項(xiàng) 云，章嘯君，屠平光，郭曉令，徐寧迎，趙靜帆，吳承武，王文強(qiáng)

(1.金華市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 金華 321000；2.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院； 3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)淮安研究院)

金華豬是著名的國內(nèi)地方豬種，具有肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美等優(yōu)良特征，隨著生活水平的提高，人們對(duì)金華豬等地方豬肉的需求逐年提高，因此飼養(yǎng)量也逐年增加。由于近年來豬疫情不斷，為了避免疫情對(duì)地方豬的影響、保護(hù)地方豬種質(zhì)資源，各地對(duì)地方豬開展了精液冷凍保存等工作。而公豬精液質(zhì)量對(duì)精液冷凍和解凍效果有密切關(guān)系，因此本論文對(duì)金華豬選育場的兩個(gè)金華豬品系公豬進(jìn)行了精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)的測定和分析，為后續(xù)金華豬公豬精液冷凍保存提供參考。

1 材料和方法

1.1試驗(yàn)材料 供試精液來源于金華市農(nóng)科院金華豬選育場4頭金華豬A型公豬和4頭金華豬B型公豬。B型豬是在A型豬基礎(chǔ)上培育而成的金華豬新品系。

1.2檢測方法 8頭金華豬公豬按A型和B型品系分組，每組4頭。參試公豬采精時(shí)間為2019年3月25日，各組采集精液1頭，3月26日，各組采集精液3頭。A型公豬月齡范圍為9.8月齡至39.3月齡，B型公豬月齡范圍為11.3月齡至28.9月齡。參試公豬采精頻率一致，公豬采用發(fā)情母豬誘情輔助人工采精，原精液進(jìn)行1∶1稀釋(稀釋液為公豬精液冷凍專用稀釋劑配制而成)，放入保溫箱運(yùn)輸，及時(shí)送至實(shí)驗(yàn)室檢測(采精與精液檢測間隔時(shí)間約為1.5 h左右)。檢測時(shí)將精液瓶輕微搖晃混勻，分別吸取1 mL精液至無菌的2 mL離心管中，置于恒溫臺(tái)統(tǒng)一回溫至37℃后開始檢測。采用紅寶石(MACRO)精子計(jì)數(shù)板(網(wǎng)格0.01 mm2，間隙0.01 mm)，采用美國MOFA GLOBAL公司的計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)(Computer-assisted Sperm Analysis，CASA)進(jìn)行精子各參數(shù)計(jì)算和精液質(zhì)量分析。

1.3測定參數(shù)及統(tǒng)計(jì)分析 公豬精液測定參數(shù)為公豬月齡、采精量mL、前進(jìn)率(直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率，又稱精子活力)、運(yùn)動(dòng)率(會(huì)動(dòng)的精子數(shù)占總精子數(shù)的百分率，又稱精子活率)、DSL(直線運(yùn)動(dòng)距離，距離測定為CASA系統(tǒng)設(shè)定時(shí)間參數(shù)內(nèi)測定的距離，有關(guān)距離測定下同)、 DAP(平均運(yùn)動(dòng)距離)、DCL(曲線運(yùn)動(dòng)距離)、VCL(曲線運(yùn)動(dòng)速度，精子頭沿其實(shí)際行走曲線的運(yùn)動(dòng)速度，μm/s)、VAP(平均路徑速度，精子頭沿其空間平均軌跡的運(yùn)動(dòng)速度，μm/s)、VSL(直線運(yùn)動(dòng)速度，精子頭從開始檢測時(shí)的位置至最后所處位置之間的直線運(yùn)動(dòng)的平均速度，μm/s)、LIN(線性運(yùn)動(dòng)比例VSL/VCL)、STR(直線運(yùn)動(dòng)比例VSL/VAP)、WOB(擺動(dòng)比例VAP/VCL)、ALH(頭部擺動(dòng)振幅，精子頭部實(shí)際運(yùn)動(dòng)軌跡對(duì)平均路徑的側(cè)擺幅度，μm)、AOC(頭部平均擺動(dòng)度數(shù))。

由于公豬精液質(zhì)量受品種、營養(yǎng)、年齡、配種次數(shù)、疾病等多因素影響，統(tǒng)計(jì)分析建立在日糧營養(yǎng)和飼養(yǎng)管理一致、配種次數(shù)和健康狀況等因素相同的基礎(chǔ)上進(jìn)行精液質(zhì)量分析。為提高分析的準(zhǔn)確性，對(duì)月齡進(jìn)行回歸處理。以精子參數(shù)為依變量，以品系為自變量，建立公豬品系為單因子最小二乘協(xié)方差數(shù)學(xué)模型：

Yij=μ+Li+btij+eij

式中：Yij=品系i參試公豬j的精液參數(shù)；μ=采精時(shí)公豬月齡都為零的總體平均數(shù)，即未校正總體平均數(shù)；Li=品系i的效應(yīng)；b=精子參數(shù)對(duì)公豬月齡的回歸系數(shù)；tij=品系i參試公豬j的采精月齡；eij=隨機(jī)誤差。

采用SAS 8.01軟件對(duì)精液各參數(shù)最小二乘協(xié)方差模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)P值大于0.1以上的回歸系數(shù)的參數(shù)不進(jìn)行最小二乘協(xié)方差模型分析，采用樣本數(shù)相同的平均數(shù)t檢驗(yàn)即可。

