項心妍，杜 爽，丁 楊*，周建平**

（1中國藥科大學藥學院藥劑系，南京211198；2南京圣和藥業(yè)股份有限公司，南京211135）

納米脂質(zhì)體是第1 個被成功應用于臨床的納米藥物遞送系統(tǒng)，它是由天然無毒的磷脂和膽固醇等脂質(zhì)分子通過有序排列形成的含有水性核心和脂質(zhì)雙層的球型囊泡。1965 年，Alec Bangham首次將脂質(zhì)體作為研究生物膜的模型提出，而后因其具有粒徑可塑、生物相容性好、毒性和免疫原性低等優(yōu)點，以及可負載親水性和疏水性藥物的能力，脂質(zhì)體從最初的人造細胞模型演變?yōu)槿缃癯晒糜谂R床的藥物遞送系統(tǒng)，在制藥領(lǐng)域受到越來越廣泛的關(guān)注。據(jù)統(tǒng)計，1973 年至2015 年間FDA 受理了359 項納米制劑產(chǎn)品申請（包括IND、NDA 和ANDA），其中占比最高的是脂質(zhì)體（33%），其二為納米晶（23%）［1］?，F(xiàn)已開發(fā)出多種給藥途徑（如注射、口服、經(jīng)皮、經(jīng)鼻、經(jīng)肺、眼用等）的脂質(zhì)體制劑，在市售與臨床研究中最常用的仍然是注射途徑。本文總結(jié)了目前臨床可用的脂質(zhì)體注射劑所涉及的新技術(shù)與新產(chǎn)品，介紹了新型脂質(zhì)體的研究熱點（圖1），并針對國內(nèi)外脂質(zhì)體注射劑的監(jiān)管現(xiàn)狀進行了分析。

圖1 脂質(zhì)體的分類與結(jié)構(gòu)示意

1 已有相關(guān)產(chǎn)品上市的新型脂質(zhì)體技術(shù)

由于血漿中調(diào)理素的作用以及網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）的攝取，第1 代傳統(tǒng)脂質(zhì)體在注射后容易被快速清除，因此許多新型脂質(zhì)體技術(shù)通過調(diào)節(jié)傳統(tǒng)脂質(zhì)體的脂質(zhì)組成、結(jié)構(gòu)、電荷等特性來改變藥物的藥代動力學和體內(nèi)生物分布特征。目前有兩種新型脂質(zhì)體技術(shù)開發(fā)得較為成熟并且已有相應的產(chǎn)品上市，分別是Stealth 脂質(zhì)體技術(shù)和陽離子脂質(zhì)體技術(shù)。

1.1 Stealth脂質(zhì)體技術(shù)

早期的Stealth 技術(shù)是指在傳統(tǒng)脂質(zhì)體表面摻入二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇化衍生物（DSPE-mPEG2000），使其交錯重疊形成一定的空間位阻，該衍生物的高親水性和柔韌性會干擾脂質(zhì)體與血漿蛋白之間的疏水相互作用，從而減少RES 對脂質(zhì)體的吸收，即發(fā)揮了隱形效果，實現(xiàn)脂質(zhì)體在體內(nèi)的長循環(huán)功能，通常該脂質(zhì)體被稱為長循環(huán)脂質(zhì)體或隱形脂質(zhì)體。此外，由于腫瘤脈管系統(tǒng)的滲漏性質(zhì)，具有長循環(huán)特性的納米制劑能夠通過增強的滲透和滯留效應（EPR）被動地靶向腫瘤組織［2］。

運用Stealth 技術(shù)開發(fā)出了全球首個抗腫瘤脂質(zhì)體產(chǎn)品Doxil?（阿霉素脂質(zhì)體注射液），游離阿霉素的消除半衰期為0.2 h，AUC 為3.81 μg·h/mL，而Doxil?的消除半衰期可達41～70 h，AUC 為902μg·h/mL［3］，同時臨床研究表明它可以減少在心肌釋藥以降低阿霉素的心臟毒性［4］。此后，Sun 制藥也使用Stealth 技術(shù)開發(fā)出了Doxil 的仿制藥Lipodox?，我國也有3 款阿霉素長循環(huán)脂質(zhì)體的仿制產(chǎn)品，分別為上海復旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司的里葆多、石藥控股集團有限公司的多美素和常州金遠藥業(yè)制造有限公司的立幸。順鉑和奧沙利鉑等鉑類藥物也利用Stealth 技術(shù)開發(fā)出了一系列處于臨床試驗不同階段的長循環(huán)脂質(zhì)體制劑，例如順鉑脂質(zhì)體Lipoplatin、SPI-077、LiPlaCis；奧沙利鉑脂質(zhì)體Lipoxal、MBP-426；L-NDDP（奧沙利鉑脂溶性衍生物）脂質(zhì)體Aroplatin 等，以上脂質(zhì)體的處方中都含有不同比例的DSPE-mPEG2000，可不同程度地延長循環(huán)時間并降低鉑類藥物的全身毒性。順鉑脂質(zhì)體Lipoplatin的循環(huán)時間比游離藥物高20 倍，雙分子層中的陰離子脂質(zhì)DPPG 促進脂質(zhì)體通過細胞內(nèi)吞或直接與細胞膜融合而內(nèi)化，并克服跨膜轉(zhuǎn)移引起的耐藥性，而另一種順鉑脂質(zhì)體SPI-077 無法跨膜，需要經(jīng)脂肪酶降解磷脂雙分子層后才可釋藥，藥物難以釋放導致臨床療效有限［5］。還有在臨床階段的喜樹堿脂質(zhì)體SCKD602，將喜樹堿半合成類似物CKD602 裝載于長循環(huán)脂質(zhì)體中，使得AUC 增加50 倍，治療指數(shù)提高3～10 倍［6］，此外越來越多的藥物通過Stealth技術(shù)制成長循環(huán)脂質(zhì)體，有效地改善了藥物的療效。

