彭豐 王敏 謝昱 秦仁義

肝門部膽管癌病人綜合治療后5年生存率仍不到15%[1-3]，其原因主要是其發(fā)病隱匿，同時缺乏敏感的化療方案，使其綜合療效始終處于瓶頸階段[4]。近年來，長鏈非編碼 RNA(long noncoding RNA，LncRNA)在腫瘤中的作用成為研究熱點[5-7]。LncRNA在基因組印記、染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄激活等過程中發(fā)揮著重要作用[8-9]。我們通過前期基因芯片篩選出多條膽管癌差異性表達LncRNA，其中LncRNA SNHG1在結(jié)腸癌、肝癌的增殖轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[10-11]。本研究分析LncRNA SNHG1在膽管癌中的表達水平及其與臨床特征的相關(guān)性。

對象與方法

一、對象

2016年1月～2018年12月我院行根治性切除手術(shù)的膽管癌病人36例，其中男性19例，女性17例，年齡46～71歲，平均年齡(56.7±8.03)歲。所有病人均按NCCN指南進行診斷，且未在術(shù)前接受放療或者化療，均由術(shù)后病理檢查證實為肝門部膽管癌。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準，所有病人均簽署知情同意書。

二、方法

收集36例膽管癌病人手術(shù)切除腫瘤及癌旁組織。術(shù)中距離所切除距腫瘤>1.5 cm膽管組織定義為癌旁組織，所有膽管癌及癌旁組織手術(shù)切除離體30分鐘內(nèi)迅速放入-80℃液氮保存。采用Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄及Realtime PCR試劑均購于TAKARA公司。LncRNA SNHG1逆轉(zhuǎn)錄及Realtime PCR引物均由廣州銳博生物公司設(shè)計并合成。采用RT-PCR分別測量膽管癌及癌旁組織中LncRNA SNHG1表達水平，以GAPDH為內(nèi)參，采取2-△△CT測量相關(guān)表達水平，每個實驗均重復實驗3次。取LncRNA SNHG1在36例膽管癌病人中的表達中位數(shù)為標準，將病人分為高表達組和低表達組。術(shù)后對所有病人進行定期隨訪，包括電話隨訪、門診隨訪及住院復查等方式。連續(xù)2次隨訪時間間隔不少于2個月，隨訪截止日期為2019年12月。

三、統(tǒng)計學方法

應用 SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并應用 Log-rank檢驗比較兩組病人生存率的差異。采用多因素Cox比例風險回歸模型評估影響膽管癌預后的獨立危險因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1.膽管癌與癌旁組織中LncRNA SNHG1的表達水平：LncRNA SNHG1在膽管癌中的表達均高于癌旁組織。綜合全部36對膽管癌標本及對應癌旁結(jié)果，膽管癌組織中LncRNA SNHG1表達水平較對應癌旁組織高(1.80±1.68)倍，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.膽管癌病人LncRNA SNHG1表達水平與臨床特征的相關(guān)性見表1。LncRNA SNHG1的表達量與病人年齡、性別、分化程度、T分期及CA19-9水平均無明顯相關(guān)性(P>0.05)，與病人是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。在發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，LncRNA SNHG1低表達病人比率顯著高于高表達組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3.差異LncRNA SNHG1表達水平膽管癌病人生存期分析見圖1、表2。低表達LncRNA SNHG1的膽管癌病人術(shù)后生存率高于高表達組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。多因素Cox比例風險回歸模型分析評估結(jié)果顯示，年齡、血漿CA19-9 表達水平和LncRNA SNHG1表達水平均是影響膽管癌病人臨床預后的獨立因素(P<0.05)。

表1 肝門部膽管癌病人LncRNA SNHG1表達水平與臨床特征的關(guān)系分析(例)

表2 肝門部膽管癌病人多因素Cox比例風險回歸模型分析

討 論

肝門部膽管癌綜合診療效果仍處于一個瓶頸，缺乏早期有效的診斷方法是重要原因之一[12-13]。LncRNA作為腫瘤診斷及標識預后的特殊生物標志物的潛質(zhì)也逐漸被發(fā)掘出來[14-15]。探索肝門部膽管癌自身的特異性LncRNA標志物就成為了提高其綜合診療效果的一個可能突破點。我們的研究團隊在前期的研究中篩選了膽管癌差異性表達的LncRNA，并將其中之一的LncRNA SNHG1作為本次研究對象。

LncRNA SNHG1位于人11號染色體長臂1區(qū)2帶3亞帶，包含11個外顯子，其表達水平的上調(diào)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。如LncRNA SNHG1在骨肉瘤和結(jié)直腸癌中被證實可激活Notch及Wnt/β-catenin信號通路[16-17]。在肝癌和骨肉瘤中，LncRNA SNHG1分別被證實可以通過下調(diào)miR-195、miR-326和miR-577促進腫瘤細胞的增殖[11，18-19]。在肝癌細胞中，LncRNA SNHG1可通過抑制p53表達，促進肝癌細胞增殖、抑制其凋亡[20]。上述研究都表明，LncRNA SNHG1可能與多個腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們團隊通過本次研究，初步闡明了LncRNA SNHG1在膽管癌病人臨床特征的相關(guān)性。

我們對本中心36例肝門部膽管癌病人腫瘤及癌旁組織的LncRNA SNHG1表達水平進行了檢測，發(fā)現(xiàn)LncRNA SNHG1在膽管癌組織中呈顯著高表達，這與其在其他腫瘤中的表達水平類似，進一步闡明了其可能的致癌基因特性。我們通過對膽管癌病人LncRNA SNHG1表達水平進行單因素分析，發(fā)現(xiàn)病人腫瘤組織中LncRNA SNHG1表達水平與病人是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這也為今后進一步研究明確其可能的分子生物學機制提供了方向。我們還發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人中，低表達LncRNA SNHG1的比率明顯偏高，其機制可能與膽管癌細胞在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)有關(guān)，低表達LncRNA SNHG1轉(zhuǎn)移速度會稍慢于高表達組，但一旦出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，間質(zhì)化腫瘤細胞形成轉(zhuǎn)移子灶的速度會明顯增加，這也是為未來進一步研究其可能對膽管癌惡性生物學效應的影響機制揭示了潛在的亮點。多因素回歸分析表明，低表達LncRNA SNHG1的膽管癌病人術(shù)后生存率高于高表達組，不僅闡明了其可能的生物學特性，更提示了其將來作為肝門部膽管癌診療的新生物學標志物的潛質(zhì)。

綜上所述，我們通過本次研究，初步闡明了LncRNA SNHG1在肝門部膽管癌中的表達水平及其與膽管癌病人臨床特征的相關(guān)性。LncRNA SNHG1表達水平可作為膽管癌病人判斷預后的重要指標。這為今后LncRNA SNHG1在膽管癌惡性生物學行為及機制的深層次研究明確了研究的方向，也為其可能的臨床應用研究提供了理論依據(jù)。