藍(lán)國兵 ，何自福 于 琳 湯亞飛 李正剛 鄧銘光 佘小漫

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所，廣東 廣州 510640；2.廣東省植物保護新技術(shù)重點實驗室，廣東 廣州 510640）

【研究意義】由新暗色柱節(jié)孢菌（Neoscytalidium dimidiatum）侵染引起的火龍果褐腐病（又稱潰瘍?。腔瘕埞a(chǎn)上最具毀滅性的真菌病害［1-2］。該病害已在以色列、馬來西亞、美國等多個國家為害［3-5］，輕則造成果皮“麻點”降低商品價值，重則導(dǎo)致整條莖稈和果實腐爛死亡，所造成的產(chǎn)量損失一般在20%～30%，嚴(yán)重時達(dá)50%以上，甚至毀園［6］。華南地區(qū)常年高溫高濕的氣候特點有利于火龍果褐腐病的暴發(fā)和流行，火龍果整個生長季均可受到該病為害，生產(chǎn)上亟需有效的防控技術(shù)?！厩叭搜芯窟M展】戊唑醇（tebuconazole）是一種高效、低毒、廣譜、內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑，具有保護、治療、鏟除三大功能，是一種麥角甾醇脫甲基化抑制劑，殺菌譜廣，活性高，且持效期長，對很多作物都比較安全，應(yīng)用前景廣闊，因而受到廣泛關(guān)注［7］。戊唑醇藥劑在生產(chǎn)上防治火龍果褐腐病已表現(xiàn)有良好的防治效果［8］?？┚妫╢ludioxonil）是一種結(jié)構(gòu)新穎的非內(nèi)吸性吡咯類殺菌劑，通過抑制葡萄糖磷?；嘘P(guān)的轉(zhuǎn)移，并抑制真菌菌絲體的生長，最終導(dǎo)致病菌死亡［9］?？┚婢哂懈咝?、廣譜、持效期長、用量少等特點，其作用機理獨特，與現(xiàn)有多數(shù)殺菌劑無交互抗性，因其良好的藥效一直被國內(nèi)外廣泛應(yīng)用［10-12］?？┚嫠巹瘕埞指【憩F(xiàn)出較高的抑菌活性和較長的抑菌持效期，但田間防治效果相對較差［8］。將作用機理不同的農(nóng)藥進行復(fù)配混用可提高殺菌活性、減少用藥量、延緩有害生物抗藥性等，從而減少農(nóng)藥對生態(tài)環(huán)境的污染?！颈狙芯壳腥朦c】化學(xué)防治是目前火龍果生產(chǎn)上防治褐腐病的主要方法，以具有內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑如戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、氟硅唑等為主［13-17］。然而，單一化學(xué)農(nóng)藥長期大面積使用易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性，而農(nóng)藥混配則具有擴大防治譜、降低成本、提高防治效果及延緩抗藥性產(chǎn)生等特點，因此利用現(xiàn)有農(nóng)藥進行混配已成為目前農(nóng)藥開發(fā)應(yīng)用的一個重要方面［18］。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究擬采用生長速率法，測定戊唑醇與咯菌腈不同配比下對火龍果褐腐病菌的混配增效作用，繼而評價其最佳配比下的制劑在田間的防效，以期為生產(chǎn)上火龍果褐腐病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌株：火龍果褐腐病菌株（N.dimidiatum）采自廣州市從化區(qū)（編號：DFCH8），由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所分離、鑒定和保存。

供試藥劑：95%戊唑醇原藥，江蘇常隆農(nóng)化有限公司生產(chǎn)；99%咯菌腈原藥，浙江博仕達(dá)作物科技有限公司生產(chǎn)；50%咯菌腈可濕性粉劑，瑞士先正達(dá)作物保護有限公司市售產(chǎn)品；430 g/L戊唑醇懸浮劑，拜耳股份公司市售產(chǎn)品。

1.2 試驗方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測定 采用菌絲生長速率法進行單劑藥劑的毒力測定［19］。用電子天平分別稱取戊唑醇和咯菌腈原藥，用丙酮稀釋成有效成分為1 000 mg/L的母液，備用。通過預(yù)備試驗，獲得2種藥劑對供試菌株菌絲抑菌率約10%～90%范圍內(nèi)的濃度區(qū)間，分別設(shè)置5個系列梯度濃度（戊唑醇 0.025、0.05、0.10、0.20、0.40 mg/L，咯菌腈 0.00625、0.0125、0.025、0.05、0.10 mg/L）。配制一系列梯度濃度的含藥PDA平板，然后在平板中央放置直徑為0.5 cm的供試菌株菌餅（供試菌株25 ℃活化4 d，取同一邊緣菌絲塊），以不含藥劑的PDA平板為空白對照。每個濃度3次重復(fù)，置于20 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算相對抑菌率：

