劉愛峰， 王 平， 張 超， 張君濤， 鞏樹偉， 陳繼鑫

膝骨性關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis, KOA）是中老年人的常見病、多發(fā)病，隨著社會老齡化進程的加劇，該病將來會成為困擾中老年人群的主要疾病之一[1]，因此對該病研究非常有意義。雖然當(dāng)前中西醫(yī)的臨床治療方法眾多，但均不能根除疾病[2]，即使臨床癥狀可以得到緩解，但患者也無法擺脫向晚期發(fā)展的最終趨勢，而對保守治療效果不理想的患者，大多只能通過手術(shù)的方式進行治療[3]，而手術(shù)治療具有創(chuàng)傷大、風(fēng)險高、費用高的問題。目前很多研究集中在膝關(guān)節(jié)軟骨的再生與修復(fù)上，通過前期的研究發(fā)現(xiàn)氧化石墨烯（graphene oxide, GO）顆粒潤滑劑能通過潤滑作用促進KOA軟骨細胞的修復(fù)，而臍帶間充質(zhì)干細胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSC）是目前研究的熱點，其具有定向分化的潛能。

本課題組前期實驗已經(jīng)證明將GO注射于大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)后，其心臟、肝臟和腎臟的病理均未見異常，也沒有發(fā)現(xiàn)病理滲出液，說明GO對大鼠未發(fā)生肝腎功能損害及組織損傷。且本實驗前期通過體外培養(yǎng)已經(jīng)證實了GO與UCMSC的生物相容性，并且初步探索了適宜的劑量濃度，通過關(guān)節(jié)腔注射的方式也安全易操作。本研究利用GO顆粒潤滑劑搭載UCMSC來改善KOA關(guān)節(jié)腔內(nèi)的局部微環(huán)境，通過利用不同方法制備的KOA動物模型驗證其有效性，以期為治療KOA尋求新方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及設(shè)備 GO顆粒、UCMSC、透明質(zhì)酸(HA)、一氧化氮（NO）檢測試劑盒、白細胞介素-6（IL-6）試劑盒、腫瘤壞死因子（TNF）-α試劑盒、GAG試劑盒、COL-II試劑盒(美國CCC公司)；Micro-CT（德國Siemens公司），離心機（美國Thermo Fisher Scientific公司），酶標(biāo)儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）。實驗所選用的動物均來自天津中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供的12周雄性新西蘭兔64只（SCXK津2016-0001），體質(zhì)量2kg左右，培養(yǎng)環(huán)境為清潔級。1.2 GO與UCMSC的體外共培養(yǎng)

1.2.1 GO與UCMSC的生物相容性 觀察GO對UCMSC的細胞毒性，具體方法為：取P3代UCNSC細胞和GO固體顆粒，并進行分組培養(yǎng)觀察，對照組為單純UCMSC培養(yǎng)組，UCMSC濃度均為5.0×105MSC/mL；實驗組為UCMSC+GO聯(lián)合培養(yǎng)組，細胞濃度同樣為5.0×105MSC/mL；GO顆粒質(zhì)量為5 mg，相對混勻后接種到24孔板。在37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，連續(xù)觀察并拍照記錄。

1.2.2 UCMSC與不同濃度GO的體外培養(yǎng) 將濃度為8.0×104/mL的UCMSC分別與濃度為30 mg/mL、10 mg/mL、300 μg/mL、200 μg/mL、100 μg/mL、30 μg/mL、15 μg/mL的 GO 納 米顆粒進行體外培養(yǎng)，取P3代臍帶UCMSC與GO混合后接種到24孔板，每孔接種密度為5.0×104/mL，每個濃度平行接種3孔。在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，連續(xù)觀察并拍照記錄。

1.2.3 不同濃度UCMSC與GO的體外培養(yǎng) 將濃度分別為8×104/mL、4×104/mL、2×104/mL的UCMSC分別與濃度為30 μg/mL的GO納米顆粒進行體外培養(yǎng)，取P3代臍帶UCMSC與GO混合后接種到12孔板，每孔接種100 μL，每個濃度平行接種4孔。在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，連續(xù)觀察并拍照記錄。