然而現(xiàn)在有一些研究報道了PEG 化脂質(zhì)體存在“加速血液清除”（ABC）現(xiàn)象，對同一受試者多次注射PEG 化脂質(zhì)體后，它會與脾臟產(chǎn)生的抗PEG IgM 抗體結(jié)合激活補體系統(tǒng)，被補體C3 片段快速調(diào)理后由Kupffer 細胞從體循環(huán)中清除［7］。目前已提出了幾種減弱ABC 現(xiàn)象的方法，比如使用聚甘油、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或聚丙烯酰胺等聚合物替代PEG，結(jié)構(gòu)的改變可以減少聚合物對脾臟B 細胞的刺激［8］；將具有免疫抑制作用的神經(jīng)節(jié)苷脂插入PEG 化脂質(zhì)體，使反應性B 細胞產(chǎn)生耐受性而減少抗PEG IgM 抗體產(chǎn)生［9］；臨床上還可以改變給藥方案，先服用較高劑量的空白脂質(zhì)體并延長給藥間隔［10］。此外，PEG 化脂質(zhì)體也會通過激活補體系統(tǒng)而釋放C5a 和C3a 等過敏毒素，從而激活巨噬細胞、嗜堿性粒細胞和肥大細胞分泌各種過敏原，引發(fā)“補體激活相關(guān)的假性過敏反應（CARPA）”，導致一列心肺反應。有研究表明可以使用補體抑制調(diào)節(jié)因子FH 或使用空白PEG 化脂質(zhì)體消耗超敏反應的早期介體，中斷信號傳導從而減輕CARPA反應［11］。Stealth技術(shù)的出現(xiàn)改善了傳統(tǒng)脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和有效性，提高了脂質(zhì)體藥物的臨床轉(zhuǎn)化率，但長循環(huán)脂質(zhì)體顯示出的一些安全性問題仍需要進一步的研究。

1.2 陽離子脂質(zhì)體技術(shù)

隨著脂質(zhì)體技術(shù)的不斷發(fā)展，研究者們致力于開發(fā)新型的合成脂質(zhì)以提高脂質(zhì)體的載藥能力，于是陽離子脂質(zhì)應運而生，用于有效裝載帶負電的藥物，尤其是對于核酸藥物的遞送備受關(guān)注。常用的永久帶電的陽離子脂質(zhì)有3類：單價陽離子脂質(zhì)DOTAP、DOTMA、DIMRIE 和DOTIM，多價陽離子脂質(zhì)DOGS 和DOSPA，陽離子膽固醇衍生物DC-Chol 和BGTC（圖2）。陽離子脂質(zhì)一般由帶正電的頭基通過連接鍵（如酰胺鍵、酯鍵和醚鍵）與疏水尾基（膽固醇或脂肪鏈）相連組成，其結(jié)構(gòu)是決定細胞毒性和轉(zhuǎn)染效率的重要因素。

永久帶電的陽離子脂質(zhì)的缺陷在于它會通過激活Toll 樣受體4（TLR4），刺激產(chǎn)生炎性因子IL-6和TNF-α，從而引發(fā)免疫反應。目前的解決方法是著力于開發(fā)不飽和的可電離的陽離子脂質(zhì)，將可質(zhì)子化的胺基作為頭基，用不飽和?；溙岣咿D(zhuǎn)染效率［12］。第1 代pKa為6.5 的可電離陽離子脂質(zhì)1，2-二羥基-3-二甲基氨基丙烷（DLin-DMA）在pH 4 條件中帶正電可有效封裝帶負電的藥物，靜脈注射后在pH 7.4的生理條件下接近中性可防止與血清蛋白的非特異性相互作用并改善循環(huán)時間，通過吸附內(nèi)源性載脂蛋白E（ApoE）觸發(fā)肝細胞表面受體的攝取，經(jīng)內(nèi)吞作用進入肝細胞，在細胞內(nèi)體酸性環(huán)境中質(zhì)子化并與帶負電的內(nèi)源性脂質(zhì)相互作用導致內(nèi)體膜失穩(wěn)從而逃逸至細胞質(zhì)。在DLin-DMA 的基礎(chǔ)上，修改長度和不飽和度得到了許多可用的陽離子脂質(zhì)（圖3），其中二油甲基-4-二甲基氨基丁酸酯（Dlin-MC3-DMA，簡稱MC3）是目前用來遞送siRNA 最有效的脂質(zhì)，載體的進一步優(yōu)化可通過摻入內(nèi)體逃逸促進劑（如pH 敏感的聚合物或肽）或設計更安全有效的可電離脂質(zhì)來實現(xiàn)。