應(yīng)用DPS軟件（版本7.05）求回歸方程y=bx+a、EC50值、相關(guān)系數(shù)等。戊唑醇和咯菌腈以有效成分質(zhì)量比9:1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8和1∶9復(fù)配，其毒力測定和計算方法同單劑。

采用Wadley法［20］計算復(fù)配藥劑增效系數(shù)（synergistic ratio, SR），評價復(fù)配藥劑的增效作用：SR＞1.5表示具有增效作用，0.5≤SR≤1.5表示具有相加作用，SR＜0.5表示具有拮抗作用。

式中，EC50（ob）（A）、EC50（ob）（B）分別表示復(fù)配劑中戊唑醇和咯菌腈的 EC50實測值，EC50（ob）、EC50（th）分別表示復(fù)配劑的EC50實測值和理論值，a、b分別表示戊唑醇和咯菌腈在復(fù)配劑中的百分含量（%），SR為增效系數(shù)。

1.2.2 田間藥效試驗 試驗地點及火龍果品種：試驗于2018年7—8月在廣東省紫金縣鳳安鎮(zhèn)回龍村進行，試驗地果園為平地，果園管理水平較差，火龍果褐腐病發(fā)生嚴(yán)重，果園病情壓力比較大。果園采用柱式栽培，每個水泥柱種植4株火龍果，每667 m2約120個水泥柱子。供試火龍果品種為紅肉紅皮火龍果，種植已有3年。

試驗設(shè)計及施藥方法：試驗設(shè)50%咯菌腈可濕性粉劑100、500 mg/kg，430 g/L戊唑醇懸浮劑100、500 mg/kg，45%戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑（戊唑醇和咯菌腈質(zhì)量比8∶2復(fù)配）100、500 mg/kg，以及清水對照7個處理。每個處理3次重復(fù)，每個重復(fù)20株火龍果（5個水泥柱），隨機區(qū)組排列。在火龍果嫩莖剛抽出時開始施藥，間隔10～13 d施1次藥，連續(xù)施藥3次。采用背負(fù)式電動噴霧器噴霧，每小區(qū)噴藥液量為4 L，對照噴施等量清水，全株噴霧均勻。

調(diào)查方法：于第3次施藥后7、15 d調(diào)查防效，主要調(diào)查嫩莖的發(fā)病情況，并對藥劑的安全性進行觀察。每小區(qū)調(diào)查全部水泥柱火龍果，每株火龍果調(diào)查5個嫩莖。調(diào)查時按病莖面積所占比例進行分級，統(tǒng)計病情指數(shù)和計算防效［8］。

表1 戊唑醇、咯菌腈對火龍果褐腐病菌室內(nèi)毒力測定結(jié)果Table 1 Results of in vitro toxicity of tebuconazole and fludioxonil against N. dimidiatum on pitaya

2 結(jié)果與分析

2.1 戊唑醇與咯菌腈的混配增效作用測定

毒力測定結(jié)果（表1）表明，咯菌腈和戊唑醇對火龍果褐腐病菌均表現(xiàn)出良好的抑菌效果，EC50值分別為0.0045、0.0671 mg/L，咯菌腈抑菌活性比戊唑醇抑菌活性高，戊唑醇EC50值與咯菌腈EC50值比值達(dá)14.91。戊唑醇與咯菌腈按質(zhì)量比為9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8和1∶9復(fù)配對火龍果褐腐病菌表現(xiàn)為加和作用，增效系數(shù)分別為0.97、1.15、1.15、1.03、1.08、0.97、0.84、0.86和0.89，其中戊唑醇與咯菌腈質(zhì)量比為8∶2和7∶3的增效系數(shù)值最大，增效系數(shù)均為1.15；戊唑醇與咯菌腈質(zhì)量比為3∶7的增效系數(shù)值最小，增效系數(shù)為0.84。

2.2 田間防治效果

病指調(diào)查結(jié)果（表2）顯示，清水對照第3次施藥后7 d火龍果嫩莖上褐腐病平均病情指數(shù)已達(dá)到24.89，第3次施藥后15 d平均病情指數(shù)達(dá)到34.37，均顯著高于藥劑處理的病情指數(shù)。噴施有效成分濃度為100 mg/kg和500 mg/kg的戊唑醇、咯菌腈及其復(fù)配藥劑均未觀察到對火龍果生長及果實有影響，未見產(chǎn)生藥害現(xiàn)象，確定在火龍果作物上使用安全。