1.2.4 UCMSC與GO顆粒潤滑劑的體外共培養(yǎng)UCMSC接種密度2×105/mL，GO顆粒潤滑劑選用混合濃度為15 μg/mLGO+0.5%HA與30 μg/mLGO+0.25%HA；24孔板每孔接種1 mL；在37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，連續(xù)觀察并拍照記錄。觀察GO顆粒潤滑劑對UCMSC體外存活影響的情況：UCMSC濃度為5×106/mL，分別接種于無培養(yǎng)基的普通培養(yǎng)皿中，一組添加生理鹽水5 mL，另一組添加30 μg/mLGO+0.25%HA的GO顆粒潤滑劑5 mL，室溫下過夜培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計UCMSC的存活率。

1.3 實驗造模 通過改良Hulth+軟骨缺損以及改良木瓜蛋白酶控釋劑注射的方法建立KOA動物模型[4-5]，具體造模方法如下：

1.3.1 改良Hulth+軟骨損傷模型 將動物稱重后以水合氯醛溶液（3 mL/kg）麻醉，然后進行右膝關(guān)節(jié)的備皮、消毒，將其仰臥于手術(shù)臺上，固定四肢。在無菌條件下取右膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)縱切口長約2 cm，逐層切開顯露膝關(guān)節(jié)腔，然后切斷前交叉韌帶，切除內(nèi)側(cè)半月板，制作關(guān)節(jié)不穩(wěn)模型。利用3.5 mm直徑圓形打孔器對暴露的股骨內(nèi)側(cè)髁表面軟骨制作圓形軟骨缺損區(qū)域（直徑3.5 mm，深度3 mm）。生理鹽水沖洗并取出破碎軟骨組織后，縫合傷口。術(shù)后每只動物給予4U慶大霉素1 mL，連續(xù)3 d預(yù)防感染。術(shù)后不固定傷肢，自由活動及進食。

1.3.2 改良木瓜蛋白酶控釋劑模型 將動物稱重后以水合氯醛溶液（3 mL/kg）麻醉，將35%濃度的帕洛沙姆作為載藥體加載4%的木瓜蛋白酶，制備成溫敏型原位凝膠控釋注射劑，注射劑量標(biāo)準(zhǔn)按0.05 mL（1.6U）/關(guān)節(jié)。將注射劑從實驗兔的右膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)或外側(cè)間隙進入，回抽無血性液體后將木瓜蛋白酶混合液注射入膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)。將完成注射后的實驗兔的雙膝關(guān)節(jié)及以下部分放入自制加熱箱內(nèi)，箱內(nèi)溫度控制在50 ℃，加熱時間為2 h。加熱期間，注意箱內(nèi)溫度計溫度，始終保持在50 ℃左右，同時保證雙膝關(guān)節(jié)以上的部分不受到加熱影響。2 h后造模結(jié)束，將實驗兔取出，自由活動，正常食水。.

1.4 實驗分組 本研究設(shè)計遵循實行“3R原則”包括實驗動物的替代、減少和優(yōu)化原則。利用改良Hulth+軟骨缺損以及改良木瓜蛋白酶控釋劑注射兩種不同方法建立兩組實驗動物模型，分別為改良Hulth+軟骨缺損組，共制作32只，以軟骨損傷為主要病理表現(xiàn)，繼發(fā)關(guān)節(jié)內(nèi)炎性改變。另一組為改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組，同樣制作32只，以軟骨細胞變性壞死，進而誘發(fā)關(guān)節(jié)內(nèi)炎性改變。

以上兩組動物共計64只，造模過程順利，沒有出現(xiàn)動物死亡情況。每組32只動物模型，分為空白對照組8只，治療實驗組24只。實驗組根據(jù)治療方法的不同將實驗組分為3組：GO顆粒治療組（GO組）、UCMSC治療組（UCMSC組）、GO顆粒載UCMSC治療組（GO+UCMSC組），每組各8只。

