李 鼎，郭珊珊

西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，西藏拉薩 850000

豬大腸桿菌是誘發(fā)仔豬消化道疾病、水腫病、黃痢疾的關(guān)鍵病菌，隨著生豬養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，因豬大腸桿菌引發(fā)小規(guī)模流行病的情況頻繁出現(xiàn)，由于疾病具有較高致死率，對養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖效益造成直接影響。目前，發(fā)病后多以抗生素控制病情發(fā)展，降低病死率，但長期使用抗生素，易出現(xiàn)耐藥性、藥物殘留等問題，并不利于生豬養(yǎng)殖的可持續(xù)發(fā)展。而中藥副作用小、性價比高，相關(guān)報道中對中藥在抑制豬大腸桿菌體外活性方面給予充分肯定[1]。本研究選擇5 種中藥復(fù)方，分析抑菌活性效果，以便推廣最佳復(fù)方。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究選擇5 種中藥復(fù)方，詳細(xì)內(nèi)容如下。復(fù)方①：黃連、白術(shù)、赤石脂、黃柏、防風(fēng)。復(fù)方②：黃連、白術(shù)、赤石脂、黃柏、黨參。復(fù)方③：黃連、魚腥草、赤石脂、黃柏，金銀花。復(fù)方④：黃連、黃芪、赤石脂、黃柏、白頭翁。復(fù)方⑤：黃連、板藍(lán)根、赤石脂、黃柏、魚腥草。

1.2 方法

培養(yǎng)基制?。哼x擇肉湯與營養(yǎng)瓊脂兩種培養(yǎng)基，利用純化水進(jìn)行提煉，保持培養(yǎng)基pH值在7.2～7.4范圍內(nèi)。

藥液制?。喊幢壤∷幉呐c水，提前用10 倍量水進(jìn)行藥材浸泡，時間為2 h，裝置三角燒瓶內(nèi)，利用電爐進(jìn)行加熱，持續(xù)微沸狀態(tài)2 h，利用紗布進(jìn)行過濾；過濾紗布厚度為8 層，濾出藥渣稱重，加入8 倍量水繼續(xù)加熱，維持煮沸狀態(tài)1 h，進(jìn)行過濾，獲取濃度為1 g/mL 藥液；對藥液pH 值進(jìn)行調(diào)整，最終值為7.3 時，進(jìn)入高壓滅菌環(huán)節(jié)；完成后使用冰箱進(jìn)行保存，溫度控制在4 ℃。

菌液制取：在培養(yǎng)基中接種菌種，放在37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)24 h，并將具有典型性與代表性菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中，放置在37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)18 h。

試驗方法：試驗采用試管二倍稀釋法，取11支試管，依次編號，先在試管1 中加劑量為2.0 mL肉湯培養(yǎng)基，將2.0 mL 中藥液加入試管1 中，按梯度進(jìn)行稀釋，稀釋至試管9 中取出2.0 mL 廢棄，試管10 為單純性肉湯培養(yǎng)基，作為陽性參照標(biāo)準(zhǔn)，試管11 中加入肉湯培養(yǎng)基與中藥液，混合后廢棄2.0 mL，作為陰性參照標(biāo)準(zhǔn)，每種復(fù)方按以上順序平行制取3 份[2]。將完成培養(yǎng)的菌液與無菌肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，比例為1:100，將細(xì)菌稀釋液按照0.1 mL 比例加入試管1 ～10 中，試管11 加入等劑量生理鹽水，基于恒溫環(huán)境下培養(yǎng)24 h。

1.3 觀察指標(biāo)

分析體外抑制豬大腸桿菌活性試驗結(jié)果，包括抑菌濃度與強度、殺菌濃度、藥物濃度與稀釋度、平均抑菌圈。其中試管11 內(nèi)無細(xì)菌，其它試管內(nèi)有細(xì)菌生長，則可通過細(xì)菌生長情況判斷抑菌濃度；利用管碟法進(jìn)行藥物敏感試驗，計算其抑菌直徑，其中抑菌圈直徑不同，抑菌強度也存在差異，在15 mm 以下為低敏、15 ～20 mm 內(nèi)為中敏、20 mm以上為高敏，未產(chǎn)生抑菌圈則代表不敏感[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

建立Excel 表格對所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

綜合來看，復(fù)方1 與復(fù)方2 具有良好的抑菌性與殺菌性，抑菌濃度均達(dá)到15.63 mg/mL，其余3種復(fù)方抑菌效果并不顯著，但有著相對較高的抑菌濃度與殺菌濃度；同時復(fù)方1 為中敏，平均抑菌圈范圍最大，因此，復(fù)方1 抑制體外豬大腸桿菌活性效果最佳。體外抑制豬大腸桿菌活性試驗結(jié)果如表1 所示。

表1 體外抑制豬大腸桿菌活性試驗結(jié)果

3 討論

中藥復(fù)方基于辨證施治理念可根據(jù)各類疾病臨床表現(xiàn)癥狀，予以針對性處方，直達(dá)病灶，消除疾病，并且基于辯證分析對藥物劑量進(jìn)行控制，其中利用多類藥物復(fù)雜化學(xué)成分與反應(yīng)，實現(xiàn)對多靶點的有效治療。而關(guān)于中藥在體外抑菌中的應(yīng)用是近年來中藥領(lǐng)域研究的重點與難點，但從現(xiàn)有研究成果來看，中藥在抑制體外細(xì)菌方面具有積極作用，從本次研究來看，5 種中藥復(fù)方基于科學(xué)性原則，每種藥物成分具有一定針對性，其中黃芪、黃連、黃柏、赤石脂、白頭翁、黨參、板藍(lán)根、金銀花等藥物多具有燥濕清熱、解毒止痢之功效，而中藥研究中發(fā)現(xiàn)清熱類藥物具有突出的抑菌作用[4]。本次研究結(jié)果顯示，5 種中藥復(fù)方均發(fā)揮了抑菌、殺菌作用，但由于成分各異，在效果上存在明顯差異，綜合統(tǒng)計數(shù)據(jù)來看，復(fù)方1 與復(fù)方2 具有良好的抑菌性與殺菌性，抑菌濃度均達(dá)到15.63 mg/mL，其余3 種復(fù)方抑菌效果并不顯著，但有著相對較高的抑菌濃度與殺菌濃度；同時復(fù)方1 為中敏，平均抑菌圈范圍最大，因此，復(fù)方1 抑制體外豬大腸桿菌活性效果最佳。

本次研究結(jié)果與王俊麗、張要齊等學(xué)者的研究結(jié)果相符，其研究中也從抗菌消炎、瀉火解毒、清熱燥濕等角度制取中藥復(fù)方藥液，其中7 種復(fù)方中，也以黃連、白術(shù)、赤石脂、黃柏、防風(fēng)效果最為突出[5]。

從本次中藥復(fù)方成分來看，多數(shù)復(fù)方中都有黃連、黃柏、黃芪、白術(shù)等藥物，而在復(fù)方1 中出現(xiàn)防風(fēng)，該藥物主要功效為勝濕止痛，常用于治療腹痛腹瀉，與白術(shù)配合可發(fā)揮健脾功效，通過健脾、調(diào)理氣機(jī)進(jìn)行腸道調(diào)節(jié)。

綜上所述，5 組中藥復(fù)方對體外抑制豬大腸桿菌活性都有一定作用，但綜合對比來看其中以黃連、白術(shù)、赤石脂、黃柏、防風(fēng)復(fù)方（復(fù)方1）效果最為突出，抑菌強度高、抑菌范圍廣，建議廣泛推廣。