張輝

【摘 要】 目的：研究分析中西藥聯(lián)合逆轉(zhuǎn)多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性的效果。方法：收集赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿對 MDR-PA的 抑菌作用，并測試赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn)。結(jié)果：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，五倍子和小檗堿可以顯著逆轉(zhuǎn) MDR-PA 的耐藥性，且P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義;同時亞胺培南和小檗堿聯(lián)合取得效果最強(qiáng)，孢他啶與五倍子聯(lián)合結(jié)果具有一定的效果。環(huán)丙沙星和中藥聯(lián)合無明顯作用，實(shí)驗(yàn)過程中未發(fā)現(xiàn)拮抗作用。結(jié)論：中西藥聯(lián)合逆轉(zhuǎn)多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性可以取得一定的效果，具有一定的推廣和應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 中西藥聯(lián)合;多重耐藥銅綠假單胞菌;耐藥性逆轉(zhuǎn)

為了研究分析中西藥聯(lián)合逆轉(zhuǎn)多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性的效果，本次研究選取了赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿等五種中藥聯(lián)合西藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。詳情可見正文。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株

本次研究的菌株來源為2017年4月至2018年4月臨床分離鑒定的菌株，排除剔除重復(fù)分離菌株后共有多重耐藥銅綠假單胞菌（MDR-PA）50株，MDR定義為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）。對常見的抗菌藥物不敏感。

1.2 中藥水煎劑

本次研究使用的中藥水煎劑主材料為赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草，均于養(yǎng)和堂藥房進(jìn)行采購），小檗堿來源為中國藥品生物檢定所。

1.3 方法

本次研究中草藥抗菌實(shí)驗(yàn)使用中草藥抗菌實(shí)驗(yàn)試管法，應(yīng)用K-B法完成逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性實(shí)驗(yàn)，采用棋盤格法進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn)。

1.3.1 藥液倍比稀釋和加菌

藥液的倍比稀釋使用2倍稀釋法，使1至10管含有倍比稀釋的藥液（1：2，1：4，1：8等系列藥液）。MDR-PA菌株使用生理鹽水調(diào)節(jié)其至0.5麥?zhǔn)蠞舛龋?.5×108CFU/ml），在藥液稀釋30倍后，向兩倍稀釋完成的藥液1～11支試管置入100μl菌懸液，最終接種量為5×105CFU/ml，設(shè)置第十一管為陽性對照管，第十二管不加菌，設(shè)置為陰性對照管。

1.3.2 逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性試驗(yàn)

將赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿原液配制為低于最低抑菌濃度的藥液，將MDR-PA置于各藥液中，在35℃的環(huán)境下培育一天左右后利用生理鹽水離心洗滌配制為0.5麥?zhǔn)蠞舛染海琈H平板上使用K-B法完成藥敏試驗(yàn)，同時以原菌株藥敏試驗(yàn)為陰性對照，比較逆轉(zhuǎn)完成后抑菌圈直徑大小。

1.3.3 中西藥聯(lián)合藥敏試驗(yàn)

聯(lián)合藥敏試驗(yàn)采用棋盤格微量稀釋法完成，研究過程中共采用九個稀釋度，其中最高濃度為其MIC的4倍，依次倍比稀釋為1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256倍濃度，藥物分別在96孔培養(yǎng)板上按縱列、橫列進(jìn)行聯(lián)合。實(shí)驗(yàn)中接種菌量控制在5×105CFU/ml，于35℃的環(huán)境下孵育一天后觀察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 五種中草藥對多重耐藥菌逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性結(jié)果

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)抗菌紙片為阿米卡星時，赤芍最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（14.39±1.57）mm，五倍子最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（16.39±1.05）mm，野菊花最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（15.30±1.05）mm，魚腥草最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（15.09±1.01）mm，小檗堿最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（15.12±0.99）mm，陰性對照組為（15.05±0.92）mm。當(dāng)抗菌紙片為慶大霉素時，赤芍最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（8.09±1.00）mm，五倍子最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（9.14±1.08）mm，野菊花最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（8.17±0.85）mm，魚腥草最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（8.12±0.69）mm，小檗堿最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（10.11±0.99）mm，陰性對照組為（7.85±0.56）mm。當(dāng)抗菌紙片為哌拉西林時，赤芍最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（9.30±2.42）mm，五倍子最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（10.85±1.85）mm，野菊花最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（9.30±1.64）mm，魚腥草最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（8.12±0.64）mm，小檗堿最低濃度的中藥逆轉(zhuǎn)后的直徑為（10.13±0.89）mm，陰性對照組為（9.30±2.01）mm。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，五倍子與小檗堿對 MDR-PA 逆轉(zhuǎn)前后數(shù)據(jù)差異較大，具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05可以發(fā)揮一定程度逆轉(zhuǎn)作用。

赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星進(jìn)行聯(lián)合藥敏試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，亞胺培南和小檗堿聯(lián)合取得效果最強(qiáng)，18 株協(xié)同，12 株相加;頭孢他啶與五倍子聯(lián)合結(jié)果為9 株協(xié)同，15株相加;環(huán)丙沙星和赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿聯(lián)合無明顯作用，芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星聯(lián)合未發(fā)現(xiàn)拮抗作用。

3 討論

近些年由于廣譜抗生素碳青霉烯類藥物的濫用，多重耐藥菌不斷增加甚至出現(xiàn)泛耐藥菌株，相關(guān)藥物隨著時間的推移治療效果逐漸降低，新藥的研發(fā)速度甚至無法追上細(xì)菌耐藥的速度，為相關(guān)的治療工作帶來了極大的困難。

本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)亞胺培南和小檗堿聯(lián)合取得效果最強(qiáng)，18 株協(xié)同，12 株相加;頭孢他啶與五倍子聯(lián)合結(jié)果為9 株協(xié)同， 15 株相加;環(huán)丙沙星和赤芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿聯(lián)合無明顯作用，芍、五倍子、野菊花、魚腥草、小檗堿和頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星聯(lián)合未發(fā)現(xiàn)拮抗作用。

綜上所述，中西藥聯(lián)合逆轉(zhuǎn)多重耐藥銅綠假單胞菌抗菌活性可以取得一定的效果，中西藥聯(lián)合可以有效提高抗菌治療相關(guān)工作效果。

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