劉曉霞，李衛(wèi)霞，蘇鎮(zhèn)軍，賈金海，段曉輝，李志加，*，賀曉磊，呂林林，劉 睿，王云曉

(1．河北工程大學醫(yī)學院，河北 邯鄲 056038；2．河北工程大學附屬醫(yī)院，河北 邯鄲 056002；3．河北醫(yī)科大學，河北 石家莊 050017)

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是酶性抗氧化系統(tǒng)的重要成員，其可通過歧化作用將超氧陰離子自由基轉化為過氧化氫和氧氣，進而清除體內超氧陰離子，達到抗氧化作用。已有研究發(fā)現(xiàn)其在外陰鱗狀細胞癌[1]、胃癌[2]、卵巢癌[3]等多種腫瘤中表達異常。且有學者研究了其與腫瘤的某些臨床病理特征的關系[4]，認為其對腫瘤的診斷[5]和惡性度的預測[6]有一定的意義。但所討論的臨床病理特征有限，且有關SOD 活力與放化療聯(lián)合治療療效、生存情況的關系，尚鮮見報道。本文考慮到肺因其特殊的結構和功能，更易受內源性氧化物和空氣中污染物的影響，遭受氧化應激介導的損傷[7]，發(fā)生病理改變，導致包括肺癌在內的多種疾病。故選擇占肺癌比例最大的非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)作為研究對象，探討晚期NSCLC病理臨床特征、放化療聯(lián)合治療療效及總生存期與SOD活力的關系，以期尋找評估療效、判定預后的指標?，F(xiàn)報告結果如下。

1 材料與方法

1.1 病例資料

選擇河北工程大學附屬醫(yī)院腫瘤科2018 年1—12月初次確診NSCLC 的患者174 例，其中男性120 例，女性54例，年齡48～80歲，中位年齡65.0歲；有吸煙史104例，無吸煙史70例；鱗狀細胞癌92例，腺癌82例；病理分級：低分化82 例，中分化46 例，高分化46例；TNM分期：Ⅲ期78例，Ⅳ期96例。

入選標準：①經病理學確診；②不符合靶向治療或免疫治療。排除標準：①轉移性NSCLC；②合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；③合并免疫性疾病；④合并高血壓；⑤合并糖尿病。

選取同期80例在該院體檢的血壓、血糖均正常的健康體檢者作對照，其中男性57 例，女性23 例；年齡范圍48～75 歲，中位年齡62.0 歲；有吸煙史48 例，無吸煙史32 例。兩組年齡(U=6 082.500，P=0.106)、性別(χ2=0.135，P=0.713)和吸煙史(χ2=0.001，P=0.972)差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。本實驗經河北工程大學醫(yī)學院倫理委員會審核批準，且所有入組對象均簽署知情同意書。

1.2 治療方案

所有入組患者均采用放療聯(lián)合化療的治療方案。

1.2.1 放療方案采用適形調強放療，在Varian Eclipse DX 計劃系統(tǒng)勾畫靶區(qū)和危及器官；Clinic IX直線加速器進行放療，放療劑量為60 Gy，2 Gy/次，每日1次，每周5次，共30次。

1.2.2 化療方案肺鱗癌患者采用TP方案，第1天用紫杉醇(175 mg/m2)聯(lián)合順鉑(75 mg/m2)靜滴；肺腺癌患者采用PP方案，第1天用培美曲塞(500 mg/m2)聯(lián)合順鉑(75 mg/m2)靜滴。放療第1 周內開始同步化療，21 d為一個化療周期，放療期間化療2周期，放療結束后，鞏固化療2周期。

1.3 儀器與試劑

直線加速器購自美國瓦里安公司；酶標儀購自美國伯樂公司；SOD 試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 方法

1.4.1 SOD 基因表達譜分析采用基因表達譜數(shù)據動態(tài)分析(gene expression profiling interactive analysis，GEPIA)數(shù)據庫分析SOD在肺鱗癌、肺腺癌等不同腫瘤組織中的表達情況。

1.4.2 實驗方法所有患者治療前采集5 mL空腹靜脈血，抗凝，室溫2 000 r/min 離心20 min，分離血清。WST-1法檢測SOD活力，實驗步驟嚴格按照說明書進行操作。

