曲大偉 原平玫

【摘 要】：目的本文主要針對腦脊液有核細(xì)胞計數(shù)偏低時細(xì)胞染色分類對臨床的參考價值進(jìn)行分析研究。方法選取2016年6月到2019年10月期間有核細(xì)胞計數(shù)<20×106/L的腦脊液標(biāo)本113例，細(xì)胞染色分類結(jié)果與患者的臨床資料進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)17例標(biāo)本存在異常細(xì)胞，其中胃癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞29.4%（5/17），肺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞23.5%（4/17），淋巴瘤細(xì)胞17.6%（3/17），乳腺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞5.9%（1/17），白血病幼稚細(xì)胞11.8%（2/17），吞噬細(xì)胞（有含鐵血黃素）11.8%（2/17）;淋巴細(xì)胞分類升高（>80%）有34例，單核細(xì)胞升高（>45%）18例，1例出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞高（>5%）。腦膜轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞染色分類法檢出異常細(xì)胞的陽性率為71.4%（10/14）明顯高于頭顱CT/MRI檢查21.4%（3/14），有差異顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.021）。結(jié)論腦脊液細(xì)胞計數(shù)<20×106/L時仍需要進(jìn)行細(xì)胞染色分類，特別是對于懷疑腦膜轉(zhuǎn)移癌、淋巴瘤侵犯中樞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者，而且細(xì)胞染色分類法早期診斷作用可能優(yōu)于CT/MRI檢查。

【關(guān)鍵詞】：腦脊液;細(xì)胞染色分類;計數(shù)偏低;異常細(xì)胞

【中圖分類號】R446.14【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）07-21--01

引言

結(jié)核性腦膜炎（簡稱結(jié)腦），是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的腦膜、脊膜的慢性非化膿炎癥，嚴(yán)重時可侵犯腦血管、腦實質(zhì)及脊髓，有很高的致殘率和病死率，其預(yù)后與早期診斷和及時抗結(jié)核治療密切相關(guān)。因此，尋找快速、敏感性高、特異性強、操作簡單的結(jié)腦早期診斷方法，一直是結(jié)腦研究中亟待解決的問題。本研究觀察腦脊液細(xì)胞學(xué)的動態(tài)變化，并對腦脊液進(jìn)行玻片離心改良抗酸染色檢測，旨在探討2種方法在結(jié)腦早期診斷中的臨床價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取煙臺業(yè)達(dá)醫(yī)院2016年6月至2019年10月期間住院采集的有核細(xì)胞計數(shù)均在20×106/L以下的腦脊液標(biāo)本113例。同步通過住院信息系統(tǒng)收集患者的臨床病例資料，通過LIS系統(tǒng)收集同一份腦脊液標(biāo)本的葡萄糖、氯化物、血清腺苷脫氨酶（ADA）和總蛋白等生化檢驗結(jié)果。

1.2 方法

1.2.1 染色前處理

對腦脊液玻片離心制片：用吸水紙做夾層，用專用甩片固定夾子依次按順序固定玻片與吸水紙及專用離心漏斗，放置甩片機上，滴入新鮮腦脊液0.3-0.Sml（不超過O.SmI），400RPM離心4min，制成待檢載玻片，晾千。固定：4%中性甲醛滴加在已經(jīng)離心處理過的載玻片上，覆蓋全片，固定15分鐘，用蒸餾水溫和沖洗，室溫待千。破膜處理：將固定好的玻片置于玻璃槽中，用新鮮配制的0.2%Triton-X100浸泡，剛剛沒過玻片為宜，置于4℃冰箱30分鐘，取出玻片，PBS緩沖液沖片，室溫待千。