1.5 實驗方法

1.5.1 治療方法 GO組利用1 mL注射器于動物模型的右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.5 mL的GO顆粒潤滑劑，濃度為30 μg/mLGO+0.25%HA；UCMSC組利用1 mL注射器于動物模型的右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.5 mL的UCMSC，濃度為5×106個細胞/mL；GO+UCMSC組利用1 mL注射器于動物模型的右膝關(guān)節(jié)腔注射0.5 mL的GO顆粒潤滑劑搭載UCMSC混合懸液，GO顆粒潤滑劑濃度為30 μg/mLGO+0.25%HA，UCMSC濃 度 為 5×106個細胞/mL。

1.5.2 操作方法 關(guān)節(jié)腔注射時首先用移液器從實驗前期制備好的GO顆粒劑、UCMSC及GO顆粒劑搭載UCMSC混合懸液中抽取并分裝至各組1 mL注射器中，操作過程中注意注射液、無菌槍頭及無菌注射針頭不要被污染。然后利用動物固定架將動物固定，助手將右髖關(guān)節(jié)外展外旋以暴露膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)，同時屈曲右膝關(guān)節(jié)90°左右，操作者對膝關(guān)節(jié)前內(nèi)側(cè)區(qū)域進行碘伏消毒。最后操作者從右膝脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)上方1 cm左右處進針，阻力感消失后進行注射。在操作期間，助手要注意對動物右下肢的固定力度不要過大，以免造成損傷，如果動物肌肉緊張明顯，可以先行0.25%的利多卡因0.1 mL局部浸潤麻醉。

1.5.3 治療周期 所有關(guān)節(jié)腔注射治療均為1次，改良Hulth+軟骨缺損組造模后1個月開始治療，治療觀察期8周，改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組造模后1周開始治療，治療觀察期8周。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 血清學(xué)指標(biāo)檢測 治療8周后，在無菌條件下分別抽取兩組實驗KOA動物模型耳緣靜脈血5 mL，注入肝素化離心管中，以3000 r/min離心10 min收集血清，于-20 ℃保存。采用ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗法[6]檢測血清IL-6、TNF-α、NO、糖胺聚糖（GAG）和II型膠原蛋白（COL-II）的含量。

1.6.2 病理學(xué)檢測 空氣栓塞法處死動物，取完整右膝關(guān)節(jié)，去除周圍皮膚、肌肉，暴露股骨髁軟骨退變?nèi)睋p區(qū)域，切片，包埋，進行HE染色病理學(xué)檢測。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料用表示，多組比較采用方差分析，進一步兩兩比較用LSD-t檢驗；檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 GO與UCMSC的體外共培養(yǎng)情況

2.1.1 UCMSC與GO顆粒體外培養(yǎng)情況UCMSC與GO與共培養(yǎng)24 h，UCMSC正常生長，GO沒有引起UCMSC細胞的大量死亡，GO顆粒開始聚集成團，UCMSC細胞有向GO聚集的傾向，并將GO顆粒逐步包裹起來（圖1）。

UCMSC與GO與共培養(yǎng)72 h，UCMSC正常生長，GO沒有引起UCMSC細胞的大量死亡，觀察到UCMSC細胞進一步向GO聚集的傾向，并向GO顆粒攀爬將其包裹成團，UCMSC開始立體生長，并刺激增殖（圖2）。UCMSC與GO與共培養(yǎng)7 d，UCMSC正常生長，GO沒有引起UCMSC細胞的大量死亡，觀察到UCMSC細胞基本全部向GO聚集，將GO顆粒嚴(yán)密包裹起來，形成GO+UCMSC的集團結(jié)構(gòu)（圖3）。

