于佳楠，王 晶，陳貝妮，韓金恒，候佳妮，王 健，姜云瑤 ，李朝輝，許春彥，牛淑玲*

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長春 130118；2.長春科技學(xué)院，吉林 長春 130600；3.吉林大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130062； 4.長春市畜牧總站，吉林 長春 130062)

自1946年MOORE等[1]發(fā)現(xiàn)鏈霉素具有促進(jìn)肉仔雞生長的功能后，抗生素及其添加劑為家禽業(yè)的發(fā)展做出巨大貢獻(xiàn)，但長期大量使用抗生素導(dǎo)致耐藥性、藥物殘留及污染環(huán)境等嚴(yán)重問題[2]。中草藥來源于自然，含有大量有機(jī)復(fù)合物、活性物質(zhì)與酶既可以滿足畜禽的營養(yǎng)需求，又可加快動物機(jī)體新陳代謝促進(jìn)生長。本研究通過在吉林蘆花雞飼糧中添加復(fù)方中草藥，測定蘆花雞的生長性能、血清生化指標(biāo)、激素水平及腸道菌群結(jié)構(gòu)等，探究該復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞生長性能的影響，為中草藥添加劑在家禽無抗養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧隨機(jī)將600只1日齡蘆花雛雞分為Ⅰ、Ⅱ兩組，每75只為1個(gè)重復(fù)組，每組4個(gè)重復(fù)。Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)日糧，Ⅱ組飼喂在Ⅰ組基礎(chǔ)上添加0.3%復(fù)方中草藥,試驗(yàn)期為84 d 。試驗(yàn)各組雞均在同一雞舍內(nèi)飼養(yǎng)，自由采食、乳頭式飲水器飲水和疊層籠養(yǎng)(2層)，自然光照以及常規(guī)免疫。本試驗(yàn)所用日糧配方見文獻(xiàn)[3]。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物及材料實(shí)驗(yàn)動物購自吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院雞場，試驗(yàn)場地由吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。復(fù)合中草藥添加劑由長春市康發(fā)動物藥品研究所提供，成分為黃芪、甘草、黨參、陳皮、當(dāng)歸、白術(shù)和升麻共7味，其配比依次為6∶6∶4∶3∶3∶1∶1。

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1生長性能 于84 d末早晨8：00禁食12 h后空腹稱試驗(yàn)雞體質(zhì)量，每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)稱40只，統(tǒng)計(jì)耗料量，計(jì)算平均日增資料、平均耗料量及料重比。

1.3.2血清生化及激素指標(biāo) 于84 d末每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)選取20只稱質(zhì)量，并進(jìn)行翅靜脈采血分離血清，-20℃冰箱中保存以備用，檢測尿素、甘油三酯、總膽固醇和生長激素等指標(biāo)，檢測地點(diǎn)均為長春市金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心。

1.3.3腸道菌群測定 于84 d末每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)選取1只采集盲腸內(nèi)容物，對樣品的16S rDNA V3+V4區(qū)進(jìn)行高通量測序,檢測地點(diǎn)為百邁客生物科技有限公司。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞生長性能的影響與Ⅰ組相比，Ⅱ組的平均日增質(zhì)量提高12.07%(P<0.01)，飼料轉(zhuǎn)化率改善7.75%(P<0.05)表1。

表1 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞生長性能的影響 g·d-1

2.2 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞血清生化指標(biāo)及激素水平的影響與Ⅰ組相比，Ⅱ組尿素、甘油三酯水平分別降低10.40%和3.49%(P>0.05)，且生長激素水平提高9.89%表2。

表2 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞血清生化指標(biāo)及激素水平的影響

2.3 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞腸道菌群的影響

2.3.1盲腸內(nèi)容物測序結(jié)果分析 隨著測序深度與樣本量的增加樣本曲線均趨于平坦且樣本間共有物種趨于飽和，可進(jìn)行數(shù)據(jù)分析(圖1，2)。

2.3.2蘆花雞腸道菌群Alpha多樣性指數(shù)分析 見表3。本試驗(yàn)各組的測序覆蓋深度(Coverage指數(shù))均在0.99以上，檢測結(jié)果可用。與Ⅰ組相比，Ⅱ組Simpson指數(shù)值降低25.00%，Shannon指數(shù)值提高1.65%，說明該中草藥添加劑提高了試驗(yàn)雞腸道菌群的多樣性。

圖1 稀疏曲線分析

圖2 物種累積曲線分析

表3 Alpha多樣性指數(shù)

2.3.3復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞腸道菌群結(jié)構(gòu)分析 在門水平上(表4)，試驗(yàn)各組共同的優(yōu)勢菌門為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、螺旋菌門和互氧菌門5類。與Ⅰ組相比，Ⅱ組變形菌門與螺旋菌門分別降低17.28%(P<0.05)和10.84%(P>0.05)。在屬水平上(表5)，試驗(yàn)各組雞盲腸菌群中相對含量較高的菌屬分別是擬桿菌屬、理研菌科＿RC9菌群、脫磷孤菌屬、考拉桿菌屬、瘤胃球菌屬和螺旋體菌屬。與Ⅰ組相比，Ⅱ組瘤胃球菌屬降低69.87%(P<0.05)；考拉桿菌屬提高3.50%(P>0.05)。