全球首個siRNA 藥物Onpattro?（Patisiran 陽離子脂質(zhì)體注射液）于2018年獲批上市，這也是首個用于治療轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性（hATTR）引起的神經(jīng)損傷的藥物，這款藥物中使用的關(guān)鍵脂質(zhì)即為可電離陽離子脂質(zhì)MC3。此外，也有許多陽離子脂質(zhì)體藥物進入臨床試驗，如遞送紡錘體驅(qū)動蛋白（KSP）-siRNA 和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）-siRNA 的ALN-VSP02脂質(zhì)體，遞送分化簇31（CD31）-siRNA 和血管生成素（TIE-2）-siRNA 的AtuPLEX 脂 質(zhì)體［13］，以及MediGene 公 司 的Endo TAG-1（紫杉醇陽離子脂質(zhì)體）和石藥控股集團有限公司的紫杉醇陽離子脂質(zhì)體。

由于肝臟不連續(xù)脈管系統(tǒng)的內(nèi)在蓄積，陽離子脂質(zhì)體已被證明可有效治療肝臟相關(guān)疾?。ㄈ鏷ATTR 和脂質(zhì)代謝疾病），而對于肝外遞送，靶向配體的修飾是較有希望的研究方向。Chen 等［14］用陽離子脂質(zhì)體包載低氧誘導因子1α（HIF1α）-siRNA，通過摻入葉酸/油酸-二?；途蹥ぞ厶菍崿F(xiàn)葉酸配體的修飾，免疫印跡實驗和凋亡測試表明此脂質(zhì)體顯著減少了HIF1α 相關(guān)蛋白的產(chǎn)生并誘導了耐缺氧黑色素瘤細胞的凋亡，顯著增強了HIF1αsiRNA 的抗黑色素瘤活性。此外，核酸與化藥的共遞送系統(tǒng)也是目前的研究熱點，比如Wang 等［15］將一線化療藥物吉西他濱和骨髓細胞白血病蛋白1（Mcl-1）-siRNA 共載于陽離子脂質(zhì)體，結(jié)果顯示出協(xié)同增強的抗腫瘤作用并克服了吉西他濱的耐藥性。陽離子脂質(zhì)體技術(shù)的發(fā)展對核酸藥物的開發(fā)意義重大，可以展望今后若能對患者轉(zhuǎn)錄組進行測序，基于RNA療法的個性化醫(yī)學指日可待。

圖2 陽離子脂質(zhì)的分類

圖3 可電離陽離子脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)

2 已上市脂質(zhì)體注射劑的制劑學分析

表1列舉了國內(nèi)外獲批上市的脂質(zhì)體注射劑，目前大多仍是傳統(tǒng)脂質(zhì)體，長循環(huán)脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體僅占少數(shù)。脂質(zhì)體注射劑主要應用于抗腫瘤、抗真菌和鎮(zhèn)痛等領(lǐng)域，每一款產(chǎn)品都根據(jù)藥物不同的性質(zhì)并通過獨特的手段改善了藥物的治療效果。

2.1 載化學藥物的脂質(zhì)體

2.1.1 親水性化學藥物脂質(zhì)體 鹽酸阿霉素脂質(zhì)體Doxil?是最經(jīng)典的水溶性抗腫瘤化藥脂質(zhì)體，脂質(zhì)組成為高相變溫度的HSPC、膽固醇和DSPEPEG，物質(zhì)的量比為56.4∶38.3∶5.3，由于HSPC 和膽固醇的最佳比例，在小于等于37 ℃時脂質(zhì)體可以形成柔性雙層以保留更多的藥物，DSPE 摻入脂質(zhì)體雙層中，親水性PEG 長鏈用于延長脂質(zhì)體的體內(nèi)循環(huán)時間。制備時使用硫酸銨梯度法實現(xiàn)主動載藥，阿霉素在親水內(nèi)核中與硫酸根離子結(jié)合形成晶狀硫酸鹽沉淀，包封率可達97%左右，并且藥物不易泄漏［16］。阿霉素隱形脂質(zhì)體的成功開發(fā)有效地降低了游離阿霉素的心臟毒性，多款仿制產(chǎn)品相繼上市，但臨床應用情況表明PEG 化脂質(zhì)體較長的循環(huán)時間導致阿霉素的皮膚毒性蓄積，患者用藥后發(fā)生手足綜合征（HFS）的概率大幅增加，于是改良的非PEG 化的阿霉素檸檬酸鹽脂質(zhì)體Myocet?面世，與環(huán)磷酰胺聯(lián)合用于成年女性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的一線治療。該產(chǎn)品由阿霉素凍干粉、空白脂質(zhì)體分散液和緩沖液組成，使用時需現(xiàn)配現(xiàn)用，通過pH 梯度法主動載藥，包封率可達99%左右，粒徑（150～250 nm）較大，進入體內(nèi)后迅速被單核吞噬細胞系統(tǒng)（MPS）識別與捕獲，隨后形成儲庫緩慢釋藥，半衰期為2～3 h，不具有被動靶向腫瘤的能力［16］。