1.4.3 療效判斷根據實體瘤療效評價標準(RECIST 1.1)進行療效評估，分為完全緩解(complete response，CR)、部分緩解(partial response，PR)、疾病穩(wěn)定(stable disease， SD)、 疾 病 進 展 (progressive disease，PD)。本研究中有效(effective)包括CR、PR 和SD，無效(failure)為PD。

1.4.4 隨訪采用電話和復查方式進行隨訪調查，每月隨訪一次，隨訪截止日期為2020年1月15日?？偵嫫?overall survival，OS)為確診當天開始至患者死亡或隨訪結束為止。

1.4.5 觀察指標比較血清SOD 活力在晚期NSCLC患者和健康人群中及在肺鱗狀細胞癌和肺腺癌患者中的差異；以血清SOD活力的均數(shù)為參考將晚期NSCLC患者分為低活力組(≤均數(shù))和高活力組(＞均數(shù))，分析血清SOD 活力與晚期NSCLC 臨床病理特征(性別、年齡、吸煙史、病理類型、病理分級、TNM分期)、療效和OS的關系。

1.4.6 統(tǒng)計學方法所有數(shù)據采用SPSS 26.0 軟件進行處理，計量資料用xˉ±s表示。組間比較用t檢驗，SOD 活力與臨床病理參數(shù)及療效的關系用χ2檢驗，SOD活力與OS分析用Kaplan-Miere法并進行Log-rank檢驗，相關性檢驗用Spearman相關分析。以α=0.05為檢驗水準。

2 結 果

2.1 SOD在不同腫瘤中的表達譜分析

GEPIA在線分析結果顯示，在33類腫瘤中，19類腫瘤組織中SOD 表達異常，其中2 類呈增高趨勢，17類呈降低趨勢(見圖1)。肺鱗狀細胞癌(lung squamous cell carcinoma，LUSC)組織中SOD 表達水平的中位數(shù)為9.38，低于正常組織的151.84，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；肺腺癌(lung adenocarcinoma，LUAD)組織中SOD 表達水平的中位數(shù)為26.7，低于正常組織的150.75，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，見圖2)。

圖1 SOD在不同腫瘤中的表達譜分析

2.2 晚期NSCLC患者血清SOD活力分析

WST-1 法檢測SOD 活力顯示，174 例晚期NSCLC患者血清SOD 活力為(10.22±0.51) U/mL，低于對照組的(13.66±0.32) U/mL，差異有統(tǒng)計學意義(t=5.604，P＜0.05)；92例肺鱗狀細胞癌患者血清SOD活力為(10.57±0.67) U/mL，與82 例肺腺癌患者的(9.83±0.73) U/mL相比，差異無統(tǒng)計學意義(t=0.745，P＞0.05)。

圖2 SOD在肺鱗狀細胞癌和肺腺癌中的表達分析

2.3 晚期NSCLC 臨床病理特征與血清SOD 活力的關系

以晚期NSCLC 患者血清SOD 活力的均數(shù)為界限，將患者分為低活力組94 例和高活力組80 例，分析結果顯示不同年齡、性別、病理類型、TNM分期的SOD活力無顯著性差異(P均＞0.05)；而不同吸煙史和病理分級的SOD活力有顯著性差異(P均＜0.05，表1)。有吸煙史患者血清SOD 活力為(8.38±0.57) U/mL 低于無吸煙史患者的(12.95±0.76) U/mL，差異有統(tǒng)計學意義(t=4.904，P＜0.05)。病理分級中，兩兩比較結果顯示：低分化組患者SOD活力與中、高分化組有顯著性差異(P＜0.05)，而中分化組患者SOD 活力和高分化組無明顯差異(P＞0.05)，低分化組患者血清SOD活力為(9.01±0.74)U/mL，低于中高分化組的(11.30±0.67) U/mL，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.298，P＜0.05)。

表1 晚期NSCLC臨床病理特征與血清SOD活力的關系

2.4 晚期NSCLC 患者放化療聯(lián)合治療療效與血清SOD活力的關系

入組患者經放化療聯(lián)合治療，有效106 例，無效68例。經卡方檢驗發(fā)現(xiàn)，SOD低活力組和高活力組的放化療聯(lián)合治療療效有顯著性差異(P＜0.05，見表2)，經Spearman相關分析發(fā)現(xiàn)SOD活力與放化療聯(lián)合治療療效呈正相關(r=0.554，P＜0.05)。

