王 鶴，劉 磊，任立煥，侯金才

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430)

體力疲勞是人們生活中常見的癥狀，易疲勞人群廣泛，抗疲勞食品市場需求大。在我國，抗疲勞保健食品在保健食品市場中占據(jù)著相當(dāng)大的份額。疲勞已成為國內(nèi)外關(guān)注的病癥和研究的熱點(diǎn)。多種中藥具有抗疲勞作用[1-3]，西洋參性涼、味甘、微苦，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)西洋參提取物具有抗疲勞、抗氧化、抗應(yīng)激、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)血糖等作用。西洋參中的皂苷類成分可有效增強(qiáng)中樞神經(jīng)興奮性，達(dá)到靜心凝神、消除疲勞、增強(qiáng)記憶力之功效[4-7]。淫羊藿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，又稱仙靈脾，李時(shí)珍在《本草綱目》中稱其有“益精氣，堅(jiān)筋骨，補(bǔ)腰膝，強(qiáng)心力”之功效。淫羊藿中不同活性成分能在提高機(jī)體免疫能力、增加骨代謝能力、增強(qiáng)心肌收縮力、改善心腦血管血液循環(huán)以及抗氧化、抗腫瘤等方面具有重要的作用，并且能夠促進(jìn)睪酮的分泌，具有雄激素樣作用。淫羊藿在延緩疲勞的發(fā)生、促進(jìn)疲勞的恢復(fù)、提高運(yùn)動能力方面具有重要的功效[8-12]。紅景天補(bǔ)氣清肺、益智養(yǎng)心、散瘀消腫，具有增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶、改善心腦血管系統(tǒng)、抗疲勞、耐缺氧、抗衰老、增強(qiáng)免疫、抗病毒及保護(hù)臟器的作用。紅景天提取物已被證實(shí)可在細(xì)胞水平表現(xiàn)出抗疲勞功效[13-16]。雪蓮培養(yǎng)物富含黃酮類物質(zhì)，含量高達(dá)10%以上，多酚、紫丁香甙、綠原酸、1，5-二咖啡?？崴岬乃幮Ш恳策h(yuǎn)遠(yuǎn)高于野生型天山雪蓮。已經(jīng)被證實(shí)的功效包括：抗輻射、抗疲勞、抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫力、抗氧化、提高骨密度、調(diào)血脂、抑菌等[17-20]。

結(jié)合市場需求，我公司根據(jù)現(xiàn)代科學(xué)理論結(jié)合傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論，選用西洋參提取物、淫羊藿提取物、紅景天提取物、雪蓮培養(yǎng)物為主要原料，配以適當(dāng)?shù)妮o料加工制成保健食品，研究其緩解體力疲勞作用。

1 材料與方法

1.1 樣品

西洋參淫羊藿片，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，每100 g含總皂苷2.0 g，淫羊藿苷1.9 g，紅景天苷320 mg，總黃酮4 g，人體推薦劑量為1.1 g/人/日。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供的雄性昆明種小鼠190只，生產(chǎn)許可證號：SCXK(陜)2018-001，體重18～22 g，SPF級。質(zhì)量合格證號：61001700003136(負(fù)重游泳、血乳酸試驗(yàn)和血清尿素試驗(yàn))，61001700003141(肝糖原試驗(yàn))。動物飼料、墊料均由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。試驗(yàn)動物房為屏障系統(tǒng)，使用許可證號為 SYXK(陜)2018-009，溫度20～25 ℃，相對濕度45%～65%。

1.3 主要儀器與試劑

電子天平(AL204)(梅特勒-托利多儀器有限公司);紫外可見分光光度計(jì)(UV-2550)(島津)；全自動生化分析儀(BS-420)(深圳邁瑞)；離心機(jī)(TG16-WS)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)；試劑盒(南京建成賽浩科技有限公司)；生化分析試劑(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.4 劑量設(shè)計(jì)及配制

將西洋參淫羊藿片設(shè)計(jì)為0.55 g/kg/BW、0.37 g/kg/BW、0.18 g/kg/BW三個(gè)劑量組，其劑量分別相當(dāng)于人體推薦用量的30倍、20倍、10倍，另設(shè)一個(gè)陰性對照組(蒸餾水)。樣品配制：準(zhǔn)確稱取受試樣品0.55 g、0.37 g、0.18 g分別加蒸餾水至20mL混合均勻，備用。