圖1 UCMSC與GO共培養(yǎng)24h（×40）

圖2 UCNSC與GO共培養(yǎng)72h（×40）

圖3 UCMSC與GO共培養(yǎng)7 d

2.2 血清NO檢測結(jié)果 組內(nèi)比較：改良Hulth+軟骨缺損組中，GO+UCMSC組血清NO平均值（17.624±0.127）低于空白組（22.097±0.352），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清NO平均值（21.020±0.026）與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.064），GO組血清NO平均值（21.436±0.031）與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.1925），GO+UCMSC組與UCMSC組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組中，GO+UCMSC組血清NO平均值（17.799±0.049）低于空白組（23.662±0.056），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清NO平均值（19.424±0.046）與GO組血清NO平均值（20.544±0.085）均低于空白組（P<0.05）；GO+UCMSC組低于UCMSC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。組間比較：GO+UCMSC組、UCMSC組比較及GO組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.029），見圖 4。

圖4 治療后血清NO結(jié)果（ng/mL）

2.3 血清COL-II檢測結(jié)果 組內(nèi)比較：改良Hulth+軟骨缺損組中，GO+UCMSC組血清COL-II平 均 值（19.372±0.063） 高 于 空 白 組（13.475±0.342），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清COL-II平均值（15.589±0.063）高于空白組（P<0.01），GO組血清COL-II平均值（14.127±0.102）與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；GO+UCMSC組高于UCMSC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組中，GO+UCMSC組血清COL-II平均值（16.257±0.416）高于空白組（12.253±0.147），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清COL-II平均值（14.429±0.092）與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），GO組血清COL-II平均值（13.644±0.028）與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意 義（P>0.05）；GO+UCMSC組 與 UCMSC組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。組間比較：GO+UCMSC組比較、UCMSC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），GO組比較、空白組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見圖5。

2.4 血清GAG檢測結(jié)果 組內(nèi)比較：改良Hulth+軟骨缺損組中，GO+UCMSC組血清GAG平均值（37.439±2.155）高于空白組（23.832±0.891），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清GAG平均值（29.022±0.973）高于空白組（P<0.05），GO組血清GAG平均值（26.342±1.042）與空白組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；GO+UCMSC組高于UCMSC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組中，GO+UCMSC組血清GAG平均值（26.554±0.450）高于空白組（18.709±0.552），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清GAG平均值（24.028±0.675）高于空白組（P<0.01），GO組血清GAG平均值（22.689±0.641）高 于 空 白 組（P<0.05）；GO+UCMSC組 高 于UCMSC組（P<0.05）。組間比較：GO+UCMSC組比較、空白組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組比較、GO組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見圖6。

2.5 血清IL-6檢測結(jié)果 組內(nèi)比較：改良Hulth+軟骨缺損組中，GO+UCMSC組血清IL-6平均值（7.426±0.294）低于空白組（16.082±0.323），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清IL-6平均值（9.668±0.194）低于空白組，GO組血清IL-6平均值（10.957±0.343）低于空白組；GO+UCMSC組低于UCMSC組（P<0.01）。改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組中，GO+UCMSC組血清IL-6平均值（8.680±0.242）低于空白組（18.367±0.861），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組 血 清 IL-6平 均 值（9.506±0.123）低于空白組（P<0.01），GO組血清IL-6平均值（10.002±0.191） 低 于 空 白 組（P<0.01）；GO+UCMSC組低于UCMSC組（P<0.05）。組間比較：GO+UCMSC組比較、空白組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），UCMSC組比較、GO組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見圖7。

