俸婷婷 楊順龍 孫悅 林冰 周英 趙致

【摘 要】? ?目的： 研究黔產(chǎn)黃精的產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)。 方法： 以多糖、醇浸物及水浸物含量等為指標(biāo)，結(jié)合指紋圖譜分析及小鼠抗疲勞試驗(yàn)，將不同的一體化技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)進(jìn)行對(duì)比研究。 結(jié)果： 一體化技術(shù)先燙后切方法與傳統(tǒng)技術(shù)相當(dāng)或略優(yōu)。 結(jié)論： 黔產(chǎn)黃精的產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)具有一定的合理性和可行性。

【關(guān)鍵詞】? 黔產(chǎn)黃精;產(chǎn)地加工炮制一體化;指紋圖譜分析;抗疲勞

【中圖分類號(hào)】R283.3? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A? ? 【文章編號(hào)】1007-8517（2020）11-0027-05

Study on Integrated Technology of Original Oroducing and Processing of Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou

FENG Tingting1，2 YANG Shunlong2 SUN Yue2 LIN Bing1，2* ZHOU Ying1，2 ZHAO Zhi2

1.School of Pharmacy in Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025，China;

2. Research and Development Center of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine in Guizhou University， Guiyang 550025，China

Abstract：? Objective? To study the integrated technology of original producing and processing of Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou.? Method? The integrated technology and traditional technology were compared by the content determination of polysaccharide， alcohol-soluble extractives and water-soluble extractives. HPLC fingerprint analysis and anti-fatigue test were also applied.? Result? The method of the integration technology， which was called “scalding before cutting”， was comparable with or little better than the traditional technology.? Conclusion? To some extent， the integrated technology of original producing and processing of Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou is reasonable and feasible.

Key words： Polygonatum Cyrtonema Hua in Guizhou; Integrated Technology of Original Producing and Processing; Fingerprint Analysis; Anti-fatigue

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.、黃精Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖，補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤(rùn)肺、益腎，用于脾胃氣虛、體倦乏力、胃陰不足、口干食少、肺虛燥咳、勞嗽咳血、精血不足、腰膝酸軟、須發(fā)早白、內(nèi)熱消渴[1]。黃精歷代入藥生制兼用，但傳統(tǒng)以黃精生用“刺入咽喉”，故多炮制后入藥[2]。2015版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）收載的黃精加工方法為采挖后除去須根，洗凈，置沸水中略燙或蒸至透心，干燥;飲片的炮制方法為除去雜質(zhì)，洗凈，略潤(rùn)，切厚片，干燥[1]。

《中華本草苗藥卷》收載黃精，又名ghok naol jad（貴州畢節(jié)）、shand ghunx（貴州松桃）、kid vud（貴州黔東南）、kid oub（貴州黔南），加工方法為挖起根莖后去掉莖稈，洗凈泥沙，除去須根和爛疤，蒸到透心后，曬或烘干。《貴州中草藥名錄》記載能潤(rùn)肺養(yǎng)陰、健脾益氣、祛痰、止血、消腫解毒;《苗族藥物集》記載能補(bǔ)虛止咳，恢復(fù)視力;《貴州民間藥物》記載能止咳，接骨[3]。

近年來(lái)，隨著藥材規(guī)范化種植的推行，可以把藥材的產(chǎn)地加工和炮制集中在一起，從而達(dá)到降低加工成本和提高飲片質(zhì)量的目的[4]。本研究對(duì)黔產(chǎn)黃精的產(chǎn)地加工和炮制一體化進(jìn)行研究，通過(guò)化學(xué)等量性研究及初步的生物等效性研究，初步探討黔產(chǎn)黃精產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)的合理性及可行性。

1 儀器與材料

FA2004分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）;0027391數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市環(huán)保儀器廠）;SHZ-95B型循環(huán)水式多用真空泵（上海予正儀器設(shè)備有限公司）;GZX-9146MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）;HY-0413型中藥粉碎機(jī)（環(huán)亞天元機(jī)械技術(shù)有限公司）;UV-1801型紫外分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器有限公司）;Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）。

無(wú)水乙醇、濃硫酸（重慶川東化工化學(xué)試劑有限公司，分析純）;蒽酮（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純）;乙腈（Fisher公司，色譜純）;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究所，1501123）;黃精（貴州大禹王農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司），經(jīng)貴州大學(xué)熊新源教授鑒定為黃精屬植物多花黃精Polygonatum Cyrtonema Hua的干燥根莖;清潔級(jí)昆明種小鼠（重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司，SCXK（渝） 2012-0008）。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃精加工炮制方法 在傳統(tǒng)方法中，黃精的產(chǎn)地加工和炮制是分開(kāi)進(jìn)行的，共需要9個(gè)步驟，如圖1所示。而產(chǎn)地加工炮制一體化技術(shù)則只需要5個(gè)步驟，其中主要是減少了1次洗凈和1次干燥等易使有效成分流失的步驟，如圖2所示。黃精在產(chǎn)地加工過(guò)程中需“略燙或蒸至透心”，前期研究發(fā)現(xiàn)燙制方法具有處理時(shí)間短、方法簡(jiǎn)單且綜合評(píng)分較高等優(yōu)點(diǎn)，故本研究中選取燙制方法，設(shè)立“先切后燙”及“先燙后切”兩種一體化技術(shù)。[JP]

2.2 黃精多糖的含量測(cè)定[1]

