劉忠 周曉明 張永妍

宮頸癌是女性常見(jiàn)癌癥之一，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第3位，占女性癌癥總數(shù)的10%，2010年至2014年病死率每年增長(zhǎng)3%［1］。宮頸癌的治療包括根治性子宮切除術(shù)，化學(xué)療法或放射療法［2］。但根治性手術(shù)僅限早期宮頸癌患者，晚期患者通常由于病灶較大，局部出血、炎癥、壞死和子宮旁膜浸潤(rùn)而接受傳統(tǒng)治療，如放射治療而不是切除術(shù)。順鉑是治療各種惡性腫瘤的一線化療藥物［3］。在復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性疾病中，將順鉑與紫杉醇聯(lián)合使用是最常用的治療方案之一。PI3K/AKT信號(hào)通路涉及細(xì)胞存活和凋亡，腫瘤發(fā)生及進(jìn)展的幾個(gè)生物學(xué)過(guò)程。本文探討紫杉醇脂質(zhì)體聯(lián)合順鉑通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路對(duì)不同化療途徑治療宮頸癌的療效及安全性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇本院收治的宮頸癌患者64例，隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組與觀察組各32例。對(duì)照組：年齡36～61歲，平均年齡（46.8±2.3）歲。鱗癌17例，腺癌9例，鱗腺癌6例；Ⅰ期10例，Ⅱ～Ⅲ期13例，Ⅳ期9例。觀察組：年齡38～60歲，平均年齡（48.3±2.7）歲。鱗癌19例，腺癌8例，鱗腺癌5例。Ⅰ期11例，Ⅱ～Ⅲ期14例，Ⅳ期7例。兩組患者年齡和病理類(lèi)型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)組織病理學(xué)確診為宮頸癌；②患者尚未接受化療或其他治療；③患者預(yù)期生存>1年。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者腫瘤已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；②患者接受過(guò)化療。以上患者及其家屬均知曉并簽署同意書(shū)，本項(xiàng)目通過(guò)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 對(duì)照組采用靜脈滴注化療：對(duì)患者進(jìn)行預(yù)處理，通過(guò)肌肉注射苯海拉明40mg，靜脈推注地塞米松5mg，并靜脈滴注西咪替丁100mg，30min后以紫杉醇脂質(zhì)體（155mg/m2）靜脈滴注D1 30min，順鉑（75mg/m2）靜脈滴注D2，4周為1個(gè)療程，共治療2個(gè)療程。觀察組采用動(dòng)脈灌注化療：先穿刺股動(dòng)脈，進(jìn)行插管，開(kāi)始在盆腔動(dòng)脈進(jìn)行DSA造影，以患者腫瘤實(shí)際情況選擇插管型號(hào)，將明膠海綿栓塞的導(dǎo)管頭部置入腫瘤供血的血管內(nèi)，最后行動(dòng)脈灌注，用藥劑量與靜脈滴注一致，灌注完后拔管，穿刺口加壓包扎，平臥休息至少8h。

1.3 用qRT-PCR檢測(cè)PI3K、AKT mRNA表達(dá)水平 使 用 Trizol試 劑（Invitrogen，United States） 提取總RNA，根據(jù)檢測(cè)說(shuō)明，然后逆轉(zhuǎn)錄cDNA。ABI 7900系統(tǒng)中的 SYBR Green Premix Ex Taq II（Takara）用于定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（qRT-PCR），GAPDH作為內(nèi)部參考。采用2-ΔΔCT方法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)水平。

1.4 用Western blotting檢測(cè)PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白的表達(dá) 收集各患者化療后未進(jìn)食時(shí)的外周血，離心后獲得血清，通過(guò)電泳法從血清中獲得蛋白，并通過(guò)SDS-PAGE分離，然后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂乳封閉后。將膜用Tris緩沖鹽水（TBS）處理，并在4℃下暴露于一抗。此后，用適當(dāng)?shù)亩固幚砑?xì)胞，并通過(guò)增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑ECL將目的蛋白可視化。

1.5 臨床療效和安全性 根據(jù)WHO近期療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［4］：（1）完全治愈（CR）：體內(nèi)無(wú)腫瘤，完全治愈；（2）部分治愈（PR）：體內(nèi)腫瘤數(shù)量減少和腫瘤體積減少>50%；（3）病情穩(wěn)定（SD）：體內(nèi)腫瘤體積減少<50%或增加<原體積25%；（4）病情發(fā)展（PD）：體內(nèi)腫瘤體積>原體積25%或出現(xiàn)腫瘤擴(kuò)散。通過(guò)陰道鏡檢查確定患者體內(nèi)有無(wú)腫瘤。根據(jù)WHO化療［5］毒副作用分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)考察安全性：化療不良反應(yīng)大部分出現(xiàn)在消化系統(tǒng)胃腸道反應(yīng)，包括嘔吐、血便、腹瀉等；及肝腎功能損害、外周神經(jīng)炎、過(guò)敏反應(yīng)、骨髓抑制及免疫力下降。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以（）表示。兩組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較用方差分析；計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同化療途徑對(duì)PI3K、AKT mRNA表達(dá)的影響 兩組患者宮頸癌組織中PI3K、AKT mRNA的表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；觀察組患者PI3K、AKT mRNA的表達(dá)顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組PI3K、AKT mRNA表達(dá)比較（）

