龍莉 黃琳蕓 黃瑞松

【摘 要】 目的：對瑤藥凍你美真?zhèn)舞b別提供技術(shù)支撐。方法：采用性狀鑒別、顯微鑒別和薄層鑒別的方法。結(jié)果：莖圓柱形，有縱棱，節(jié)間膨大，多分枝;卷須二歧分叉，與葉對生;葉展平后為鳥足狀復(fù)葉，小葉5;根、莖、葉黏液細(xì)胞含草酸鈣針晶束，莖薄壁細(xì)胞有草酸鈣簇晶。葉上、下表皮均有非腺毛。粉末可見非腺毛、草酸鈣針晶束、草酸鈣簇晶、纖維、具緣紋孔導(dǎo)管和螺紋導(dǎo)管。TLC色譜圖中，11批樣品與對照藥材在相同位置顯相同顏色的熒光斑點。結(jié)論：本方法穩(wěn)定可靠，可作為瑤藥凍你美藥材鑒別真?zhèn)蔚囊罁?jù)。

【關(guān)鍵詞】 凍你美;性狀鑒別;顯微鑒別;薄層鑒別

【中圖分類號】R931 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2020）10-0065-04

Abstract：Objective Provide technical support for the authenticity of Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.Methods The methods of character identification，micro-scipic identification，thin layerchromatography identification were used tostudy.Results Stem cylindrical， with longitudinal ribs， enlarged internodes， multibranched; tendril bifurcated， opposite to leaves;After the leaves are flattened， there are bird-foot compound leaves，leaflets 5，stem ，and leaf mucous cells contain calcium oxalate needle crystal bundles， and thin-walled stem cells have clusters of calcium oxalate.There are non-glandular hairs on the leaves and epidermis.Non-glandular hairs， calcium oxalate needle clusters， calcium oxalate clusters， fibers， bevelled ducts， and threaded ducts visible in powder.TLC chromatogram，eleven batches of samples showed the same color fluorescent spots at the same position as the control herbs.Conclusion This method is stable and reliable， It can be used as a basis for authenticity of Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.

Keywords：Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.;Trait Identification;Microsco-pic Identification;Thin Layer Identifcation

瑤語所稱“凍你美”或“巴腩美”，民間也稱為“母豬藤”，俗名紅凍你美、母豬菜、五葉藤、止血藤等。植物來源為葡萄科植物烏蘞莓Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.，廣西金秀、恭城瑤族民間多以全草作為藥材使用?，庒t(yī)認(rèn)為，凍你美味酸、苦，性寒;屬風(fēng)藥，具有清熱利濕、解毒消腫、活血止血、利尿的作用，主要用于治療肺癰、肺癆咯血、尿路感染、血尿、尿濁、黃疸肝炎、痛癥、無名腫毒、腮腺炎及風(fēng)濕骨痛、痢疾、跌打損傷、骨折、癰腫瘡癤、無名腫毒、乳癰[1～2]。近年來研究表明，凍你美含黃酮類、內(nèi)脂類、香豆素類和咖啡酸類等多種成分[3]。但有關(guān)其生藥鑒別的方法目前未見有報道，給臨床用藥造成一定的混亂。為科學(xué)辨別瑤藥凍你美藥材的真?zhèn)?，確保其臨床用藥的安全有效，本研究對瑤凍你美進行了藥材生藥學(xué)方面的研究，建立了該藥材性狀、顯微和薄層鑒別的方法，為該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供了技術(shù)支撐。

1 材料與儀器

1.1 材料 樣品采自南寧市武鳴區(qū)、靖西市城區(qū)等地區(qū)，樣品信息表見表1。所用樣品經(jīng)我院黃瑞松主任藥師、廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授、廣西中醫(yī)藥研究院黃云峰副研究員鑒定，為葡萄科植物烏蘞莓Cayratia japonica（Thunb.） Gagnep.

1.2 儀器 徠卡切片機（德國）、搖擺式粉碎機（浙江）、尼康高級生物顯微鏡及視頻成像裝置（日本）、數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）、紫外分析攝影儀（武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司）。

1.3 試劑 稀甘油（廣東光華科技股份有限公司）、水合氯醛（天津市大茂化學(xué)試劑廠）、無水乙醇（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、二甲苯（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、石蠟（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、藏紅T（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、固綠（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）、中性樹膠（中國上海標(biāo)本模型廠），薄層所用化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別 通過看、摸、聞、嘗及水試、火試的直觀方法觀察藥材的形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、氣、味等特征。通過對11批藥材進行觀察，藥材性狀為根圓柱形，扭曲，直徑可達(dá)2～3 cm，表面棕褐色至黑褐色，有縱皺紋，質(zhì)疏松，易折斷，斷面淺白色至黃白色。莖圓柱形，有縱棱紋，綠色至黃綠色，有分支，質(zhì)輕脆易折斷，折斷面髓部明顯，類白色，海綿狀或中空。卷須二岐分叉，與葉對生。葉皺縮易碎，深綠色或黃綠色，完整者展平后呈鳥足狀5小葉，中央小葉長橢圓形或橢圓披針形，長2.5～4.5 cm，寬1.5～4.5 cm，側(cè)生小葉橢圓形或長橢圓形，長1～7 cm，寬0.5～3.5 cm，邊緣具疏鋸齒;葉柄長1.5～10 cm，中央小葉柄長0.5～2.5 cm，側(cè)生小葉無柄或有短柄，側(cè)生小葉總柄長0.5～1.5 cm。氣微清香，味淡。見圖1。