另一個蒽環(huán)類藥物是柔紅霉素檸檬酸鹽脂質(zhì)體DaunoXome?，也通過梯度法載藥，處方中的DSPC 與膽固醇賦予其結(jié)構(gòu)較強的物理剛性，改善了柔紅霉素易代謝的不穩(wěn)定性并將其與血清蛋白的結(jié)合最小化，較小的粒徑（45 nm）降低RES 對它的攝取，使藥物的半衰期從0.77 h 延長至4～5.6 h，AUC變?yōu)閭鹘y(tǒng)柔紅霉素制劑的11～12倍［17］。

阿糖胞苷脂質(zhì)體DepoCyt?通過DepoFoamTM技術(shù)將藥物封裝在多囊脂質(zhì)體中，運用該技術(shù)的要求是制劑處方中需要包含甘油三酯成分并利用二次乳化法制備，形成了由多個無同心內(nèi)部水室組成的蜂窩狀球形脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，每個水室由雙層膜隔開使其從外向里逐層緩慢釋藥，給藥間隔從2日1 次延長至2 周1 次。此外，應用于鎮(zhèn)痛領(lǐng)域的硫酸嗎啡脂質(zhì)體DepoDur?和布比卡因脂質(zhì)體Exparel?也通過DepoFoamTM技術(shù)分別延長其鎮(zhèn)痛效果至48 和72 h［18］，減少了注射次數(shù)，極大地改善了患者的順應性。

阿糖胞苷和柔紅霉素的復方脂質(zhì)體Vyxeos?通過梯度載藥法以5∶1 的物質(zhì)的量比共囊化這兩種藥物，粒徑約為100 nm。這種復方脂質(zhì)體是腫瘤化療領(lǐng)域中的一大突破，在急性髓系白血?。ˋML）的治療中可實現(xiàn)最大程度的協(xié)同作用，成為首款針對特定高風險的AML患者群體獲批的藥物，接受此復方脂質(zhì)體治療的患者中位總生存期為9.56個月，而對照組（接受阿糖胞苷和柔紅霉素普通制劑的直接治療）為5.95個月［19］。

長春新堿是細胞周期階段特異性化療藥物，長時間在腫瘤部位暴露有效濃度閾值以上對于其治療效果至關(guān)重要。長春新堿脂質(zhì)體Marqibo?使用了特制空白脂質(zhì)體OptisomeTM，它由鞘磷脂和膽固醇（物質(zhì)的量比，58∶42）構(gòu)成，粒徑約為100 nm，該制劑改善了游離長春新堿治療窗窄、血漿清除率快的問題，實現(xiàn)了將藥物安全劑量提高至2倍并滲漏至腫瘤部位緩慢釋放的功能［20］。

伊立替康是天然生物堿喜樹堿的水溶性半合成類似物，其化學結(jié)構(gòu)在酸性條件下為具有抗腫瘤活性的內(nèi)酯形式，而在生理條件下為無活性的羧酸鹽形式。伊立替康脂質(zhì)體Onivyde?利用蔗糖八硫酸鹽使藥物在水相中呈膠凝狀態(tài)或沉淀狀態(tài)而被穩(wěn)定包載，藥脂比高達800 g 藥物每物質(zhì)的量磷脂，半衰期長達56.8 h［6］。Onivyde?聯(lián)合氟尿嘧啶與甲酰四氫葉酸已被FDA 批準用于治療吉西他濱療效不佳的轉(zhuǎn)移性胰腺癌患者。

2.1.2 疏水性化學藥物脂質(zhì)體 力撲素（紫杉醇脂質(zhì)體注射液）是國內(nèi)外第1個上市的紫杉醇脂質(zhì)體產(chǎn)品，通過薄膜分散法和冷凍技術(shù)制備，使用脂質(zhì)體載藥而避免使用聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇復合溶媒，成功解決了紫杉醇溶解度低、毒性大以及溶質(zhì)引起超敏反應這三大問題［21］。此外，有2款臨床階段的紫杉醇脂質(zhì)體注射液也備受矚目，臨床Ⅲ期的紫杉醇脂質(zhì)體EndoTAG-1 中含有陽離子脂質(zhì)DOTAP 和中性脂質(zhì)DOPC，該陽離子脂質(zhì)體與腫瘤生長所需的帶負電荷的新生血管內(nèi)皮細胞相互作用而不影響正常組織，臨床研究顯示它與吉西他濱聯(lián)用可提高胰腺癌患者的存活率［6］。臨床Ⅱ期的紫杉醇脂質(zhì)體LEP-ETU 中含有關(guān)鍵成分心磷脂，它能與親脂性的紫杉醇劇烈作用，將其穩(wěn)定地嵌在脂質(zhì)體磷脂膜中，從而提高載藥效率和穩(wěn)定性。

