∶0.6%乙酸水溶液50∶5∶45。

2 結(jié)果與分析

2.1 種子萌發(fā)率

如表1所示，100～600 mg·L-1赤霉素處理對(duì)華重樓種子的萌發(fā)均有不同程度的促進(jìn)作用。500 mg·L-1赤霉素處理的萌發(fā)率最高，對(duì)萌發(fā)具有顯著的促進(jìn)作用，且隨著萌發(fā)天數(shù)的增加，萌發(fā)率比對(duì)照增加也越多，120 d時(shí)為85.7%，比對(duì)照的34.7%，高51.0百分點(diǎn)；400 mg·L-1處理效果次之。顯示500 mg·L-1赤霉素有利于打破華重樓種子休眠，提高萌發(fā)率。

表1 不同赤霉素濃度對(duì)華重樓種子萌發(fā)率影響表

2.2 對(duì)內(nèi)源激素含量的影響

由表2可知，內(nèi)源赤霉素含量500 mg·L-1處理隨時(shí)間的增加呈上升趨勢(shì)，而對(duì)照則呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)；赤霉素處理顯著高于對(duì)照；90 d時(shí)含量達(dá)480.38 ng·g-1，而對(duì)照僅為390.28 ng·g-1。表明外源赤霉素的施用可促進(jìn)華重樓種子內(nèi)源赤霉素的合成。

表2 華重樓種子萌發(fā)過(guò)程中內(nèi)源赤霉素含量變化

由表3可知，種子萌發(fā)過(guò)程中內(nèi)源脫落酸含量會(huì)下降，且500 mg·L-1赤霉素處理內(nèi)源脫落酸含量下降幅度比對(duì)照更大。90 d時(shí)，赤霉素處理內(nèi)源脫落酸含量為5.28 ng·g-1，比0 d下降6.58 ng·g-1；而同期對(duì)照僅下降4.93 ng·g-1。表明外源赤霉素的施用可有效促進(jìn)華重樓種子內(nèi)源脫落酸的分解。

表3 華重樓種子萌發(fā)過(guò)程中內(nèi)源脫落酸含量變化

2.3 種子萌發(fā)的關(guān)鍵技術(shù)

采用成熟華重樓種子，去除紅色假種皮，清水浸泡24 h，再用10%稀H2SO4浸泡24 h后洗凈，在25 ℃下用500 mg·L-1赤霉素浸泡36 h，取出種子與3倍體積的沙子混合，采取2～25～4～25 ℃變溫處理各24 h，25 ℃沙藏1周后播種。育苗基質(zhì)主要成分為腐殖土、椰糠、腐熟有機(jī)肥(3∶1∶1)，鋪在苗床上厚2.0～2.5 cm，保持苗床濕度65%～70%，遮陰度65%～70%，出苗后及時(shí)除草，翌年4月份噴灑多菌靈2～3次，輔以植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。

3 小結(jié)與討論

種子內(nèi)激素含量反應(yīng)種子的萌發(fā)狀態(tài)，赤霉素可誘導(dǎo)物質(zhì)與能量代謝相關(guān)水解酶的合成與分泌，脫落酸則具有抑制種子萌發(fā)和胚芽鞘伸長(zhǎng)的效應(yīng)，兩者具拮抗作用。赤霉素與脫落酸比值越大，越能促進(jìn)種子的萌發(fā)和胚芽鞘的伸長(zhǎng)。試驗(yàn)結(jié)果表明，500 mg·L-1赤霉素有利于打破華重樓種子休眠，提高萌發(fā)率，且證明外源赤霉素的施用可促進(jìn)華重樓種子內(nèi)源赤霉素的合成和內(nèi)源脫落酸的分解。

重樓育苗技術(shù)研究與推廣，既可拯救瀕危野生資源，又能滿足市場(chǎng)及社會(huì)需要，良好的示范推廣可為山區(qū)農(nóng)民勞動(dòng)力就業(yè)提供一條新途徑。按照目前市場(chǎng)價(jià)格，重樓種苗1.2～2.5元·株-1，重樓塊根約1 600元·kg-1(干品)，不管是種苗銷售還是留種栽種，均有較好的經(jīng)濟(jì)效益。試驗(yàn)結(jié)果可為浙江山區(qū)發(fā)展林下重樓藥材種子育苗技術(shù)提供理論依據(jù)。