秦勇 王超君 徐勝前 潘德標(biāo) 王世

【摘 要】目的：探究G蛋白耦聯(lián)雌激素受體GPER在肝臟缺血再灌注損傷中的表達(dá)及調(diào)控機制研究。方法：選取2-3月齡成年雄性SD大鼠30只（體重約350±20g）構(gòu)建大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型，分為假手術(shù)組（PO組）、肝缺血再灌注組（IR組）及雌激素預(yù)處理+肝缺血再灌注組（IRE組）各10只。采用按體重經(jīng)腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小時處理大鼠，造模36h后，比較分析在肝臟缺血再灌注損傷中，G蛋白耦聯(lián)雌激素受體GPER的表達(dá)和調(diào)控機制。結(jié)果：與對照組相比，術(shù)后轉(zhuǎn)氨酶明顯較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）、炎癥因子TNF-α及IL-6水平下調(diào)，此外，GPER的表達(dá)在模型組中顯著下調(diào)，雌激素預(yù)處理上調(diào)GPER的表達(dá)水平。結(jié)論：在肝臟缺血再灌注損傷中采用雌激素預(yù)處理改善大鼠肝功能，提高G蛋白耦聯(lián)雌激素受體GPER的表達(dá)，降低TNF-α及IL-10水平，減輕肝臟缺血再灌注損傷，安全有效，具有臨床應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】肝臟缺血再灌注損傷;調(diào)控機制;G蛋白耦聯(lián)雌激素受體GPER

【中圖分類號】R843【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）10-30--02

在大腦中雌激素發(fā)揮關(guān)鍵性作用，能夠調(diào)節(jié)痛覺和情緒，以及突觸可塑性和認(rèn)知功能，大多經(jīng)雌激素核受體ERβ和ERα介導(dǎo)調(diào)控[1]，雌激素也能經(jīng)膜結(jié)合雌激素受體，如出現(xiàn)慢性疼痛和情緒障礙等，大腦的神經(jīng)系統(tǒng)功能受G蛋白耦聯(lián)雌激素受體（GPR30）介導(dǎo)[2]。另外，也有研究表明雌激素在腸缺血[3]、腦缺血[4]以及腎臟缺血[5]的過程中具有顯著的保護(hù)作用。然而，雌激素在缺血再灌注損傷中發(fā)揮的作用及受體相關(guān)機制仍不清楚。在本研究中，我們構(gòu)建了大鼠肝臟缺血再灌注損傷模型并使用雌激素預(yù)處理，檢測了轉(zhuǎn)氨酶活性及炎癥因子TNF-α及IL-6水平，并探討了GPER的表達(dá)變化。旨在闡明G蛋白耦聯(lián)雌激素受體GPER在肝臟缺血再灌注損傷中的表達(dá)及調(diào)控機制。

1 資料與方法

1.1 選取2-3月齡性成熟的成年雄性SD大鼠30只（體重約350±20g），分為假手術(shù)組（PO組）、肝缺血再灌注組（IR組）及雌激素預(yù)處理+肝缺血再灌注組（IRE組）各10只。各組缺血再灌注后36h后各隨機選取5只存活大鼠，經(jīng)心臟穿刺采血檢測血清ALT、LDH、TNF-α及IL-6水平，并于肝中葉的相同部位取肝組織樣本檢測GPER的mRNA表達(dá)。

1.2 方法

術(shù)前12h禁食，腹腔內(nèi)注射1%戊巴比妥鈉溶液30mg/kg麻醉，上腹部正中切口開腹，斷離肝周韌帶后分離肝門部脈管，以無創(chuàng)傷小血管夾夾閉左外及中葉的肝動脈、門靜脈造成70%肝臟缺血，45min后重新開放血供并切除未阻斷血供的30%肝葉，造成肝切除肝缺血再灌注模型。雌激素處理組于造模前1小時按體重經(jīng)腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg，其余兩組則于術(shù)前1小時經(jīng)腹腔給予同等容積的生理鹽水。術(shù)后36 h收集血液及組織樣本進(jìn)行相關(guān)檢測。

1.3 觀察指標(biāo)：采用生化檢測試劑盒 （南京建成）檢測AST及ALT活性，ELISA試劑盒（南京建成）檢測NF-α及IL-6水平。采用熒光定量PCR檢測GPER的表達(dá);根據(jù)GPER在基因數(shù)據(jù)庫的序列信息，設(shè)計合成PCR引物：GPER-F：TCTAAACTGCGGTCAGATGTGGCT; GPER-R：TTTCCTGGTCGACGGTGTCAGAAA。抽提總RNA，采用Takara公司的cDNA Reverse Transcription Kit 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。采用Takara公司SYBR Green PCR MIX試劑盒及ABI 7300 Real time PCR系統(tǒng)擴增檢測。計算用內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)化的CT值并進(jìn)行mRNA表達(dá)分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理：選擇SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件實施數(shù)據(jù)分析，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）代表計量資料，選擇t檢驗檢測兩組間情況，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

雌二醇處理組與未處理組術(shù)后肝功能比較：采用按體重經(jīng)腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg于造模前1小時處理大鼠，與對照組相比，術(shù)后轉(zhuǎn)氨酶明顯較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此外，炎癥因子TNF-α及IL-6的表達(dá)水平在模型組中顯著上調(diào)，并被雌激素預(yù)處理顯著抑制（P<0.05），見表1。另外，GPER的mRNA表達(dá)在模型組中顯著下調(diào)（36.67%，相較于P0組），但被雌激素預(yù)處理顯著上調(diào)（78.49%，相較于P0組）（P<0.05）。

3 討論

此次研究中，采用按體重于造模前1小時經(jīng)腹腔給予17-β雌二醇4mg/kg處理大鼠，與假手術(shù)組相比，術(shù)后轉(zhuǎn)氨酶活性及炎癥因子的表達(dá)明顯較低。同時qRT-PCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GPER的表達(dá)在模型組中顯著下調(diào)，然而這一現(xiàn)象被雌激素預(yù)處理顯著改善。綜上所述，在肝臟缺血再灌注損傷中采用雌激素處理，能夠顯著改善大鼠的肝功能、降低炎癥因子TNF-α及IL-6水平、刺激雌激素受體表達(dá)，減輕肝臟缺血再灌注損傷，安全有效，具有臨床應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)

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