注射用兩性霉素B 脂質(zhì)體凍干粉Ambisome?是全球首款脂質(zhì)體藥物，利用負電磷脂DSPG 與藥物結(jié)構(gòu)中帶正電的海藻糖胺結(jié)合將其穩(wěn)定裝載于雙分子膜上，使其在體內(nèi)緩慢釋放，有效降低藥物的腎毒性［22］。兩性霉素B 脂質(zhì)體Amphotec?是由膽固醇的天然代謝產(chǎn)物膽固醇硫酸鈉與兩性霉素B形成的熱力學穩(wěn)定的膠體復合物，兩者物質(zhì)的量比為1∶1，脂質(zhì)體粒徑小于100 nm，兩性霉素B 與膽固醇硫酸鈉強烈的相互作用減少了循環(huán)中游離的兩性霉素B從而顯著降低了腎毒性，國內(nèi)上市的鋒克松（注射用兩性霉素B 脂質(zhì)體凍干粉）為Amphotec?的仿制產(chǎn)品，對真菌感染的應答率比普通制劑更高。

2.2 載生物藥物的脂質(zhì)體

2.2.1 核酸脂質(zhì)體 隨著全基因組測序的進步以及完整核苷酸序列數(shù)據(jù)庫的建立，核酸藥物的研發(fā)愈發(fā)受人們關(guān)注，有希望通過抑制起始基因的表達對抗當前無法治愈的疾病，但核酸所涉及的沉默效率、脫靶、穩(wěn)定性和遞送載體方面仍是技術(shù)難題，尤其是較大的相對分子質(zhì)量（約13.5 kD）和高負電荷性質(zhì)導致常用的遞送技術(shù)無法適用，Onpattro?（Patisiran 陽離子脂質(zhì)體注射液）的成功上市彰顯了脂質(zhì)體遞送核酸藥物的巨大潛力。通常，帶負電的核酸容易與永久帶正電的脂質(zhì)形成靜電復合物而封裝進脂質(zhì)體，但是這種帶正電的系統(tǒng)因免疫活化和細胞毒性作用在體內(nèi)誘導出明顯的毒性，因此Alnylam 公司開發(fā)了胺基陽離子脂質(zhì)DLin-DMA，通過其pH 敏感的可電離特性降低毒性。處方進一步的優(yōu)化過程中發(fā)現(xiàn)siRNA 基因沉默效率與陽離子脂質(zhì)的pKa及其對ApoE 的吸附能力密切相關(guān)，其最佳pKa約為6.4，最終開發(fā)出陽離子脂質(zhì)MC3，制成的脂質(zhì)體基因沉默效率比用DLinDMA 的高兩個數(shù)量級以上［12］。此外，PEG 化脂質(zhì)的類型會影響脂質(zhì)體的大小及其與靶細胞膜的相互作用，因此選用具有相對短的C14?；湹腜EG 化脂質(zhì)以達到最佳的轉(zhuǎn)染效果，同時加入中性脂質(zhì)DSPC 與膽固醇提高脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，于是Onpattro 的最終脂質(zhì)組成為MC3、DSPC、PEG2000-C-DMG 和 膽 固 醇，質(zhì) 量 比 為13∶3.3∶1.6∶6.2［23］。

2.2.2 多肽脂質(zhì)體 首個治療非轉(zhuǎn)移性骨肉瘤的藥物Mepact?（米伐木肽脂質(zhì)體凍干粉）是粒徑小于100 nm 的多層脂質(zhì)體，米伐木肽由胞壁酰三肽（MTP）與二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺（DPPE）復合而成，磷脂的加入提高了MTP 的親脂性并有助于將其摻入脂質(zhì)體，療效優(yōu)于胞壁酰二肽（MDP）脂質(zhì)體，這是多肽藥物二次開發(fā)的成功案例。

2.2.3 疫苗脂質(zhì)體 在疫苗領(lǐng)域，Epaxal?（甲肝疫苗脂質(zhì)體）是第1 個上市的脂質(zhì)體疫苗，基于病毒體技術(shù)平臺Virosome 將甲肝病毒糖蛋白嵌插在磷脂雙分子層上，疫苗株RG-SB 結(jié)合在脂質(zhì)體表面，粒徑約150 nm，處方中不含有鋁鹽和硫柳汞作為佐劑，因此耐受性較高、注射部位疼痛感及不良反應較小，免疫效果長達20 年［6］。Inflexal V?（流感疫苗脂質(zhì)體）也使用了Virosome 技術(shù)將流感病毒A和B的血凝素表面分子裝載于磷脂雙分子上，臨床上顯示出優(yōu)越的免疫原性和耐受性。

3 脂質(zhì)體注射劑開發(fā)的新趨勢

目前脂質(zhì)體注射劑的臨床應用面臨許多挑戰(zhàn)，首先EPR 效應的臨床異質(zhì)性導致脂質(zhì)體在腫瘤中的蓄積產(chǎn)生較大的可變性，其次腫瘤細胞外基質(zhì)產(chǎn)生的物理屏障限制了脂質(zhì)體載體從腫瘤血管周圍空間的滲透，此外盡管脂質(zhì)體藥物在腫瘤中的蓄積明顯增加，但能從載體中釋放出的藥物量較少，療效受到了限制。因此為了更有效地調(diào)控脂質(zhì)體藥物在病灶部位的富集與釋放，許多新型的脂質(zhì)體被開發(fā)出來。

