王守梅，周 睿，朱詩琦，朱美琪，方 媛，張樹輝

在日常病理制片過程中，病理工作人員有時(shí)會(huì)不戴手套進(jìn)行操作：把載玻片放入玻片打碼機(jī)中，把打印好的玻片擺放整齊，拿著載玻片將漂片機(jī)中的蠟片撈起等，使載玻片上沾上操作人員的指紋，使其與切片的病理組織一起進(jìn)行脫蠟和染色，為觀察和分析指紋經(jīng)HE染色后的形態(tài)和數(shù)量，本科室進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料隨機(jī)選取上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科3名技術(shù)人員分別在潔凈的載玻片上留下指紋，每人操作30張載玻片；貝索蘇木精染色液；貝索伊紅染色液；Leica ASP300全自動(dòng)脫水機(jī)、Leica EG1150石蠟包埋機(jī)、Leica RM2235石蠟切片機(jī)，Leica ST5020全自動(dòng)染色機(jī)、Leica CV5030封片機(jī)。

1.2 方法每名技術(shù)人員按以下3種方法各留下指紋10張載玻片，合計(jì)90張載玻片。(1)用力按指紋：將潔凈的載玻片放好，用大拇指和食指用力在載玻片上按下指紋，按滿整張載玻片。(2)輕輕留下指紋：將潔凈的載玻片放好，用大拇指和食指輕輕地劃過潔凈的載玻片，留下指紋。(3)盡量避免留下指紋：將潔凈的載玻片放好，用大拇指和食指拿著載玻片的兩個(gè)側(cè)面和號碼標(biāo)簽側(cè)，盡可能少地接觸載玻片，盡量避免留下指紋。HE染色過程分為：全程均戴無粉無菌醫(yī)用手套進(jìn)行HE操作和全程均不戴手套進(jìn)行HE操作。

1.3 HE染色將載玻片在70 ℃烘片機(jī)上烤片15 min，全自動(dòng)染封一體機(jī)(Leica ST5020全自動(dòng)染色機(jī)和Leica CV5030封片機(jī))進(jìn)行HE染色和封固：二甲苯10 min×3次，100%、95%、75%乙醇(固定各1 min)、流水沖洗1 min、蘇木精8 min、分化液20 s、流水沖洗3 min、藍(lán)化液1 min、流水沖洗3 min、伊紅1 min、75%乙醇1 min、95%乙醇1 min、100%乙醇1 min×2 次、二甲苯5 min×3次，封片后結(jié)束HE染色程序。

1.4 HE切片顯微鏡下粉染物數(shù)量比較將三種方法留下指紋的HE切片由兩名高級病理醫(yī)師鏡下閱片進(jìn)行粉染物數(shù)量打分。數(shù)量較小(每高倍視野≤1個(gè))為1分、數(shù)量一般(每高倍視野2～4個(gè))為2分、數(shù)量較多(每高倍視野≥5個(gè))為3分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平(α)為0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種方法留下的指紋在HE染色后載玻片上粉染物數(shù)量對比通過三種方法留下的指紋在HE染色后呈粉色，無明顯細(xì)胞核，稱之為粉染物，各組中粉染物在載玻片中均有出現(xiàn)，其中輕輕留下指紋組中的數(shù)量多于盡量避免留下指紋組，而用力按指紋組的數(shù)量明顯多于其他兩組(P<0.05，表1)。

表1 HE染色后載玻片上粉染物數(shù)量評分

2.2 三種方法留下的指紋在HE染色前、后載玻片上粉染物形態(tài)對比通過三種方法留下的指紋，染色前在顯微鏡下呈透明狀角化物，形態(tài)和大小不一；經(jīng)HE染色后呈粉色，無明顯細(xì)胞核，形態(tài)和大小不均一。用力按指紋組中粉染物數(shù)量較多且大小相差較大，形態(tài)也不一致；輕輕留下指紋組中的數(shù)量比用力按指紋組少，大小和形態(tài)較為一致；盡量避免留下指紋組中粉染物數(shù)量很少，大小和形態(tài)非常一致(圖1)。