2 結(jié)果與分析

2.1精液各參數(shù)最小二乘協(xié)方差模型回歸系數(shù)計(jì)算 經(jīng)計(jì)算，運(yùn)動(dòng)率回歸系數(shù)為-0.3645，達(dá)10%顯著水準(zhǔn)，B型運(yùn)動(dòng)率和A型的最小二乘均數(shù)分別為94.98%和90.00%，差異不顯著。

由表1可見，其余參數(shù)回歸系數(shù)顯著水準(zhǔn)p值均較大，為P≥0.2147以上。前進(jìn)率、運(yùn)動(dòng)率、DAP、DCL、VAP、VCL和AOC的回歸系數(shù)均為負(fù)值，其余回歸系數(shù)均為正值。

2.2采精月齡、采精量和精子濃度等統(tǒng)計(jì)分析 公豬的月齡、采精量、精子濃度、前進(jìn)率和運(yùn)動(dòng)率見表2。

表2 采精月齡、采精量、濃度、前進(jìn)率和運(yùn)動(dòng)率平均數(shù)比較

由表2可知，A型和B型公豬的月齡、采精量、精子濃度、前進(jìn)率和運(yùn)動(dòng)率平均數(shù)比較差異不顯著(P>0.05)，但B型精子濃度比A型精子濃度高出115.3%。

2.3精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)分析 由表3可見，B型和A型精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)平均數(shù)比較均沒達(dá)到5%顯著水準(zhǔn)，B型精子ALH頭部擺動(dòng)振幅平均數(shù)比A型高出13.3%。

表3 金華豬2個(gè)品系公豬精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)平均數(shù)比較

3 小結(jié)與討論

3.1本次參試公豬月齡在9.8月齡至39.3月齡之間，精子運(yùn)動(dòng)率對(duì)月齡的回歸系數(shù)b為-0.3645，表明金華豬公豬精子運(yùn)動(dòng)率在1歲至3.3歲之間隨著年齡增長而下降。采精量對(duì)月齡的回歸系數(shù)b為1.768，表明精液量隨年齡增長而有增加的趨勢。

3.2由表1可見，精子前進(jìn)率、運(yùn)動(dòng)率、平均運(yùn)動(dòng)距離(速度)、曲線運(yùn)動(dòng)距離(速度)和頭部平均擺動(dòng)度數(shù)的回歸系數(shù)為負(fù)值，表明部分精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)隨年齡增長而有下降趨勢。

3.3相關(guān)數(shù)據(jù)表明，金華豬B型公豬精子濃度比A型提高115.3%，B型和A型公豬精子的采精量、精子濃度、前進(jìn)率、運(yùn)動(dòng)率和精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)平均數(shù)比較差異不顯著，表明培育后的金華豬新品系B型公豬除了精子濃度提高外采精量、前進(jìn)率、運(yùn)動(dòng)率和運(yùn)動(dòng)參數(shù)基本保留原金華豬A型的精液質(zhì)量。

3.4由表3可見，B型公豬精子頭部擺動(dòng)振幅比A型高出13.3%，表明B型公豬精子頭部擺動(dòng)幅度比改良前的金華豬A型有增加的趨勢。

3.5金華豬精子前進(jìn)率平均數(shù)大于77.27%，梅山豬、巴克夏、大約克、長白和杜洛克豬精子前進(jìn)率平均數(shù)范圍為53.44%至61.45%[1-5]，據(jù)高圣玥等測定的杜洛克和長白豬前進(jìn)率分別為87.6%和86.3%[6]。精子前進(jìn)率是精液品質(zhì)的重要指標(biāo)，本次試驗(yàn)表明具有較高的公豬精子前進(jìn)率為金華豬優(yōu)良的繁殖性能奠定了基礎(chǔ)。精子前進(jìn)率會(huì)受品種、日糧營養(yǎng)、飼養(yǎng)管理等因素影響，因此金華豬精子前進(jìn)率是否與其它豬品種有差異還有待進(jìn)一步探討。

3.6據(jù)郭蘋等測定梅山豬精子VSL、VAP、VCL分別為18.88 μm/s、33.89 μm/s、63.23 μm/s[1]，梅山豬LIN、STR、WOB分別為0.2986、0.5571和0.5359[1]，本次試驗(yàn)的金華豬VSL、VAP、VCL均高于梅山豬，但本次試驗(yàn)的金華豬LIN、STR、WOB與郭蘋等測定的梅山豬精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)[1]相差不大。運(yùn)動(dòng)速度與采精后的稀釋液等因素有關(guān)，本次試驗(yàn)金華豬精液稀釋液有減緩精子運(yùn)動(dòng)的趨勢作用，因本次試驗(yàn)金華豬精液用作冷凍精液制作，金華豬與梅山豬精子運(yùn)動(dòng)速度差異是否因品種因素導(dǎo)致還有待進(jìn)一步探討。

3.7據(jù)伏彭輝等測定的大約克、長白和杜洛克豬精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)VSL、VAP、VCL測定值[3]高于本次試驗(yàn)的金華豬，而LIN、STR、WOB[3]數(shù)值與本次試驗(yàn)的金華豬差別不大。但據(jù)陳永霞等測定的大約克、長白和杜洛克豬VSL、VAP、VCL測定值[5]要低于金華豬，但LIN、STR、WOB、ALH[5]數(shù)值與金華豬差別不大。表明精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)與品種、飼養(yǎng)管理等諸多因素有關(guān)，金華豬精子VSL、VAP、VCL三個(gè)運(yùn)動(dòng)參數(shù)與外來豬是否有差異還有待進(jìn)一步探討。