3.1 配體靶向型脂質(zhì)體

在脂質(zhì)體表面結(jié)合一些功能性配體如抗體、多肽、蛋白質(zhì)和碳水化合物等，可以使脂質(zhì)體被過量表達相應受體的細胞選擇性地吸收，以此提高藥物在病灶部位的蓄積并減少脫靶毒性從而改善治療效果。例如許多腫瘤細胞中會過表達葉酸受體（FAR）和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TfR），相應的配體可以與這些受體特異性結(jié)合以實現(xiàn)主動靶向功能。Gazzano 等［24］制備的用葉酸修飾的硝化阿霉素脂質(zhì)體（LNDF）可以更有效地靶向Dox 耐藥的FAR陽性/P-gp 陽性乳腺癌細胞，另外硝化阿霉素具有的線粒體定位功能使其在線粒體中蓄積，從而損害線粒體能量代謝并觸發(fā)線粒體依賴性細胞凋亡。Zheng 等［25］制備了基于轉(zhuǎn)鐵蛋白和細胞穿透肽的雙功能阿霉素脂質(zhì)體（TTD），由于TfR 在血腦屏障（BBB）和神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中過表達，在BBB模型中BCEC 細胞對TTD 的攝取量比普通阿霉素脂質(zhì)體高11 倍，離體生物分布試驗中TTD 在腦瘤大鼠大腦中的蓄積量顯著提高，并且在肝和腎的濃度降低。

免疫脂質(zhì)體（IL）是抗體或抗體片段偶聯(lián)的脂質(zhì)體，旨在選擇性地靶向表達抗原的細胞，與抗體-藥物偶聯(lián)物（ADC）相比，IL 具有更大的載藥量，另外它還可用于免疫測定、免疫治療和成像。但由于不良的藥代動力學和免疫原性，IL 的體內(nèi)性能有限，新一代的免疫脂質(zhì)體將抗體的靶標特異性與PEG 的空間穩(wěn)定性相結(jié)合產(chǎn)生長循環(huán)的免疫脂質(zhì)體［26］，并且PEG 末端抗體的隨機方向比脂質(zhì)體雙層上的抗體能更有效地促進抗原識別與結(jié)合［27］。Arabi 等［28］用抗CD44 單克隆抗體修飾長循環(huán)脂質(zhì)體阿霉素（PLD），在小鼠C-26 結(jié)腸癌模型中其抑制腫瘤生長的作用明顯高于普通PLD，并在心臟、腎臟等細胞中蓄積減少。MM-302 是Merrimack 公司開發(fā)的靶向HER2 陽性腫瘤細胞的脂質(zhì)體藥物，它將抗HER2單鏈抗體偶聯(lián)到阿霉素脂質(zhì)體的表面，MM-302 與曲妥珠單抗可以靶向HER2受體的不同結(jié)構(gòu)域，在Ⅰ期臨床試驗中兩者聯(lián)用表現(xiàn)出在HER2 陽性乳腺癌晚期患者中的協(xié)同抗腫瘤活性，提高了患者的緩解率（12%）和無進展生存期（7.6 個月）［29］，并且由于心肌細胞中HER2 的表達水平低，對阿霉素基本無攝取，臨床試驗中未觀察到心臟毒性的不良事件［30-31］。

目前越來越多主動靶向的脂質(zhì)體已被報道表現(xiàn)出一定的靶向性和增強的抗腫瘤活性，但臨床轉(zhuǎn)化過程中仍有許多問題待解決，包括疾病相關(guān)的解剖學和生理學障礙、靶標可及性、制劑穩(wěn)定性和體內(nèi)重復性等因素，不過不可否認的是，為了提高脂質(zhì)體的應用效果主動靶向是脂質(zhì)體注射劑未來發(fā)展的重要方向。

3.2 刺激響應型脂質(zhì)體

大量研究報道使用特殊脂質(zhì)成分或表面修飾物制備的脂質(zhì)體通過外部刺激（如溫度、超聲、電磁和光）或內(nèi)部刺激（如pH 和酶）可以控制藥物在特定部位釋放，實現(xiàn)更精準的治療。