表2 晚期NSCLC患者療效與SOD活力的關系

2.5 晚期NSCLC患者OS與血清SOD活力的關系

入組患者最長隨訪24 個月，最短隨訪12 個月。高活力組OS 的平均值為(17.81±1.28)個月，中位數(shù)為23 個月，高于低活力組 OS 的平均值(14.18±1.11)個月，中位數(shù)15.3 個月，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.231，P＜0.05，見圖3)。提示SOD活力可能與晚期NSCLC患者的OS有關，但無線性相關(r=0.045，P＞0.05)。

圖3 晚期NSCLC患者OS與血清SOD活力的關系

3 討 論

近年來，肺癌已成為我國發(fā)病率及死亡率均居首位的惡性腫瘤，且導致的早死、殘疾等疾病負擔亦呈上升趨勢，對人類危害嚴重[8]，其主要類型為NSCLC，因其在發(fā)病早期缺乏特異性，難以確診，失去手術最佳時機，晚期NSCLC患者的治療主要依靠放化療，但療效不佳，主要原因是腫瘤的復發(fā)和轉移。因此早期發(fā)現(xiàn)和提高療效成為延長NSCLC生存期的重要手段。氧化應激損傷DNA、引起脂質過氧化，最終造成組織細胞損傷，已發(fā)現(xiàn)其參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。SOD 作為參與氧化應激的主要抗氧化酶，在腫瘤發(fā)生發(fā)展和治療中的作用已備受關注。

SOD 是機體在生理狀態(tài)下產生的一種金屬蛋白酶，其能夠通過歧化作用有效清除超氧陰離子維持機體氧化和抗氧化的平衡，保護細胞免受氧化損傷。但在病理條件下，SOD表達異?；蚧钚援惓?，均可導致氧化應激的發(fā)生，引發(fā)多種疾病，腫瘤就是其中之一。本研究根據GEPIA 在線分析結果發(fā)現(xiàn)，在33類腫瘤中，19類腫瘤SOD表達異常，其中2類呈增高趨勢，17類呈降低趨勢，SOD在不同類型腫瘤中的表達有異質性；在肺鱗狀細胞癌和肺腺癌中均為低表達。而血清SOD因其標本容易獲得，其活力的高低能夠反映機體清除的能力，間接反映機體氧自由基的狀況及氧化損傷的程度，常被作為檢測指標。本研究也對血清SOD的活力展開探討。結果顯示，晚期NSCLC患者血清SOD活力明顯低于健康對照組，根據GEPIA在線結果，可能與SOD表達降低有關。這一結果與國內外學者關于腫瘤患者SOD水平的研究結果一致[1-4，6，9]。而且胡系偉[9]、孫軍等[6]研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者血清和肺癌組織中SOD 表達水平與病理類型無關，T3 和T4 期無顯著差異；本研究同樣發(fā)現(xiàn)，不同病理類型的晚期NSCLC 患者血清SOD 活力無顯著性差異，在Ⅲ期和Ⅳ期中亦無差異。本研究還發(fā)現(xiàn)SOD活力不受晚期NSCLC患者年齡、性別的影響，但受吸煙和病理分級的影響，吸煙可降低血清SOD活力，低分化的患者血清SOD活力也低，該結果與胡系偉、孫軍等的研究結果一致，他們認為SOD活力與分化程度呈正相關。此外，本研究的研究對象為晚期NSCLC 的患者，未包含Ⅰ期、Ⅱ期病例，故關于血清SOD活力與TNM分期的關系需進一步深入研究。而張威威等[4]研究結果顯示，肺癌血清SOD 水平與年齡、病理類型有關，與本結果存在差異，分析認為本研究中排除了同時患有高血壓[10]、糖尿病[11]兩種與年齡和SOD 水平相關疾病的NSCLC患者；其研究結果與性別無關，與本研究結果一致。綜合已有研究，提示血清SOD 參與了NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程。

本研究還顯示，血清SOD活力與晚期NSCLC患者放化療聯(lián)合治療療效和OS 有關。治療有效的晚期NSCLC患者血清SOD活力高于治療無效患者，SOD活力與放化療聯(lián)合治療療效呈正相關。血清SOD高活力組患者的OS 明顯高于低活力組。故本結果提示SOD或可作為評估療效和判斷預后的潛在指標。

綜上所述，SOD在晚期NSCLC患者的血清中呈低活性，可能與吸煙史、病理分級、療效和總生存期有關。血清SOD參與了NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程，有望成為評估療效和判斷預后的潛在指標。