試驗防效統(tǒng)計結(jié)果（表2）顯示，第3次施藥后7 d，45%戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑、50%咯菌腈可濕性粉劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑100 mg/kg濃度處理對火龍果褐腐病平均防效分別為80.31%、70.08%和80.24%；第3次施藥后15 d平均防效分別為76.80%、54.53%和74.63%；第3次施藥后7 d，45%戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑、50%咯菌腈可濕性粉劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑500 mg/kg濃度處理對火龍果褐腐病平均防效分別為89.44%、76.29%和89.71%；第3次施藥后15 d平均防效分別為83.63%、65.24%和81.22%。戊唑醇、咯菌腈及其復(fù)配藥劑對火龍果褐腐病的防效隨施藥濃度升高，防效提高，隨調(diào)查時間延長，防效下降，其中咯菌腈單劑100 mg/kg和500 mg/kg濃度處理末次藥后15 d的防效僅分別為54.53%和65.24%，防效下降明顯。戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑100 mg/kg和500 mg/kg濃度處理的防效略高于同等濃度戊唑醇單劑的防效，二者差異均不顯著，而戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑100 mg/kg和500 mg/kg濃度處理的防效均顯著高于同等濃度咯菌腈單劑的防效。

表2 戊唑醇和咯菌腈復(fù)配對火龍果褐腐病田間防效Table 2 Field control efficacy of tebuconazole and fludioxonil compound against N. dimidiatum on pitaya

3 討論

火龍果褐腐病是火龍果生產(chǎn)上的主要病害，在抗病品種缺乏的情況下，選擇適當(dāng)殺菌劑并進行科學(xué)復(fù)配是防治火龍果褐腐病的重要措施之一。本研究聯(lián)合毒力測定顯示，咯菌腈和戊唑醇不同質(zhì)量比復(fù)配對火龍果褐腐病菌均表現(xiàn)為相加作用，沒有拮抗或增效作用，與胡偉群等［21］的研究結(jié)果不同，與劉青等［22］的研究結(jié)果部分相同。胡偉群等［21］將噻呋酰胺和咯菌腈復(fù)配后對水稻紋枯病菌均表現(xiàn)為增效作用。劉青等［22］將氟啶胺和咯菌腈以質(zhì)量比1∶5、3∶2復(fù)配時對草莓灰霉病菌表現(xiàn)為增效作用，質(zhì)量比1∶1、1∶3、2∶3、2∶1、3∶1、4∶1復(fù)配時對草莓灰霉病菌表現(xiàn)為相加作用，但以質(zhì)量比5∶1復(fù)配時表現(xiàn)為拮抗作用。這說明咯菌腈與不同藥劑復(fù)配具有拮抗、相加、增效等作用。

室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，咯菌腈對火龍果褐腐病菌的抑菌活性非常高，比戊唑醇的抑菌活性高近15倍，但在田間藥效試驗中防效比戊唑醇明顯要差，可能與以下因素相關(guān)：一是火龍果褐腐病菌具有主要為害幼嫩枝條和果實而很難侵染老熟枝條的特性；二是田間試驗中果園的病情壓力大，試驗主要調(diào)查藥劑對嫩莖的防效，而咯菌腈沒有內(nèi)吸活性，因此導(dǎo)致咯菌腈的田間防效比較差。戊唑醇具有能迅速被植物有生長力的部分吸收并主要向頂部轉(zhuǎn)移的特性［18］，因而對火龍果嫩莖的防效比較明顯。同等使用濃度下，戊唑醇和咯菌腈復(fù)配的防效均比使用同等濃度單一藥劑的防效高，分析可能是咯菌腈高抑菌活性和長殘效期起到了壓低病菌侵染基數(shù)，以及戊唑醇良好的內(nèi)吸性有效地保護嫩莖免受病菌侵染。

戊唑醇與咯菌腈具有不同的作用機制，二者復(fù)配對火龍果褐腐病菌未表現(xiàn)出拮抗作用，且戊唑醇的價格遠(yuǎn)低于咯菌腈，兩者的復(fù)配既能充分利用咯菌腈高抑菌活性和戊唑醇良好內(nèi)吸性的特點，又能降低田間用藥成本，有利于延緩抗藥性產(chǎn)生，達(dá)到有效控制火龍果褐腐病為害的目的。戊唑醇與咯菌腈復(fù)配在火龍果上的殘留情況有待進一步研究。

4 結(jié)論

本研究通過生長速率法測定了戊唑醇、咯菌腈及其復(fù)配藥劑對火龍果褐腐病菌的室內(nèi)毒力，結(jié)果表明戊唑醇和咯菌腈對火龍果褐腐病菌均具有很高的抑菌活性，EC50值分別僅為0.0045、0.0671 mg/L。二者不同質(zhì)量比的復(fù)配藥劑對火龍果褐腐病菌也具有很高的抑菌活性，表現(xiàn)為加和作用。田間藥效試驗結(jié)果表明，戊唑醇對火龍果褐腐病具有良好的防治效果，平均防效最高達(dá)89.71%，顯著高于咯菌腈的防效，戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑對火龍果褐腐病的防效均比使用同等濃度單一藥劑的防效高。戊唑醇和咯菌腈在100 mg/kg和500 mg/kg有效成分使用濃度下在火龍果施用安全，未見產(chǎn)生藥害現(xiàn)象，二者復(fù)配藥劑在防治火龍果褐腐病上具有較好的應(yīng)用前景。