早期的熱敏脂質(zhì)體（TSL）釋藥完全依賴于脂質(zhì)雙層滲透性的增加，這是由于在加熱至高于脂質(zhì)混合物的平均相變溫度時脂質(zhì)雙層可以從固體凝膠相轉(zhuǎn)變?yōu)橐壕?，但缺點是釋藥緩慢并且最多僅釋放70%。Celsion 公司的ThermoDox（阿霉素熱敏脂質(zhì)體）是第1種可用于臨床的熱敏脂質(zhì)體制劑，它由二棕櫚酰磷脂酰膽堿（DPPC）、單硬脂酰磷脂酰膽堿（MSPC）和DSPE-PEG 組成，物質(zhì)的量比為86∶10∶4，其中MSPC是溶血磷脂，在加熱至相變溫度時脂質(zhì)雙層上會形成孔隙通道而更有效地釋藥（如42 ℃時20 s 內(nèi)可釋藥80%）［32］。ThermoDox與射頻消融（RFA）結(jié)合用于治療無法手術(shù)的肝細胞癌得到了較好的Ⅰ期臨床數(shù)據(jù)，但在Ⅲ期HEAT試驗中并未到達主要終點（PFS 改善小于33%），對試驗進行失敗總結(jié)和調(diào)整后目前重新進行Ⅲ期臨床試驗。Dicheva等［33］開發(fā)了一種載有阿霉素的陽離子熱敏脂質(zhì)體（CTSL）用于雙重靶向腫瘤部位，結(jié)果表明CTSL 向腫瘤遞送阿霉素的量是普通TSL遞送的3 倍。另有許多研究在ThermoDox 的基礎(chǔ)上通過改變?nèi)苎字某煞峙c比例、改變加熱方式以及利用共載藥系統(tǒng)等更有效地提高了釋藥效率［34］。比如，程紫婷等［35］將紫杉醇熱敏脂質(zhì)體和siCOX-2 金納米星（GNS）構(gòu)建成共載藥系統(tǒng)，利用GNS 的光熱效應達到TSL 相變溫度42.6 ℃后釋藥，并通過GNS 深入腫瘤內(nèi)部的能力改善了腫瘤細胞對紫杉醇的耐藥作用。

光作為觸發(fā)條件的優(yōu)點是可以方便地從外部修改各種參數(shù)（如曝光時間、波長、光束直徑和激光強度）以適應不同的治療需求。光敏脂質(zhì)體（LSL）的觸發(fā)機制有很多種，包括光聚合、光氧化、光裂解和光異構(gòu)化，其中基于光氧化作用的LSL通常與光敏劑結(jié)合用于光動力療法（PDT），通過用630～820 nm 的光照射光敏劑而產(chǎn)生的單線態(tài)氧可以促使縮醛磷脂乙烯基醚鍵進行光氧化，縮醛磷脂酰膽堿分解為脂肪醛和溶血脂質(zhì)，誘導相轉(zhuǎn)變從而促進膜融合和內(nèi)容物釋放［36-37］。Luo 等［38］制備了光敏長循環(huán)阿霉素脂質(zhì)體Dox-PoP，其中不飽和磷脂二硬脂酰磷脂酰膽堿（DSPC）和光敏劑卟啉磷脂（PoP）的物質(zhì)的量比為53∶2，用665 nm的近紅外光照射裸鼠腫瘤組織15 min 后光照組腫瘤對Dox 的攝取量比未光照組的高6～7 倍。諾華公司開發(fā)的用于PDT 的Visudyne（維替泊芬脂質(zhì)體）中含有一種合成卟啉光敏劑維替泊芬（VPF），光敏劑與磷脂混合物的物質(zhì)的量比約為1∶8，注射后用692 nm 的非熱性二極管激光照射可選擇性地清除新生血管膜，對視網(wǎng)膜和脈絡膜組織的損害最小化［6］。

pH 敏感性脂質(zhì)體（PSL）在生理pH 7.4 時保持穩(wěn)定，但在酸性環(huán)境（如腫瘤組織）中不穩(wěn)定，可以將藥物釋放到遠離跨膜外排泵的胞質(zhì)溶膠中，通過防止溶酶體降解來提高藥物的利用度，這種現(xiàn)象被稱為“體內(nèi)逃逸”［39］，并且增加的細胞質(zhì)藥物濃度可能超過藥物外排轉(zhuǎn)運蛋白的能力，從而繞開了腫瘤中耐藥性發(fā)展的主要機制［40］。PSL 通常使用pH 敏感的錐形脂質(zhì)二油?；字Ｒ掖及罚―OPE）和弱酸性兩親物琥珀酸膽固醇酯（CHEMS），CHEMS 可以在生理pH 條件下穩(wěn)定DOPE，并在酸性pH 條件下促進膜融合。Zhao等［41］用腫瘤特異性pH 響應肽H7K（R2）2修飾的Dox-PSL可在pH 6.5時釋放超過80%的Dox，在C6荷瘤裸鼠的體內(nèi)抗腫瘤活性顯著高于普通PLD。Chang等［42］用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽修飾包載多西他賽的PSL，在相等時間內(nèi)RGD-PSL在pH 7.4 中釋藥53.3%，但在pH 5.0 中釋藥超過80%。然而目前要解決的問題是低pH觸發(fā)的藥物釋放可能不是腫瘤特異的，因為免疫細胞的內(nèi)體和溶酶體腔也呈酸性［2］。