①A①B①C①D①E①F②A②B②C②D

2.3 戴手套與否HE制片時(shí)粉染物數(shù)量對比本實(shí)驗(yàn)對比了戴手套與不戴手套操作進(jìn)行HE制片時(shí)的粉染物對比，發(fā)現(xiàn)不戴手套時(shí)很多切片上都出現(xiàn)粉染物(圖2)，而戴手套操

作時(shí)粉染物很少。這些粉染物的形態(tài)和大小，與指紋經(jīng)HE染色后的大小和形態(tài)相近。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)指紋經(jīng)HE染色后可以在載玻片上留下粉染物，操作時(shí)用力按指紋組比輕輕留下指紋組中的數(shù)量多，輕輕留下指紋組比盡量避免留下指紋組的數(shù)量多，可見不戴手套進(jìn)行病理制片時(shí)就算盡量避免也不能保證在切片上完全避免留下指紋和粉染物。粉染物的形態(tài)也與手上皮膚脫落的角化物相近，隨后本組經(jīng)過對比戴手套和不戴手套進(jìn)行病理制片發(fā)現(xiàn)不戴手套操作或多或少會(huì)出現(xiàn)粉染物，而戴手套操作時(shí)HE切片中粉染物則大大減少。

在粉染物的數(shù)量上發(fā)現(xiàn)，染色后的粉染物比染色前的碎片狀物明顯減少。這是因?yàn)橹讣y沒有很緊密地粘在載玻片上，經(jīng)過脫蠟和染色時(shí)會(huì)有部分碎片狀物脫落在二甲苯和乙醇等試劑中，所以最終的HE切片上粉染物數(shù)量較染色前減少了。

關(guān)于粉染物的成分說法不一，有人認(rèn)為是皮膚干燥脫落的上皮污染[1]，也有學(xué)者認(rèn)為這些粉色碎片是血漿或一些固定后會(huì)凝固的各種含蛋白質(zhì)的液體。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)與分析，作者推測這些粉染物有著不同的來源：其中一種為手上皮膚脫落的角化物，在常規(guī)制片中全程帶手套可大大減少粉染物的出現(xiàn)；但在制片全程戴手套的情況下還是會(huì)出現(xiàn)粉染物，此時(shí)粉染物很可能來源于送檢標(biāo)本中血漿或其他液體。而如果不戴手套進(jìn)行操作時(shí)，操作人員手不能抓在貼片的玻璃部分，應(yīng)統(tǒng)一抓在寫號碼的玻片部分，這樣也能減少粉染物的出現(xiàn)。

在日常工作中我們會(huì)遇到一些小問題，有時(shí)候會(huì)發(fā)現(xiàn)HE切片中會(huì)出現(xiàn)粉染物，有時(shí)候還會(huì)出現(xiàn)大小均一不透明的顆粒狀物，需要耐心且細(xì)心地去探索和發(fā)現(xiàn)。本科室將有粉醫(yī)用手套換成無粉醫(yī)用手套后，這些不透明的顆粒狀物就會(huì)消失，因此發(fā)現(xiàn)這些顆粒狀物是手套上的滑石粉。所以全程戴無粉無菌醫(yī)用手套進(jìn)行病理制片可以大大減少除送檢組織外的其他雜質(zhì)出現(xiàn)，同時(shí)戴手套也是對自身的生物安全保護(hù)。此外，我們還會(huì)發(fā)現(xiàn)切片有白色點(diǎn)狀或云霧狀不著色區(qū)域、石蠟污染和染料污染[2]等問題，這就要求操作人員一定要重視操作流程中的每個(gè)環(huán)節(jié)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)解決問題，避免問題的再次出現(xiàn)。