表4 門水平物種分布 %

表5 屬水平物種分布 %

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞生長性能的影響中草藥在動物機(jī)體代謝過程會為動物機(jī)體提供蛋白質(zhì)、氨基酸、糖、脂肪、淀粉、維生素、礦物質(zhì)微量元素等豐富營養(yǎng)物質(zhì)，從而達(dá)到促進(jìn)生長的作用。陳皮中富含揮發(fā)油、川皮酮和黃酮類化合物等多種中藥化學(xué)成分[4]，具有理氣消食和健脾養(yǎng)胃功效，且黨參對消化系統(tǒng)有調(diào)整胃腸運(yùn)動功能，馬方勵(lì)等[5]試驗(yàn)證明黨參多糖具有提高體質(zhì)量及飼料利用率的作用，丁彩霞等[6]也研究表明以陳皮為主的復(fù)方中草藥添加劑顯著提高肉雞的平均日增質(zhì)量，提高飼料轉(zhuǎn)化率，本試驗(yàn)結(jié)果與其一致。由此可見該添加劑對提高蘆花雞飼料利用率和生長有一定的促進(jìn)作用。

3.2 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞血清生化指標(biāo)和血清激素水平的影響本試驗(yàn)84日齡血清檢測結(jié)果顯示Ⅱ組尿素水平呈下降趨勢，該結(jié)果與彭慧珍等[7]試驗(yàn)結(jié)果一致。分析原因可能是白術(shù)具有調(diào)節(jié)高脂血癥的功效，在飼糧中添加白術(shù)對機(jī)體蛋白質(zhì)和脂類的合成與代謝、肝臟的機(jī)能具有促進(jìn)作用；而陳皮中的橙皮苷也能夠抑制過多的膽甾醇與胰脂酶活性可以增加甘油三酯排出而降低血漿中膽固醇水平[8]；同時(shí)當(dāng)歸生物有效成分阿魏酸能夠抗氧化和清除自由基，從而達(dá)到降低血脂作用[9]。84日齡的血清激素水平，Ⅱ組與Ⅰ組相比生長激素水平提高9.80%，可能是黨參中多種營養(yǎng)因子及促生長因子，可通過促生長激素分泌因子作用于垂體，促進(jìn)生長激素分泌達(dá)到促進(jìn)機(jī)體生長的作用[10]。

3.3 復(fù)方中草藥添加劑對蘆花雞腸道菌群的影響腸道微生物菌群被認(rèn)為是一個(gè)重要“內(nèi)源性器官”，其組成或代謝活性的改變可能會反過來影響宿主的健康，盲腸腸段的封閉性環(huán)境相比于小腸的快速運(yùn)輸環(huán)境，能夠更長時(shí)間的儲存內(nèi)容物[11]。雞盲腸中厚壁菌門和擬桿菌門在營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和宿主能量代謝中起著重要作用，變形菌門是細(xì)菌中最大的一門，包括多種病原菌。本試驗(yàn)結(jié)果顯示試驗(yàn)Ⅱ組雞盲腸中擬桿菌門、厚壁菌門和變形菌門均為主要的優(yōu)勢菌群。鄢偉倫等[12]研究中發(fā)現(xiàn)白術(shù)有改善腸道菌群狀態(tài)的功能,試驗(yàn)組變形菌門相比于對照組顯著降低17.28%，本試驗(yàn)結(jié)果與其一致，分析原因可能與白術(shù)中揮發(fā)油成分有關(guān)，揮發(fā)油在腸道系統(tǒng)中對多種細(xì)菌具有較好的抑菌活性，對大腸桿菌的抑菌率達(dá)到了29.74%[13]；還可能是甘草酸顯著增加了活性氧和氮的產(chǎn)生，增加抗菌基因的表達(dá)，激活雞巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞和沙門菌的殺傷能力[14]，且甘草黃酮對多種革蘭陰性菌也具有較強(qiáng)的抑制作用[15]。

短鏈脂肪酸是碳水化合物經(jīng)腸道微生物菌群發(fā)酵后的代謝產(chǎn)物，主要發(fā)生在細(xì)菌密集的盲腸，在腸道生理機(jī)能中起著重要的作用[16]。張俊杰等[17]研究表明來自厚壁菌門的考拉桿菌屬、費(fèi)氏桿菌屬和梭菌屬以及擬桿菌門的擬桿菌屬均具有在腸道內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸的能力。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與Ⅰ組相比，屬水平上Ⅱ組瘤胃球菌屬顯著降低69.87%，考拉桿菌屬提高3.80%?？赡苁屈S芪多糖能明顯促進(jìn)有益菌的生長，又可間接抑制致病菌的生長[18]。中草藥中的蛋白質(zhì)、多糖、脂類、微量元素和維生素等營養(yǎng)成分能夠?yàn)槲改c道內(nèi)的菌群微生物提供生長代謝底物，從而促進(jìn)微生物的新陳代謝、調(diào)整菌群結(jié)構(gòu)、提高有益菌群繁殖能力，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。