與光敏性脂質(zhì)體類似，超聲敏感性脂質(zhì)體所裝載的聲敏劑可以在超聲的作用下產(chǎn)生與脂質(zhì)體膜反應的活性氧，破壞膜結(jié)構(gòu)而釋放藥物。不加聲敏劑時，超聲作用可以在脂質(zhì)雙層的疏水區(qū)域形成氣泡核，核變大至破壞膜結(jié)構(gòu)而形成一個暫時的小孔釋藥。磁敏感性脂質(zhì)體是將磁性納米粒包載在脂質(zhì)體的水核中，通過外部磁場將脂質(zhì)體引導至目標組織或器官中。氧化還原敏感性脂質(zhì)體中含有二硫鍵，而腫瘤細胞內(nèi)生物還原劑谷胱甘肽的濃度比正常細胞高4倍多，該脂質(zhì)體可以優(yōu)先在腫瘤細胞內(nèi)裂解二硫鍵釋放藥物。另外，腫瘤細胞中會高表達基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP），酶敏感性脂質(zhì)體中的MMP底物肽在腫瘤細胞中被酶解后可釋放藥物。此外，隨著研究的深入，脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)傾向于將配體靶向功能與刺激響應相結(jié)合以實現(xiàn)更高效的靶向與控釋功能。Chi 等［43］設計了一種具有透明質(zhì)酸（HA）親水殼的氧化還原敏感性陽離子長循環(huán)脂質(zhì)體阿霉素，其中二硫鍵可在腫瘤的谷胱甘肽環(huán)境中裂解而脫去PEG，HA 用于靶向CD44 過表達的骨肉瘤細胞，結(jié)果顯示可以增加阿霉素在腫瘤模型內(nèi)的蓄積量以及增強腫瘤抑制效果。為了滿足治療的需求，新型脂質(zhì)體的種類日益增多，促進未來的脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)趨向于智能化和個性化的精準治療。

4 脂質(zhì)體注射劑的監(jiān)管現(xiàn)狀

1990 年，全球首個脂質(zhì)體注射劑Ambisome?獲批上市，F(xiàn)DA 和EMA 開始發(fā)布關(guān)于脂質(zhì)體產(chǎn)品NDA 和ANDA 申報要求的指導文件草案。2002 年FDA 發(fā)布了《脂質(zhì)體藥物工業(yè)指南》，隨后于2010年發(fā)布了針對PEG 化脂質(zhì)體阿霉素注射劑的產(chǎn)品指南，2015 年又發(fā)布了更全面的指南修訂草案《脂質(zhì)體藥物CMC、人體藥動學和生物等效性研究以及標簽管理》，該指南于2018 年進一步更新與定稿。目前，F(xiàn)DA 已發(fā)布了針對4 種脂質(zhì)體藥品（兩性霉素B、鹽酸阿霉素、檸檬酸柔紅霉素和維替泊芬）的具體產(chǎn)品指南，其他脂質(zhì)體藥品的申請可以使用2018年發(fā)布的最終指南。目前已被批準的基本上是傳統(tǒng)脂質(zhì)體或長循環(huán)脂質(zhì)體制劑，但隨著脂質(zhì)體系統(tǒng)復雜性的增加，產(chǎn)品滲透性和靶向性機制的不同，脂質(zhì)體注射劑的監(jiān)管面臨挑戰(zhàn)，因此監(jiān)管機構(gòu)亟需根據(jù)學術(shù)與市場的引導而跟上脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)快速發(fā)展的步伐。

我國目前還沒有針對脂質(zhì)體注射劑的指導文件，脂質(zhì)體注射劑被歸類于特殊注射劑，2019年10月，NMPA 發(fā)布了《注射劑一致性評價技術(shù)要求的征求意見稿》，里面涉及特殊注射劑的評價，隨后，2019 年11 月又發(fā)布了《特殊注射劑一致性評價的征求意見稿》，可以看出國內(nèi)對特殊注射劑的關(guān)注度正在不斷提高。另外，隨著帶量采購的進行，注射用紫杉醇（白蛋白結(jié)合型）已納入集中采購，或?qū)M一步帶動特殊注射劑包括脂質(zhì)體注射劑的迅速發(fā)展。同時，醫(yī)藥企業(yè)也開始將產(chǎn)品研發(fā)管線錨向高端制劑，促進了學術(shù)界與產(chǎn)業(yè)界之間的協(xié)作，有望加快注射用脂質(zhì)體產(chǎn)品的開發(fā)速度。

5 結(jié) 語

目前已有許多注射用脂質(zhì)體制劑進入市場，一定程度上改善了化療藥物的毒性以及患者的依從性。但由于脂質(zhì)體技術(shù)壁壘高、質(zhì)量控制難、優(yōu)質(zhì)原輔料欠缺、產(chǎn)業(yè)化設備缺乏等問題，脂質(zhì)體制劑從實驗室到工業(yè)化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)移速度仍然比較緩慢。新型的配體靶向型脂質(zhì)體和刺激響應型脂質(zhì)體在實驗室階段有了一定的研究進展，但腫瘤異質(zhì)性問題使其臨床轉(zhuǎn)化率仍較低，脂質(zhì)體的復雜性也給生產(chǎn)和監(jiān)管帶來了進一步的挑戰(zhàn)。隨著質(zhì)量源于設計（QbD）理念、微流控技術(shù)和過程分析技術(shù)在制劑制造、放大和評估中的應用［31］，脂質(zhì)體的產(chǎn)品轉(zhuǎn)化率也在不斷提高，通過學術(shù)界、工業(yè)界和監(jiān)管機構(gòu)的努力與合作，有望將脂質(zhì)體開發(fā)為安全、有效、可控以及可用于精準治療的納米制劑。