段莉 王遠(yuǎn)杰 劉方久

此次全球流行的新型冠狀病毒性肺炎（以下簡(jiǎn)稱新冠肺炎），其病原體為新型冠狀病毒（SARSCoV-2，簡(jiǎn)稱新冠病毒），已造成全球逾千萬(wàn)人感染，數(shù)十萬(wàn)人死亡。新冠病毒傳播途徑為呼吸道飛沫、氣溶膠、密切接觸等。人感染該病毒后，潛伏期為3～24 d，平均14 d，潛伏期患者和無(wú)癥狀病毒攜帶者均具有傳染性。已證實(shí)患者糞便、血液以及病房的環(huán)境樣本中均可以檢測(cè)到病毒[1]；部分危重癥患者會(huì)出現(xiàn)病毒血癥，其血液傳播風(fēng)險(xiǎn)較大。目前尚無(wú)新冠肺炎特效治療藥物，治療策略以支持治療為主[2]。對(duì)于部分貧血或需要手術(shù)治療的確診或疑似患者，輸血治療不可或缺。輸血相容性試驗(yàn)是患者輸血的安全保障，但新冠病毒的傳染性強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)操作者面臨較大的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)血液樣本進(jìn)行56℃ 30 min病毒滅活，探討熱滅活對(duì)紅細(xì)胞部分血型抗原性和抗體效價(jià)的影響以及對(duì)相容性試驗(yàn)結(jié)果可靠性的影響。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 選取20例獻(xiàn)血員血樣（其中A、B、O、AB型RhD陽(yáng)性樣本各5例），收集不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性患者樣本6例（其中抗-M 2例，抗-Ec 2例，抗-D 1例，抗-E 1例）。

2 試劑與儀器 ABO正反定型及RhD血型定型試劑卡（美國(guó)Ortho公司，批號(hào)：ABR149J）、抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）檢測(cè)卡（美國(guó)Ortho公司，批號(hào)：AHC117F），ABO反定型紅細(xì)胞試劑（美國(guó)Ortho公司，批號(hào)：A315Z），譜細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：2020006），不規(guī)則抗體篩選試劑（江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司，批號(hào)：202002008）。微柱卡專用恒溫孵育器、專用離心機(jī)（美國(guó)Ortho公司），恒溫水浴箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）。

3 方法 微柱凝集法檢測(cè)血液樣本ABO血型和血漿抗體效價(jià)，記錄反應(yīng)凝集強(qiáng)度，效價(jià)測(cè)定以1+的凝集為判定標(biāo)準(zhǔn)。血液樣本加熱滅活，溫度56℃，時(shí)間30 min；滅活后的血液樣本重復(fù)前述操作，記錄檢測(cè)結(jié)果。

結(jié) 果

1 熱滅活對(duì)ABO血型抗原抗體的影響 20例樣本熱滅活前后血型正反定型反應(yīng)格局無(wú)變化，微柱凝集卡上的凝集強(qiáng)度無(wú)變化。結(jié)果見表1。

2 熱滅活對(duì)不規(guī)則抗體效價(jià)的影響 6例樣本熱滅活后抗體效價(jià)降低1～2個(gè)滴度。結(jié)果見表2。注：表中1+、2+皆是人為生理鹽水稀釋抗體至1+、2+的凝集強(qiáng)度，數(shù)字1～5皆為樣本編號(hào)。

表1 熱滅活前后20例樣本血型的反應(yīng)格局

表2 熱滅活前后抗體效價(jià)變化

討 論

新冠肺炎全球大流行，人群普遍易感，以30～79歲感染者居多，部分感染者病情進(jìn)展較快。危重癥病例約占15%，多為老年、肥胖和伴有高血壓、心臟病等基礎(chǔ)疾病。由于新冠病毒具較強(qiáng)傳染性，輸血相容性試驗(yàn)多個(gè)環(huán)節(jié)會(huì)產(chǎn)生大量氣溶膠，造成實(shí)驗(yàn)室污染和操作者職業(yè)暴露[3]。我國(guó)已將新型冠狀病毒肺炎納入《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病，并采取甲類傳染病的預(yù)防、控制措施，屬于最高級(jí)別傳染病管理要求。由于輸血科多未經(jīng)歷過(guò)大的傳染病疫情，二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室多名不符實(shí)，普遍無(wú)生物安全柜，生物安全防護(hù)能力有待提升。血液樣本離心、開蓋、檢測(cè)等環(huán)節(jié)氣溶膠污染難以避免，操作者職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)巨大[2]，即使投入大量的防護(hù)裝備并采取一系列保護(hù)措施，也易造成實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染與實(shí)驗(yàn)人員感染[3]。如何有效避免檢測(cè)過(guò)程中的職業(yè)暴露，是各實(shí)驗(yàn)室亟待解決的問(wèn)題。

國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)制定的《新型冠狀病毒肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》[4]要求，新型冠狀病毒肺炎相關(guān)臨床樣本的血清學(xué)檢測(cè)應(yīng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室開展，盡可能在生物安全柜中進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)[5]。

新冠病毒對(duì)75%酒精、含氯消毒劑、紫外線、高溫等敏感，56℃ 30 min可以有效滅活病毒[6]。本次實(shí)驗(yàn)旨在降低操作者在檢測(cè)過(guò)程中的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)，比較熱滅活病毒前后血型抗原性及抗體效價(jià)的變化，以及熱滅活對(duì)輸血相容性檢測(cè)的影響。結(jié)果顯示，20例樣本熱滅活前后，血型正反定型的反應(yīng)格局、凝集強(qiáng)度均未發(fā)生改變。6例血清中含不規(guī)則抗體的樣本，抗體效價(jià)降低1～2個(gè)滴度。56℃ 30 min熱滅活法對(duì)ABO血型檢測(cè)無(wú)影響，對(duì)效價(jià)≤4的不規(guī)則抗體會(huì)漏檢，對(duì)效價(jià)＞4的不規(guī)則抗體的檢出無(wú)影響，但效價(jià)會(huì)降低。若僅用于血型鑒定不受影響，但用于不規(guī)則抗體篩查及交叉合血時(shí)需考慮低效價(jià)抗體的漏檢，防范輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。

另外，熱滅活過(guò)程中，血液樣本在高于50℃時(shí)即會(huì)出現(xiàn)紅細(xì)胞破壞，56℃ 30 min處理后，所有樣本出現(xiàn)嚴(yán)重溶血，不利于觀察試管法及聚凝胺法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。56℃ 30 min處理后大部分補(bǔ)體會(huì)喪失活性，若樣本中存在補(bǔ)體依賴抗體，熱滅活也會(huì)影響交叉配血的實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀。

在輸血相容性實(shí)驗(yàn)室生物防護(hù)條件有限的情況下，熱滅活方法可有效降低實(shí)驗(yàn)室操作者的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)、防止醫(yī)源性感染。

本實(shí)驗(yàn)存在的局限性：①受限于樣本，本實(shí)驗(yàn)的受檢對(duì)象并不包括新型冠狀病毒肺炎的確診患者；②不規(guī)則抗體樣本數(shù)量少，且均為效價(jià)較高的IgG型抗體；③由于IgG和IgM型不規(guī)則抗體特異性不同，其效價(jià)、親和力、反應(yīng)性存在差異，熱滅活對(duì)其影響是否具有一致性。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，將針對(duì)性地把這些問(wèn)題納入研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突