2.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取無(wú)水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）黃精中對(duì)照品溶液的制備方法，制備葡萄糖對(duì)照品溶液，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=11.691C+0.11167，R2=0.9995，表明在葡萄糖濃度在0.0125～0.075 mg·mL-1之間呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2 多糖含量的測(cè)定 精密稱取黃精樣品，參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）黃精中多糖的測(cè)定方法，測(cè)定3種加工炮制方法黃精中多糖的含量，重復(fù)3次，結(jié)果取平均值，并按式（1）計(jì)算一體化技術(shù)相對(duì)傳統(tǒng)技術(shù)的變化率，結(jié)果見(jiàn)表1。一體化技術(shù)先燙后切組的黃精多糖含量略高于傳統(tǒng)技術(shù)組，但一體化技術(shù)先切后燙組的黃精多糖含量低于傳統(tǒng)技術(shù)組。

變化率（%）= Ai-A0 A0 ×100% （1）

式中，Ai為一體化技術(shù)的含量測(cè)量值，A0為傳統(tǒng)技術(shù)的含量測(cè)量值。

2.3 黃精醇浸物的含量測(cè)定[5-6] 精密稱取黃精樣品，參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（四部）熱浸法測(cè)定3種加工炮制方法黃精中醇溶性浸出物含量，重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。并按式（1）計(jì)算一體化技術(shù)相對(duì)傳統(tǒng)技術(shù)的變化率，結(jié)果見(jiàn)表1。一體化技術(shù)的黃精醇浸物含量均高于傳統(tǒng)技術(shù)組，但變化率均小于3%。

2.4? 黃精水浸物的含量測(cè)定[5-6] 精密稱取黃精樣品，參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（四部）熱浸法測(cè)定3種加工炮制方法黃精中水溶性浸出物含量，重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。并按式（1）計(jì)算一體化技術(shù)相對(duì)傳統(tǒng)技術(shù)的變化率，結(jié)果見(jiàn)表1。一體化技術(shù)先燙后切組的黃精水浸物含量與傳統(tǒng)技術(shù)組相當(dāng)，一體化技術(shù)先切后燙組的黃精水浸物含量略低于傳統(tǒng)技術(shù)組。

2.5 不同加工炮制方法黃精的高效液相指紋圖譜分析

2.5.1 供試品溶液的制備[7] 取干燥至恒重的黃精樣品粉末2 g，加70%的乙醇50 mL，超聲提取30 min，放冷，抽濾，濾渣用同樣方法再次提取，合并2次提取液，旋干。加10 mL甲醇溶解，加入10 g·L-1的殼聚糖冰醋酸溶液100 μL，放過(guò)夜，用0.22 μm濾膜濾過(guò)后，濾液作為供試品溶液。

2.5.2 色譜條件[7] 安捷倫1260高效液相色譜儀，ZORBAX SB-C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈（A，下文用體積分?jǐn)?shù)）和水（B）為流動(dòng)相，采用二元梯度洗脫，梯度程序?yàn)?～10 min，5%～10%A;10～30 min，10%～35%A;30～40 min，35%～60%A;40～60 min，60%～100%A。流速1 mL·min-1，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。檢測(cè)波長(zhǎng)分別設(shè)定為210、254、270及290 nm。

2.5.3 高效液相指紋圖譜分析[8-9] 將黃精的指紋圖譜峰在2～20 min 共有指紋區(qū)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，在210、254、270及290 nm波長(zhǎng)下，從3組樣品圖譜的共有指紋區(qū)分別標(biāo)定了11、8、9及9個(gè)共有峰，如圖3所示。采用國(guó)家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A）”進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，設(shè)定傳統(tǒng)技術(shù)組（S0）為參照?qǐng)D譜，將先切后燙組（S1）和先燙后切組（S2）的色譜峰與參照?qǐng)D譜進(jìn)行自動(dòng)匹配，見(jiàn)表2。各加工方法所得黃精指紋圖譜之間的相似度均在0.90以上。并按式（2）計(jì)算一體化技術(shù)共有峰面積與稱樣量比值對(duì)傳統(tǒng)技術(shù)的變化率。結(jié)果見(jiàn)表3。一體化技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)比較，其變化率的平均值均為正值，表明與傳統(tǒng)技術(shù)相比，一體化技術(shù)能夠更大程度保留黃精中的成分，減少成分流失，并且先燙后切組明顯優(yōu)于先切后燙組。

變化率（%）= Si/mi-S0/m0 S0/m0? （2）

式中，Si為一體化技術(shù)測(cè)得的峰面積;mi為一體化技術(shù)試樣質(zhì)量;S0為傳統(tǒng)炮制技術(shù)測(cè)得的峰面積;m0為傳統(tǒng)炮制技術(shù)試樣質(zhì)量。

2.6 不同加工炮制方法黃精的抗疲勞作用研究[10-11]

選取體重在18～22 g之間的雄性小鼠40只，隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組、傳統(tǒng)技術(shù)組、先切后燙組和先燙后切組。傳統(tǒng)飲片組、先切后燙組和先燙后切組每只每天以5 g·kg-1黃精提取液灌胃給藥，空白組每天給予相同體積的蒸餾水，連續(xù)給藥10 d。末次給藥后30 min后，在鼠尾根部系上質(zhì)量為小鼠體重6%的重物，置于水深25 cm、水溫25 ℃的水箱中游泳，記錄小鼠游泳至力竭沉沒(méi)后10 s仍不能浮出水面的時(shí)間作為小鼠力竭性游泳時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表4。三種加工炮制方法得到的黃精提取液均能明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間（P<0.01），與空白對(duì)照組相比，一體化技術(shù)的先燙后切組延長(zhǎng)時(shí)間最長(zhǎng)，并略優(yōu)于傳統(tǒng)技術(shù)組，先切后燙組延長(zhǎng)時(shí)間較短。