圖5 治療后血清COL-II結(jié)果（ng/mL）

圖6 治療后血清GAG結(jié)果（ng/mL）

圖7 治療后血清IL-6結(jié)果（ng/mL）

2.6 血清TNF-α檢測結(jié)果 組內(nèi)比較：改良Hulth+軟骨缺損組中，GO+UCMSC組血清TNF-α平均值（5.139±0.183）低于空白組（9.466±0.177），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組 血 清 TNF-α 平 均 值（6.109±0.044） 低 于空 白 組（P<0.01），GO 組 血 清 TNF-α 平 均 值（8.447±0.113） 低 于 空 白 組（P<0.01）；GO+UCMSC組低于UCMSC組比較（P<0.01）。改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組中，GO+UCMSC組血清TNF-α平均值（6.210±0.058）低于空白組（10.013±0.197），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），UCMSC組血清TNF-α平均值（6.856±0.160）低 于 空 白 組（P<0.01），GO 組 血 清 TNF-α 平均值（8.891±0.188）低于空白組（P<0.01）；GO+UCMSC組低于UCMSC組（P<0.05）。組間比較：GO+UCMSC組、空白組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），UCMSC組比較、GO組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見圖8。

2.7 HE病理學(xué)檢測結(jié)果 使用HE染色股骨內(nèi)側(cè)髁關(guān)節(jié)軟骨，發(fā)現(xiàn)A組軟骨缺損程度及范圍較B組呈現(xiàn)明顯、加重趨勢，損傷區(qū)域可累及整個關(guān)節(jié)軟骨，并且主要累及中層及深層。B組關(guān)節(jié)軟骨缺損呈現(xiàn)不規(guī)則分布，此時染色減少，往往伴隨著局部細胞數(shù)量的減少，兩組比較有明顯差異。

在改良Hulth+軟骨缺損組中，UCMSC+GO、UCMSC、GO、空白組的軟骨修復(fù)效果呈梯度降低，其中UCMSC+GO組修復(fù)效果最好，軟骨厚度最厚，與周圍軟骨接觸較緊密，并且軟骨細胞呈現(xiàn)一定的分層趨（圖9）勢。在改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組中，UCMSC+GO、UCMSC、GO、空白組的軟骨修復(fù)效果呈梯度降低，其中UCMSC+GO組修復(fù)效果最好，軟骨厚度最厚，與周圍軟骨接觸較緊密，并且軟骨細胞呈現(xiàn)一定的分層趨勢（圖10）。

圖9 改良Hulth+軟骨缺損組病理組織學(xué)觀察結(jié)果（HE染色×40）

圖10 改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組病理組織學(xué)觀察結(jié)果（HE染色×40）

3 討論

3.1 軟骨修復(fù)對微環(huán)境改善 關(guān)節(jié)軟骨的修復(fù)是KOA近些年研究的熱點，只有軟骨得到有效修復(fù)才能說明對該病進程的實質(zhì)性改變。隨著近年來隨著干細胞技術(shù)的逐步成熟，關(guān)于干細胞介導(dǎo)人體組織損傷修復(fù)的研究甚至是臨床報道越來越多，而UCMSC作為組織工程中理想的種子細胞已經(jīng)被證實具有修復(fù)軟骨的能力。Bastos等[7]利用KOA患者自體髂骨骨髓提取培養(yǎng)的BMSC進行關(guān)節(jié)腔注射治療，觀察12個月后發(fā)現(xiàn)患者的膝關(guān)節(jié)癥狀及關(guān)節(jié)功能都有明顯改善。KOA的發(fā)病從根本上來說還是力學(xué)環(huán)境改變引起軟骨損傷，所以力學(xué)因素是比較關(guān)鍵的兩方面，由于MSC不能對關(guān)節(jié)軟骨表面產(chǎn)生力學(xué)干預(yù)。GO具有很好的生物相容性和安全性，通過前期研究發(fā)現(xiàn)其可以在關(guān)節(jié)面形成一層保護層，改變軟骨表面的摩擦系數(shù)。GO屬于石墨烯的衍生物，是由天然石墨經(jīng)強氧化劑氧化而來的一種層狀納米級材料，其表面具有大量的含氧官能團，有著良好的生物相容性[8]，還能夠通過靜電等作用與蛋白質(zhì)相結(jié)合，因此GO一直被廣泛應(yīng)用到藥物或蛋白的傳遞、生物傳感器及組織再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域[9-11]。通過本研究發(fā)現(xiàn)單純的GO也能降低兩種KOA動物模型中血清中的IL-6和TNF-α，降低其炎癥反應(yīng)。UCMSC具有來源廣泛、取材安全方便、不違反倫理原則、低免疫源性、高增殖與多能分化等特性等優(yōu)勢[12]。通過本研究發(fā)現(xiàn)UCMSC能降低兩種KOA動物模型中血清中的IL-6和TNF-α，降低其炎癥反應(yīng)，而且能降低血清中GAG的含量促進軟骨的修復(fù)。本研究將GO顆粒潤滑劑與UCMSC聯(lián)用，GO顆粒潤滑劑形成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)支架，具有更大的接觸表面積，可以將UCMSC牢牢吸引在自身周圍，并讓其在自身支架結(jié)構(gòu)中黏附、伸展、存活、增殖，在低濃度HA的作用下均勻分布，制備成一種良好的復(fù)合結(jié)構(gòu)，可以用于關(guān)節(jié)腔內(nèi)封閉環(huán)境的治療，在改善潤滑環(huán)境的同時，又可以發(fā)揮MSC的調(diào)節(jié)免疫作用來改善生化微環(huán)境[13]，并且MSC還可以一定程度上修復(fù)損傷的組織結(jié)構(gòu)[14]。這有說明臨床醫(yī)生力求恢復(fù)關(guān)節(jié)力學(xué)平衡和解剖結(jié)構(gòu)，然后生物學(xué)才能發(fā)揮作用。