2.2 顯微鑒別 選取具代表性根、莖、葉，用FAA固定液固定24 h。取出進行軟化處理，脫水，浸蠟，切片，染色和封固備用。將全株藥材打成粉末，取適量藥材粉碎過五號篩后按粉末制片法制作粉片，所有制片置于Ni-U尼康高級生物顯微鏡及視頻成像裝置觀察并拍攝成像。

2.2.1 根橫切面 呈不規(guī)則棱形，木栓層細(xì)胞數(shù)列，扁方形，有的已經(jīng)脫落。栓內(nèi)層窄，細(xì)胞類圓形，在棱角處有的有2～3個異型維管束分布。外韌型維管束環(huán)狀，韌皮部較寬，韌皮射線呈喇叭狀延伸至皮層，韌皮薄壁細(xì)胞與韌皮纖維相間排列。束間形成層明顯。木質(zhì)部較寬，導(dǎo)管單個或幾個相連放射狀分布，直徑30～200 μm，木射線細(xì)胞4～20余列。含草酸鈣針晶束的黏液細(xì)胞廣泛分布于皮層、韌皮部及射線組織中。見圖2。

2.2.2 莖橫切面 呈六棱狀或不規(guī)則多棱形，表皮細(xì)胞1列，方圓形。皮層窄，棱角處有厚角組織分布，有的薄壁細(xì)胞內(nèi)有棕黃色分泌物。外韌型維管束數(shù)個排列成環(huán)，維管束上方有大小不一的纖維束環(huán)狀排列;韌皮部較寬，韌皮薄壁細(xì)胞內(nèi)有的有棕黃色分泌物;木質(zhì)部由木薄壁細(xì)胞、導(dǎo)管和木纖維組成，導(dǎo)管單個或幾個相連放射狀分布，直徑20～180 μm，射線細(xì)胞3～10余列。髓部較寬，細(xì)胞類圓形。本品有的薄壁細(xì)胞內(nèi)存在草酸鈣簇晶，直徑12～21 μm，黏液細(xì)胞含草酸鈣針晶束，廣泛分布于皮層、髓部及射線組織中。見圖3。

2.2.3 葉橫切面 上下表皮細(xì)胞1列，長方形或方圓形，上、下表皮均有非腺毛;柵欄組織細(xì)胞1列，不通過主脈。主脈維管束1～7個，上方單個的維管束較小，外韌型，木質(zhì)部導(dǎo)管幾個相連放射狀排列，韌皮部較窄。中脈上下有2～3列厚角組織細(xì)胞。上表皮中脈尖凸，下表皮中脈凸出。中脈周圍及葉肉組織內(nèi)有含草酸鈣針晶束的黏液細(xì)胞散在。見圖4。

2.2.4 粉末鑒別 粉末灰綠色。纖維成束或分離，先端圓鈍或折斷，纖維壁較薄，直徑15～25 μm。非腺毛由2～10余個細(xì)胞組成，稍彎曲，壁薄，長12～395 μm，直徑18～33 μm。草酸鈣針晶束較多，成束散在或存在于黏液細(xì)胞內(nèi)，針晶長 80～160 μm;草酸鈣簇晶散在或存在于薄壁細(xì)胞內(nèi)，直徑6～65 μm。導(dǎo)管為具緣紋孔導(dǎo)管和螺紋導(dǎo)管，直徑30～120 μm。見圖5。

2.3 薄層鑒別 取11批本品樣品粉末各0.5 g，加50%乙醇10 ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加95%乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取凍你美對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部0502）試驗，吸取供試品溶液0.5～2 μL，對照藥材溶液2 μL分別點于同一聚酰胺薄層板上，以冰醋酸-水（5∶ 5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。見圖6。

3 討論

凍你美在是廣西瑤族民間常用藥材。為了確保該藥材臨床用藥的安全有效，有必要建立藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本實驗對凍你美進行生藥學(xué)鑒別研究。所建立的性狀、顯微、薄層鑒別方法操作簡便易行，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠，專屬性和重現(xiàn)性好，可作瑤藥凍你美鑒別真?zhèn)蔚囊罁?jù)。

通過以上實驗結(jié)果表明，藥材性狀鑒別點為卷須二歧分叉，與葉對生;葉皺縮，展平后為鳥足狀復(fù)葉，小葉5。顯微鑒別點為根、莖、葉的黏液細(xì)胞含草酸鈣針晶，莖薄壁細(xì)胞存在草酸鈣簇晶。粉末呈灰綠色。有非腺毛，草酸鈣針晶束較多，成束散在，或于黏液細(xì)胞內(nèi);草酸鈣簇晶散在或存在于薄壁細(xì)胞內(nèi)。陸大忠[4]、李曉晨[5]、郭琰[6]、王太霞[7]分別對烏蘞莓莖、葉進行顯微鑒別，肖文[8]對烏蘞莓根、莖進行顯微鑒定研究，實驗結(jié)果均表明烏蘞莓根、莖、葉黏液細(xì)胞含有草酸鈣針晶。本研究發(fā)現(xiàn)凍你美根、莖、葉黏液細(xì)胞含有草酸鈣針晶，與文獻(xiàn)報道一致。陳慧濃[9]曾報道烏蘞莓含黃酮類成分。本研究首次對烏蘞莓黃酮類成分進行薄層鑒別。薄層鑒別中，11批藥材與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主熒光斑點。實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠，專屬性好，可作為其薄層鑒別的依據(jù)。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-04-01 編輯：劉斌）