表1 各組PI3K、AKT mRNA表達(dá)比較（）

注：與癌旁組織比較，*P<0.05；與對(duì)照組比較，#P<0.05

組別 PI3K AKT觀察組癌組織 2.53±1.43*# 1.87±1.27*#對(duì)照組癌組織 4.42±2.11* 3.62±2.01*癌旁組織 1.23±0.26 0.53±0.16

2.2 不同化療途徑對(duì)PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表達(dá)的影響 兩組患者宮頸癌組織中PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白的表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；觀察組患者PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 各組PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表達(dá)比較

2.3 不同化療途徑對(duì)治療宮頸癌臨床療效的影響 觀察組臨床療效總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.86，P<0.05），見(jiàn)表2。觀察組5年無(wú)病生存期（DFS）高于對(duì)照組（P<0.05），見(jiàn)表3。觀察組遠(yuǎn)期療效5年生存率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表4、圖2。

表2 兩組宮頸癌患者臨床療效比較［n（%）］

表3 兩組患者無(wú)病生存率比較

表4 兩組患者遠(yuǎn)期療效比較［n（%）］

2.4 不同化療途徑對(duì)治療宮頸癌安全性的影響 兩組患者肝腎功能損害和外周神經(jīng)炎差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；觀察組不良反應(yīng)出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)、骨髓抑制及免疫能力下降低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表5。

表5 兩組宮頸癌患者的安全性比較［n（%）］

3 討論

宮頸癌占女性癌癥的10%，對(duì)女性的健康造成嚴(yán)重危害［6］。研究表明，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性腫瘤的預(yù)后相對(duì)較差，其一年生存率僅15%～20%［7］。將順鉑與紫杉醇聯(lián)合使用是最常用的治療方案之一。順鉑在腫瘤中的耐藥機(jī)制是多因素的，包括藥物代謝：轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的異常表達(dá)；細(xì)胞解毒機(jī)制：增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)解毒；基因水平：提高DNA修復(fù)能力，增強(qiáng)抑制細(xì)胞凋亡的能力［8］。目前已在較多種癌癥中發(fā)現(xiàn)了PI3K/AKT信號(hào)通路的激活［9］。AKT是一種在PI3K下游起作用的絲氨酸/蘇氨酸激酶，其是PI3K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵因素，也被稱(chēng)為蛋白激酶B（PKB）。其包含三種高度同源的亞型：AKT1（PKBa），AKT2（PKBb）和 AKT3（PKBc），在細(xì)胞存活和凋亡中起關(guān)鍵作用，在獲得性腫瘤抗藥性細(xì)胞傾向于增加AKT的激活［10］。相關(guān)研究表明，AKT過(guò)表達(dá)在化療過(guò)程中調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的耐藥性。如，在乳腺癌細(xì)胞中，耐藥細(xì)胞中的AKT1表達(dá)被激活［11］。AKT3是AKT家族中最關(guān)鍵的成員之一，其參與細(xì)胞增殖、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞分化和凋亡等過(guò)程。AKT3也與癌細(xì)胞的化學(xué)抗性有關(guān)。研究表明，敲除AKT3會(huì)增加遷移及乳腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性［12］。此外，AKT3的敲除還誘導(dǎo)A549肺癌細(xì)胞的線粒體功能障礙［13］，但宮頸癌細(xì)胞中AKT3表達(dá)的上調(diào)與臨床療效、安全性之間的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。本資料結(jié)果顯示，對(duì)照組和觀察組患者宮頸癌組織中PI3K、AKT mRNA和蛋白的表達(dá)高于癌旁組織，觀察組患者PI3K、AKT mRNA和蛋白的表達(dá)顯著低于對(duì)照組。

隨著化療藥物的不斷研發(fā)和改良，化療的給藥途徑也被研究者重視，不同的化療途徑可以顯示不同的臨床療效，對(duì)患者恢復(fù)期的安全性也有一定影響。采用適當(dāng)?shù)幕熗緩娇梢蕴岣吲R床療效且減輕患者后期的不良反應(yīng)，提高患者的存活期。本資料結(jié)果顯示，觀察組臨床療效總有效率顯著高于對(duì)照組，觀察組遠(yuǎn)期療效5年生存率顯著高于對(duì)照組，兩組患者的肝腎功能損害和外周神經(jīng)炎差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，觀察組不良反應(yīng)出現(xiàn)胃腸道反應(yīng)、過(guò)敏反應(yīng)、骨髓抑制及免疫能力下降的頻率低于對(duì)照組。提示，動(dòng)脈灌注可以有效提高化療療效和減少不良反應(yīng)，提高安全性。

綜上可知，PI3K/AKT信號(hào)通路參與宮頸癌的臨床療效和不良反應(yīng)過(guò)程，動(dòng)脈灌注作為化療途徑可以有效提高化療療效和減少不良反應(yīng)，提高安全性。