3.2 退行性骨關(guān)節(jié)炎動物模型干預(yù)效果 本實驗建立選擇兩種KOA動物模型，改良Hulth+軟骨缺損組的改良Hulth+軟骨缺損模型主要運動損傷模型，針對目前多發(fā)韌帶撕裂、半月板破壞等，這種損傷會引起關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥反應(yīng)逐漸發(fā)展成為KOA，研究結(jié)果說明該類GO顆粒的三維網(wǎng)狀支架作用就比較重要，可以讓UCMSC更好地黏附著在軟骨缺損區(qū)域，從而生長與增殖?？梢宰孶CMSC更好地附著在軟骨缺損區(qū)域。改良木瓜蛋白酶控釋劑關(guān)節(jié)注射組模型屬于化學(xué)因子誘導(dǎo)的軟骨退變模型，可見軟骨不同程度的壞死，比較接近臨床中退行性骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制，實驗的結(jié)果兩組 中 GO+UCMSC組 血 清 NO、COL-II、GAG、IL-6、TNF-α與空白組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，也說明利用GO顆粒潤滑劑搭載UCMSC對其有較好的治療效果[15]。氧化石墨烯載UCMSC能促進兩種KOA動物模型軟骨細胞分泌，降低關(guān)節(jié)內(nèi)炎性水平，起到軟骨修復(fù)作用。固態(tài)潤滑改善力學(xué)微環(huán)境，干細胞干預(yù)改善生物學(xué)微環(huán)境，共同作用對兩種動物模型均起到很好的修復(fù)效果，間接為臨床上兩種損傷模式所致的退行性骨關(guān)節(jié)炎治療提供診治思路[16]。

GO顆粒潤滑劑搭載UCMSC是結(jié)合了二者的優(yōu)勢，建立比傳統(tǒng)支架搭載系統(tǒng)的一種新的組織工程研究，但本研究尚屬于初步探索階段，目前只證明GO顆粒潤滑劑搭載UCMSC的生物相容性以及對KOA動物模型軟骨修復(fù)作用，且沒有發(fā)生不良反應(yīng)，研究還存在許多不足及需要深入的地方。本實驗中將氧化石墨烯顆粒注射于膝關(guān)節(jié)腔后，本應(yīng)可在股骨髁大體觀察中看到GO黑色顆粒，但并未觀察到GO顆粒，說明GO在關(guān)節(jié)腔內(nèi)進行了代謝，此為今后研究的重點。