1.2.2 腦脊液細(xì)胞的收集

是腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查的前提和重要環(huán)節(jié)，只有收集到大量形態(tài)完整的細(xì)胞才能進(jìn)行染色和分類診斷。目前腦脊液細(xì)胞的收集技術(shù)以細(xì)胞玻片離心沉淀法應(yīng)用較廣，其效果較理想。國產(chǎn)化的有FMU-5型腦脊液細(xì)胞玻片沉淀器、FCS型離心沉淀儀和合資的Cytospin細(xì)胞玻片離心沉淀儀等。上述各型收集器各自優(yōu)點和不足。無論使用哪一種細(xì)胞收集器，必須符合一下要求：1.能夠收集標(biāo)本中較多的細(xì)胞，損失少;2.腦脊液量不需太多;3.收集過程既要快速又不損害細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，細(xì)胞分布均勻，清晰;4.標(biāo)本范圍小，便于觀察;5.能夠耐受各種固定劑和染色劑;6.要求設(shè)備簡單，便于操作，離心時間，速度和加速度可自控，且運轉(zhuǎn)穩(wěn)定不受電壓變化影響;7.嚴(yán)格按照各型離心儀操作程序，特別注意離心儀不宜起動過猛或初速過快。由于這種突然的外力作用，常易導(dǎo)致腦脊液細(xì)胞的相互撞擊或（和）撞向沉淀管的管壁，而造成不同程度的細(xì)胞破壞和變形。

2 結(jié)果

2.1 常見細(xì)胞染色分類情況和細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞染

色后分類發(fā)現(xiàn)17例異常細(xì)胞，其中最常見的是轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，胃癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞有5例，占29.4%（5/17），肺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞4例，占23.5（4/17）;其次為淋巴瘤細(xì)胞3例，占17.6（3/17）。常見的轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞和腦膜白血病細(xì)胞形態(tài)見圖1。113例患者中，淋巴細(xì)胞分類升高（>80%）有34例;單核細(xì)胞升高（>45%）有18例，1例出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞升高（>5%）。

2.2 細(xì)胞染色分類法與影像學(xué)檢查

實體惡性腫瘤、淋巴瘤和白血病患者做細(xì)胞染色分類檢查檢出異常細(xì)胞的陽性率均高于相近時間段的頭顱CT/MRI檢查。特別是對于實體惡性腫瘤，細(xì)胞染色分類檢查檢出異常細(xì)胞的陽性率為71.4%（10/14）明顯高于CT/MRI檢查發(fā)現(xiàn)占位性病變的陽性率21.4%（3/14），兩種檢查方法有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.021）。

3 討論

腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測是一種定量與定性方法相結(jié)合的診斷技術(shù)，其結(jié)果中包含的信息不單純是有無炎癥或有無腫瘤，神經(jīng)科醫(yī)師應(yīng)結(jié)合患者臨床表現(xiàn)，深入分析腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果，方可從中獲得更多有價值的診斷信息。我國臨床腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測的總體水平較高，與我們緊密結(jié)合臨床的診斷方法不無關(guān)系。40年前，我國的腦脊液細(xì)胞學(xué)實驗室檢測首先是由神經(jīng)科前輩引進(jìn)和開展的，目前國內(nèi)主要的腦脊液細(xì)胞學(xué)實驗室多設(shè)立在神經(jīng)科，許多腦脊液細(xì)胞學(xué)診斷是由神經(jīng)科醫(yī)師執(zhí)行的。臨床與腦脊液細(xì)胞學(xué)緊密結(jié)合的診斷方法和學(xué)術(shù)方向是我們的歷史傳統(tǒng)與現(xiàn)實優(yōu)勢，值得保持與發(fā)揚。同時，為了普及這一實用且價廉的診斷方法，促進(jìn)其學(xué)術(shù)和技術(shù)水平的提高，期望臨床檢驗科和病理科的更多同仁積極地參與此項工作。

參考文獻(xiàn)

[1] 龐曉川，李琳，王永香，等.液基細(xì)胞制片聯(lián)合巴氏染色觀察實體瘤腦膜轉(zhuǎn)移患者腦脊液中腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點[J].中國老年學(xué)雜志，2018，38（16）：3874-3878.

[2] 周雯雯，牛小青，王昭.慢性淋巴細(xì)胞白血病伴中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中國腫瘤臨床，2013，40（22）：1400-1403.