1.5 試驗(yàn)方法

預(yù)游泳后選姿勢正確雄性小鼠160只，共分4個(gè)試驗(yàn)組，每試驗(yàn)組用40只小鼠并隨機(jī)分為4小組，各試驗(yàn)組均設(shè)3個(gè)劑量組和1個(gè)陰性對照組，每組10只小鼠。試驗(yàn)一組為負(fù)重游泳試驗(yàn)，試驗(yàn)二組為血清尿素測定試驗(yàn)，試驗(yàn)三組為肝糖原測定試驗(yàn)，試驗(yàn)四組為血乳酸測定試驗(yàn)。按上述劑量每天經(jīng)口給予受試樣品1次，陰性對照組給予等容量的蒸餾水，灌胃容量為20 mL/kg/BW，連續(xù)30天。然后分別進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測定，方法如下。

1.5.1 負(fù)重游泳試驗(yàn) 末次給予受試樣品后30 min，置于游泳箱中游泳，水深35 cm，水溫25 ℃，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮。記錄各組小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間，作為小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進(jìn)行方差分析。死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠沉至游泳箱底并停止張口呼吸。若劑量組游泳時(shí)間明顯長于陰性對照組游泳時(shí)間，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的作用。

1.5.2 血清尿素測定 末次給予受試樣品后30 min，在溫度為30 ℃的水中不負(fù)重游泳90 min，休息60 min后拔眼球采血0.5 mL，分離血清后用全自動生化分析儀進(jìn)行血清尿素測定，各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進(jìn)行方差分析。若劑量組血清尿素含量明顯低于陰性對照組，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有減少疲勞小鼠尿素產(chǎn)生的作用。

1.5.3 肝糖原測定 末次給予受試樣品后30min處死動物，解剖取出肝臟，按試劑盒要求進(jìn)行肝糖原測定，各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進(jìn)行方差分析。若劑量組肝糖原含量明顯高于陰性對照組，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有促進(jìn)小鼠肝糖原儲備的作用。

1.5.4 血乳酸測定 末次給予受試樣品，30 min后采血，然后小鼠在30 ℃水中不負(fù)重游泳10 min，于游泳前、游泳后立即及游泳后休息20 min，分別3次采血(內(nèi)眥采血)測定血乳酸含量，以3個(gè)時(shí)間點(diǎn)血乳酸曲線下面積為指標(biāo)，將各劑量組結(jié)果與陰性對照組比較進(jìn)行方差分析。若劑量組血乳酸曲線下面積明顯小于陰性對照組，且差異顯著(P<0.05)，可判定該受試樣品有減小小鼠運(yùn)動后血乳酸曲線下面積的作用。

1.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 20.0軟件對各試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析方法以及多個(gè)試驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足“正態(tài)方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果

2.1 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)

由表1可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表2可見，各劑量組小鼠平均游泳時(shí)間較陰性對照組游泳時(shí)間均延長，且高劑量組與陰性對照組比較差異有顯著性(P<0.01)。結(jié)果表明，該樣品有延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的作用。

表1 樣品對小鼠體重的影響

表2 樣品對小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

2.2 小鼠血清尿素測定

由表3可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表4可見，高劑量組小鼠血清尿素含量與陰性對照組比較，差異有極顯著性(P<0.01)。結(jié)果表明，該樣品可減少疲勞小鼠尿素的產(chǎn)生。

表3 樣品對小鼠體重的影響

表4 樣品對小鼠血清尿素含量的影響

2.3 小鼠肝糖原測定

由表5可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表6可見，各劑量組小鼠肝糖原含量均高于陰性對照組，且高、中劑量組與陰性對照組比較均有極顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果表明，該樣品有促進(jìn)小鼠肝糖原儲備的作用。

表5 樣品對小鼠體重的影響

表6 樣品對小鼠肝糖原含量的影響

2.4 小鼠血乳酸測定

由表7可見，各劑量組小鼠各期體重及增重與陰性對照組比較，差異均無顯著性(P>0.05)。由表8可見，各劑量組與陰性對照組比較，血乳酸曲線下面積均無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果表明，該樣品對運(yùn)動后小鼠血乳酸含量無顯著作用。

表7 樣品對小鼠體重的影響

表8 樣品對小鼠運(yùn)動前、后血乳酸含量的影響

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明各劑量組與陰性對照組比較小鼠體重差異均無顯著性，可明顯延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，降低運(yùn)動后血清尿素含量，增加小鼠肝糖原的儲備量，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)中“緩解體力疲勞功能檢驗(yàn)方法”可以判定西洋參淫羊藿片具有緩解體力疲勞的功能，但本次小鼠血乳酸試驗(yàn)結(jié)果為陰性，因此該樣品緩解體力疲勞保健功能的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究探討。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為西洋參淫羊藿片在保健品和醫(yī)藥等方面進(jìn)一步的開發(fā)、利用提供了科學(xué)依據(jù)。